抗猫变态反应的疫苗肽组合制造技术

技术编号:10426887 阅读:241 留言:0更新日期:2014-09-12 16:54
本发明专利技术涉及包含用于预防或治疗对猫的变态反应的肽的组合物,并且尤其涉及肽的最佳组合。

【技术实现步骤摘要】
抗猫变态反应的疫苗肽组合本申请是申请日为2008年5月30日,申请号为200880101107.8,专利技术名称为“抗猫变态反应的疫苗肽组合”的申请的分案申请。专利
本专利技术涉及包含用于预防或治疗对猫的变态反应的肽的组合物,并且尤其涉及肽的最佳组合。专利技术背景T细胞抗原识别需要呈递抗原细胞(APC)以与主要组织相容性复合体(MHC)分子联合在它们的细胞表面呈递抗原片段(肽XT细胞利用它们的抗原特异性T细胞受体(TCR)以识别由APC呈递的抗原片段。这种识别作为对免疫系统的触发产生一系列应答以清除已经被识别的抗原。通过生物例如人的免疫系统的外部抗原的识别在某些情况下可导致疾病,称为特应性病况。后者的实例是变应性疾病包括哮喘、特应性皮炎和变应性鼻炎。在这一组疾病中,B淋巴细胞产生结合外部来源的抗原的IgE类抗体(在人类中),就这一点而言所述抗原被认为是变应原,因为这些分子引起变应性应答。变应原特异性IgE的产生依赖于也被变应原活化(对变应原特异)的T淋巴细胞。变应原特异性IgE抗体借助细胞例如嗜碱性粒细胞和肥大细胞的对IgE的表面受体的表达结合至这些细胞的表面。表面结合的IgE分子通过变应原的交联导致这些效应细胞的脱粒而引起炎性介质例如组胺、5-轻色胺和脂质介质诸如硫醚白三烯(sulphidoleukotriene)的释放。除了IgE依赖性事件,一些变应性疾病例如哮喘以非IgE依赖性事件为特征。变应性的IgE介导的疾病目前用提供症状的缓解或预防的剂治疗。这种剂的实例是抗组胺、β 2激动剂和糖皮质激素。此外,一些IgE介导的疾病通过包括变应原成分或提取物的周期性注射的脱敏操作来治疗。脱敏治疗可诱导与IgE竞争变应原的IgG应答,或者它们可诱导阻断抗变应原的IgE的合成的特异性抑制T细胞。这一形式的治疗并不总是有效的并且具有激起严重的副作用,尤其是一般的过敏性休克的风险。这可以是致命的,除非被立即识别并用肾上腺素治疗。降低或消除不需要的对特定变应原的变应性免疫应答而不改变对其他外来抗原的免疫反应性或不触发自身变应性应答的治疗性治疗对变应性个体来说将非常有益。世界上大约10%的人口是对猫(家猫)变应性的并且高达67%的哮喘患者对猫变应原敏感。由猫产生的主要变应原是糖蛋白Fel dl,其在患有猫变态反应的90-95%的患者中引起应答。治疗性或预防性治疗将因此对患有猫变态反应或具有患有猫变态反应的风险的人来说非常有益。专利技术概述本专利技术人已经公开了 Fel dl蛋白的肽片段的一些组合在使个体对Feldl变应原脱敏中是尤其有用的。已经针对本专利技术的多肽组合与许多II类MHC的分子结合并且导致伴随最小的组胺释放的T细胞增殖的能力而对它们进行选择。本专利技术的组合物、产物、载体和制剂因此可被提供给个体用以通过免疫耐受作用预防或治疗对猫的变态反应。本专利技术的多肽最初作为潜在的T细胞表位通过使用肽-MHC结合测定来选择。参见例如图1,其证实来自Fel dl链I和2的一系列的肽在II类MHC结合测定中与多种DR类型结合的能力。之后为了在免疫耐受作用中的可能的使用而对这些候选多肽进一步筛选。与以肽免疫为基础的脱敏作用的方法有关的困难在于如何选择变应原适合的大小和区域作为有待被用于免疫的肽的基础。选择的肽的大小是关键。如果肽太小,疫苗在诱导免疫应答方面将无效。如果肽太大或者将全抗原引入个体,就有引入可能致命的不良反应例如过敏反应的危险。本专利技术的多肽已经被选择为保留T细胞特异性同时在尺寸上足够小而不会具有使得它们保留整个分子的IgE结合表位的构象的显著的三级结构。本专利技术的多肽因此没有在细胞例如肥大细胞和嗜碱性粒细胞上诱导相邻特异性IgE分子的显著交联并且因此不会导致显著的组胺释放。本专利技术的肽是有优势的,因为在对T细胞样品施用时它们导致T细胞增殖同时产生最少的组胺释放。这在实施例2中被证实。本专利技术的多肽能够在猫变应性的个体中诱导晚期应答。