存活蛋白肽疫苗制造技术

本发明专利技术涉及治疗性疫苗，其包含一种或多种存活蛋白多肽片段。该疫苗可用于诸如癌症性疾病的预防性、改善性和/或治愈性治疗。本发明专利技术进一步涉及组合治疗的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及治疗性疫苗，其包含一种或多种存活蛋白多肽片段。疫苗可用于诸如癌症性疾病的预防性、改善性和/或治疗性治疗。本专利技术进一步涉及组合治疗的方法。
技术介绍
哺乳动物免疫系统识别并与外来或异源材料反应。该系统的一个重要方面是T细胞应答。该应答需要T细胞识别并与细胞表面分子的复合物(被称为构成人主要组织相容性复合物(MHC)的人白细胞抗原(HLA))和肽相互作用。该肽源自较大的分子，其由细胞加工，所述细胞也提呈HLA/MHC分子。T细胞和HLA/肽复合物的相互作用是受限制的，其需要T细胞特异针对HLA分子和肽的特定组合。如果不存在特异性T细胞，则即使存在其配偶复合物也没有T细胞应答。相似地，如果特异性复合物不存在而T细胞存在，则也没有应答。已经很成熟的有，源自人肿瘤相关抗原(TAA)的肽表位可通过MHC分子而被细胞毒性T淋巴细胞(CTL)识别，而且大多数(如果不是全部的话)肿瘤表达该抗原。因此，在例如免疫接种和过继T细胞治疗的策略中，激动人心的临床努力将靶向于这些TAA，以在患者中产生有效的抗肿瘤CTL应答。可是抗原丧失性变体的免疫选择对于大多数已知CTL表位在临床肿瘤学中的治疗潜力来说是严重的障碍，而且在靶向于不参与癌生长的抗原时，抗原缺陷性突变肿瘤的选择是治疗策略中公认的局限性。原因是大多数被表征的肽源自对于肿瘤细胞的存活并不必要的多肽，所述多肽。因此，如果通过治疗性手段(如免疫接种)诱导出针对这些肽抗原的强有力的CTL应答，则缺少靶抗原表达的肿瘤细胞非常可能逃避所产生的免疫应答。需要癌症性疾病的更有效的治疗性疫苗和改良的治疗方法。癌症中也已经暗示存在有通过T细胞识别细胞异常的机制。在W092/20356中，公开了基因家族，所述基因家族能被加工成肽，所述肽随之在细胞表面上表达，并且使得肿瘤细胞通过特异性CTL裂解。这些基因被称为MAGE家族，而且其据说编码“肿瘤排斥抗原前体”或“TRAP”分子，而且源自其的肽被称为“肿瘤排斥抗原”或“TRA”。可是，尽管通常认可大多数(如果不是全部的话)肿瘤具有抗原性，但是仅有一些真正有免疫原性，即免疫系统能容易地控制肿瘤进程。为了克服这缺陷，开始了几个免疫治疗试验，其用TAA衍生的肽来免疫接种。对于黑素瘤(已经表征出具有最大数量的CTL所确定的TAA的肿瘤)，免疫接种诱导出了强有力的针对抗原的CTL应答，而且一些患者的疾病完全消退了。可是，用在这些免疫接种试验中的大多数肽表位具有黑素细胞特异性，并且这些肽不能应用于非黑素细胞来源的肿瘤。此夕卜，这些TAA在不同患者的肿瘤中异源表达，甚至在同一个患者得到的肿瘤转移中能有所不同。可是，在近几年，已经鉴定出许多肿瘤特异性肽抗原，其在许多不同的癌中表达，即HER-2、Muc-1和端粒酶。也有显示，通过适当处理，出现在肿瘤中的肿瘤抗原可暴露于免疫系统。研究表明，免疫应答的CD8+CTL分支，单独或与CD4+Th细胞联合构成了适应性免疫应答的初级抗肿瘤效应器分支。直到现在，关注点主要在于免疫应答的CTL分支上。可是，变得更清晰的是，CD4T细胞应答在肿瘤排斥中起必要作用，尤其在体内诱导期或CTL应答的扩展中。因此，将I类限制性肿瘤抗原组合进有效的肿瘤免疫接种规程中可能增加疫苗的有效性。凋亡是细胞自杀的遗传程序，而凋亡抑制被暗示是涉及癌形成的重要机制，其通过延长细胞寿命、有利于转化突变的积累而进行。存活蛋白(survivin)是近来鉴定出的凋亡蛋白质抑制剂(IAP)家族的成员。在约4百万个转录子的综合性基因表达分析中，存活蛋白被鉴定为头等基因之一，其在许多种癌症中始终被上调，而在正常组织中没有被上调。过量表达存活蛋白的实体恶性肿瘤包括肺、结肠、乳腺、胰腺、和前列腺癌以及恶性造血组织肿瘤。另外有报道，一系列黑素瘤和非黑素瘤皮肤癌总是呈存活蛋白阳性的。在大多数人癌症中过量表达存活蛋白，暗示了肿瘤进程中凋亡抑制所起的一般性作用，这一观点得到下列观察结果的证实，即:对于结直肠和膀胱癌、以及成神经细胞瘤，存活蛋白的表达与不利的预后结果相关联。存活蛋白作为另一种凋亡抑制剂在肿瘤血管发生期间在内皮细胞中表达，而且在血管发生期间反义靶向存活蛋白造成了内皮细胞凋亡，该细胞凋亡在体外能促进毛细管样脉管迅速萎缩。相反地，在正常成人组织中不能检测到存活蛋白。由于存活蛋白在大多数人癌症中过量表达而且抑制其功能能导致增加凋亡，因此该蛋白质可能是治疗性CTL应答的靶位。存活蛋白蛋白及其潜在的诊断和治疗应用在US6，245，523中有披露，其纳入本文参考。存活蛋白是16.5kDa细胞质蛋白质，其包含替换RING指结构的单BIR和多电荷的羧基末端卷曲区域，当转移入B细胞前体时，其抑制生长因子(IL-3)撤退所诱导的凋亡。编码存活蛋白的基因几乎与效应器细胞蛋白酶受体-1 (EPR-1)的序列一致，但指向相反的方向，因而这暗示了存在2个分离的基因以头对头的构型重复。因此，存活蛋白可被描述为反义EPR-1产物。由于2个基因的方向相反，因此蛋白质的编码氨基酸序列是不同的。在功能上，通过上调其天然反义EPR-1转录子来抑制存活蛋白表达会造成大量凋亡并降低细胞生长。US6，245，523公开了分离纯化的存活蛋白，而且它提供了编码存活蛋白蛋白的核酸分子、和结合存活蛋白的抗体和其他分子。US6，245，523还公开了存活蛋白蛋白的抗凋亡活性片段及其变体，其中有氨基酸残基插在所公开的存活蛋白序列的N-或C-末端、或其内部。明确公开的是，该肽应包含凋亡所需的关键功能性残基，即第67位的Trp、第73位的Pro和第84位的Cys。以前已经公开了，如ELISP0T试验所测的，可利用负载有存活蛋白肽的树突细胞进行免疫接种来产生弱特异性T细胞应答(W02004/067023和Otto，K.等，J.Vaccine (2004))。应答为每IO4个细胞小于30，接下去的临床结果评估显示疾病进展。所以该疫苗仅有非常有限的用途。因此有极大重要性的是，要开发出能诱导出非常强的特异性T细胞应答、尤其是能诱导 出疾病进程被抑制的临床响应的疫苗。专利技术简述本专利技术基于以下发现，即源自存活蛋白蛋白的MHC I类限制性肽能结合MHC I类HLA分子，并由此离体和在原位都能在患有范围广的癌症的患者中弓I发CTL免疫应答。用于治疗前，必须与临床结果相组合分析免疫应答，以评估疫苗组合物治疗癌症的有效性。免疫后的特异性T细胞应答可以是针对用于疫苗中的潜在抗原的有用测试，优选疫苗组合物能引发出非常强的T细胞应答，如每IO4个PBMC有超过50个释放INF- Y的细胞，因为这可以增加用于治疗癌症的疫苗组合物的成功率。本专利技术公开了特别有效的疫苗组合物，其能诱导出部分或完全的肿瘤消退。显然这些发现打开了新的治疗手段的通路，由于存活蛋白显示出在肿瘤细胞中普遍表达，所述治疗手段通常可用于控制癌症性疾病。本文所述的疫苗组合物或免疫原性组合物能作为药物组合物，因为该肽能产生能抗瘤形成的CTL应答。所以,所属疫苗组合物能作为治·疗性疫苗或治疗或药物组合物。在一个方面，本专利技术涉及用作药物的疫苗组合物，其包含一种或多种存活蛋白肽或存活蛋白肽变体(其中肽变体的序列在整个长度上与SEQ IDNO:23的连续氨基酸序列至少85%本文档来自技高网...

