一种体外培养间充质干细胞的方法技术

本发明专利技术涉及细胞工程领域，公开了一种体外培养间充质干细胞的方法。本发明专利技术所述方法采用1.073g/cm3Percoll分离液通过梯度密度离心法从骨髓、脐血或脐带中分离得到单个核细胞，将单个核细胞接种至含体积百分比为10%胎牛血清的α-MEM培养液中于37℃、5%CO2浓度条件下进行贴壁培养，至出现贴壁细胞并呈现出成纤维细胞状即获得间充质干细胞。本发明专利技术所述培养方法无需加入马血清、I-肌醇、L-谷氨酰胺、巯基乙醇等成分，成本低廉、配置简便，且细胞活力更高，细胞扩增所需的周期缩短，优于现有Dexter-LTC培养体系，能够为相应的治疗和研究提供高活力细胞来源。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞工程领域，具体提供了。
技术介绍
间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)最初在骨髓中发现，随着干细胞技术的不断发展，人们发现脐血、脐带中也富含间充质干细胞。间充质干细胞是具有自我更新和多向分化潜能的多能干细胞，具有分泌造血生长因子、低免疫原性、易于外源基因转染和表达等优点，在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。目前，间充质干细胞采用Dexter-LTC培养体系(Dexter-type long-termcultures)培养:a -MEM+12.5% 胎牛血清 +12.5% 马血清 +0.2mmol/L 1-肌醇 +0.2mmol/L L-谷氨酰胺+10_4mol/L巯基乙醇，在此体系下培养出来的细胞符合间充质干细胞国际标准，这种方法也是本领域公认的、普遍的培养方法。但是，这种培养方法的细胞扩增周期较长，而且其培养基中除a-MEM基础培养基外还需要加入了马血清等本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种体外培养间充质干细胞的方法，其特征在于，采用1.073g/cm3Percoll分离液通过梯度密度离心法从骨髓、脐血或脐带中分离得到单个核细胞，将单个核细胞接种至含体积百分比为10%胎牛血清的α?MEM培养液中于37℃、5%CO2浓度条件下进行贴壁培养，至出现贴壁细胞并呈现出成纤维细胞状即获得间充质干细胞。

【技术特征摘要】
1.一种体外培养间充质干细胞的方法，其特征在于，采用1.073g/cm3Percoll分离液通过梯度密度离心法从骨髓、脐血或脐带中分离得到单个核细胞，将单个核细胞接种至含体积百分比为10%胎牛血清的a -MEM培养液中于37°C、5%C02浓度条件下进行贴壁培养，至出现贴壁细胞并呈现出成纤维细胞状即获得间充质干细胞。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述a-MEM培养液由以下组分组成: 无水氯化钙200mg/L、氯化钾400mg/L、无水硫酸镁97.67mg/L、氯化钠6800mg/L、磷酸二氢钠单水合物140mg/L、L-丙氨酸25mg/L、L-盐酸精氨酸126.98mg/L、L-天门冬酰胺50mg/L、L-天门冬氨酸30mg/L、L-盐酸半胱氨酸100mg/L、L_盐酸胱氨酸31.28mg/L、L_谷氨酸75mg/L、L-谷氨酰胺292mg/L、甘氨酸50mg/L、L_盐酸组氨酸41.88mg/L、L_异亮氨酸52.5mg/L、L-亮氨酸52.4mg/L、L-盐酸赖氨酸72.47mg/L、L-甲硫氨酸15mg/L、L-苯丙氨酸 32mg/L、L...

【专利技术属性】
技术研发人员：李忠俊，叶兴德，邓小军，冉茜，相丽欣，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学第二附属医院，
类型：发明
国别省市：