包含这些多肽或能够表达这些多肽的多核苷酸的本专利技术的组合物、产物和制剂因此在对这一变应原敏感的个体中减少对Fel dl变应原的超敏感性有用并有效。本专利技术的又一个优点是肽对广泛的靶主要组织相容性复合体(MHC)分子的结合的能力。T细胞受体(TCR)在它们的特异性上是高度可变的。可变性与抗体分子一样通过细胞中的基因重组事件而产生。TCR识别与由主要组织相容性复合体(MHC)的基因编码的分子结合的短肽形式的抗原。这些基因产物是与导致在移植中所使用的“组织类型”的分子相同的分子并且也被称 为人类白细胞抗原分子(HLA)(这些术语可互换使用)。个别的MHC分子具有肽结合槽,其因为它们的形状和电荷而仅能够结合有限组的肽。被一个MHC分子结合的肽可不必然被其他MHC分子结合。当蛋白分子例如抗原或变应原被呈递抗原细胞例如B淋巴细胞、树突细胞、单核细胞和巨噬细胞所接受时,分子在细胞内被酶促降解。降解的过程产生分子的肽片段,如果它们具有合适的大小、电荷和形状,之后可在一些MHC分子的肽结合槽中结合并且随后被呈现在呈递抗原细胞的表面上。如果肽/MHC复合体在呈递抗原细胞表面上以足够的数目呈递,那么它们之后可活化携带适合的肽/MHC特异性T细胞受体的T细胞。由于MHC的多态性质,远系繁殖的群体例如人中的个体将在他们的细胞表面上表达不同的MHC分子的组合。因为不同的MHC分子可基于肽的大小、电荷和形状结合来自同一分子的不同的肽,不同的个体将呈现出结合至它们的MHC分子的不同的肽谱。一般的MHC结合肽表位的鉴定在远系繁殖群体例如人中比在近亲繁殖的动物(例如一些品系的实验室小鼠)中更困难。基于个体间不同的MHC表达和肽结合中的固有差异以及这一差异带来的呈递,鉴定在人类中具有脱敏治疗的用途的单一的肽是不可能的。然而本专利技术的肽组合通过靶向群体的MHC中的大多数来提供在人群中的广泛覆盖效力。例如,不必将患者或个体分型以确定他或她具有哪种II类MHC分子以便决定那种肽或肽的组合将是有效的。用本专利技术的肽配制的疫苗将因此具有广泛的功用。专利技术人的工作已经生产了具有下列特征的肽组合:-组合与许多不同的II类MHC分子结合(参见图2,其显示没有与许多不同的MHC分子结合的大量组合)-组合产生与整个变应原相同或更少的组胺释放和/或具有与整个变应原相当的细胞因子释放概况-组合的肽是可溶的。相应地,本专利技术提供在通过免疫耐受作用预防或治疗对猫的变态反应中使用的组合物,其包含:a)选自SEQ ID NO: 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种的四种或更多种多肽,以及任选地b)具有下列特征的一种、两种或三种多肽:(i)包含与 a)中未选的 SEQ ID N0:l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、ll 或 12 中的任一种中的至少9个或更多个连续的氨基酸具有至少65%序列同一性的序列,并且(ii)长度上为9至30个氨基酸。优选地,本专利技术的组合物包含:(i)对一组HLA分子中的每个成员都表现出强结合的至少两种肽和表现出中等结合的至少一种肽;或者 (ii)对HLA分子的所述组中每个成员都表现出强结合的至少一种肽和表现出中等结合的至少两种肽;其中HLA分子的组包括由在至少80%的远系繁殖的人群中具有累计频率的不同的等位基因编码的至少七种不同本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于通过免疫耐受作用预防或治疗对猫的变态反应的组合物,其包含:a)独立地选自SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种的四种或更多种多肽;以及任选地b)具有下列特征的一种、两种或三种多肽:(i)包含与a)中未选的SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种中的至少9个或更多个连续的氨基酸具有至少65%序列同一性的序列;并且(ii)长度上为9至30个氨基酸。