【技术保护点】
疫苗组合物，其包含：i.一种或多种由5至20个氨基酸残基组成的不同存活蛋白肽或存活蛋白肽变体，所述肽变体的序列在整个长度上与SEQ?ID?NO：23的连续氨基酸序列至少85%同一，其中所述组合物包含：HLA?A1限制性蛋白肽和配制用于油包水乳剂的佐剂，所述佐剂包含矿物油和表面活性剂，其中佐剂包含至多14.5体积百分比的所述表面活性剂，所述疫苗组合物用作药物。

【技术特征摘要】
2005.02.04 DK 200500173;2005.02.07 US 60/650,7511.疫苗组合物，其包含: . 1.一种或多种由5至20个氨基酸残基组成的不同存活蛋白肽或存活蛋白肽变体，所述肽变体的序列在整个长度上与SEQ ID NO:23的连续氨基酸序列至少85%同一， 其中所述组合物包含=HLA-Al限制性蛋白肽和配制用于油包水乳剂的佐剂，所述佐剂包含矿物油和表面活性剂，其中佐剂包含至多14.5体积百分比的所述表面活性剂， 所述疫苗组合物用作药物。2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中所述表面活性剂是二缩甘露醇油酸酯。3.根据权利要求1-3任一项所述的疫苗组合物,其中所述佐剂是Montanide ISA佐剂。4.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中所述疫苗组合物包含由7-20个连续的氨基酸组成的存活蛋白肽变体，所述变体与SEQ ID NO:23的连续氨基酸序列相比包含一个或两个氨基酸替换。5.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中所述存活蛋白肽变体由7-12个连续的氨基酸组成，所述变体与SEQ ID NO:23的连续氨基酸序列相比包含一个氨基酸替换。6.根据权利要求1至5任一项所述的疫苗组合物，其中存活蛋白肽或肽变体由9或10个氨基酸残基组成。7.根据权利要求1-6任一项所述的疫苗组合物，其中所述HLA-Al限制性存活蛋白肽或蛋白肽变体具有选自SEQ I...

【专利技术属性】
技术研发人员：马兹H安德森，
申请(专利权)人：萨瓦克公司，
类型：发明
国别省市：