【技术特征摘要】
2007.06.01 GB 0710529.91.一种用于通过免疫耐受作用预防或治疗对猫的变态反应的组合物,其包含: a)独立地选自SEQID N0:l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、ll或12中的任一种的四种或更多种多肽;以及任选地 b)具有下列特征的一种、两种或三种多肽: (i)包含与a)中未选的SEQ ID NO: 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种中的至少9个或更多个连续的氨基酸具有至少65%序列同一性的序列;并且 (?)长度上为9至30个氨基酸。2.如权利要求1所述的组合物,其中(a)中选择的肽包含下列序列或由下列序列组成:i)SEQIDNO:l、2、3、4、5、6 和 7 ;或ii)SEQID N0:2、3、4、10、6 和 7 ;或iii)SEQID NO:2、3、4、5、6、7 和 11 ;或iv)SEQ ID NO:2、3、4、5、6、7 和 12 ;或v)SEQ ID NO:8、2、3、4、6 和 7 ;vi)如(V)中的序列与选自SEQID NO: 1、5、9、11或12的一种另外的肽; 以及任选地,其中所述组合物不包含其他的肽。3.如前述权利要求中的任一项所述的组合物,其含有如b)中所定义的至少一种多肽,其中所述多肽能够导致至少20%的T细胞样品中的T细胞增殖,其中每个样品是从群体中不同的猫变应性个体获得的。4.如前述权利要求中的任一项所述的组合物,其含有如b)中所定义的至少一种多肽,其中所述多肽能够在猫变应性个体中诱导晚期应答,和/或其中所述组合物被用于在MHC等位基因未知的个体中预防或治疗对猫的变态反应。5.如前述权利要求中的任一项所述的组合物,其中所述组合物能够在所述群体中使一组猫变应性个体中的至少50%或至少60%免疫耐受。6.如前述权利要求中的任一项所述的组合物,其含有如b)中所定义的至少一种多肽,其中所述多肽在长度上是9至20个或13至17个氨基酸,和/或其中所述多肽与SEQ IDN0:l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、ll或12中的任一种具有至少70%序列同一性。7.如前述权利要求中的任一项所述的组合物,其中如b)中所定义的所述多肽与a)中未选的SEQ ID N0:l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、ll或12中的任一种中的氨基酸序列中的至少一组、两组或更多不同组的9个连续的氨基酸具有至少70%、80%、90%、95%或99%的序列同一性,其中,所述9个连续的氨基酸任选地含有T细胞表位。8.如权利要求9所述的组合物,其中b)中的一种或多种多肽选自a)中未选的SEQID勵:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一种的氨基酸序列,和/或其中所述组合物被用于治疗已经患有对猫的变态反应至少一年的个体。9.如前述权利要求中的任一项所述的组合物,其中a)和/或b)中的所述多肽中的一种或多种具有选自下列的一种或多种修饰: (i)N端乙酰化; (ii)C端酰胺化; (iii)由亚甲基基团取代的精氨酸和/或赖氨酸侧链胺上的一个或多个氢;(iv)糖基化;以及 (V)磷酸化。10.如前述权利要求中的任一项所述的组合物,其中如权利要求1的a)或b)中所定义的每种多妝具有 0.03nmol/ml 至 200nmol/ml、0.3nmol/ml 至 200nmol/ml 或 10nmol/ml 至50nmol/ml范围内的浓度。11.一种用于通过免疫耐受作用预防或治疗对猫的变态反应的组合物,其包含在表达时导致如权利要求1至11中的任一项所定义的组合物的产生的四种或更多种不同的多核苷酸序列。12.如权利要求11所述的组合物,其中能够表达不同的多肽的每种多核苷酸序列存在于相同或不同的多核苷酸载体中。13.一种用于通过免疫耐受作用预防或治疗对猫的变态反应的载体,其包含编码如权利要求Ia)中所定义的不同的多肽的四种或更多种多核苷酸序列,和任选地编码如权利要求Ib)中所定义的不同的多肽的一种 或多种多核苷酸序列。14.一种用于通过免疫耐受作用预防或治疗对猫的变态反应的载体,其包含不同的多核苷酸序列,其中每种多核苷酸序列编码下列组合中所示的多肽中的一种:i)SEQIDN0:1、2、3、4、5、6 和 7 ;或ii)SEQID N0:2、3、4、10、6 和 7 ;或iii)SEQID NO:2、3、4、5、6、7 和 11 ;或iv)SEQI...

【专利技术属性】
技术研发人员:罗德里克·彼得·哈夫纳马克·拉尔什安东尼·巴林顿·凯伊
申请(专利权)人:切尔卡西亚有限公司
类型:发明
国别省市:英国;GB

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