一种生物碱及制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种式（Ⅰ）所示生物碱及制备方法和在制备肿瘤细胞多药耐药性逆转剂中的应用，本发明专利技术提供一种生物碱，可作为具有逆转肿瘤细胞多药耐药性的新药物或先导化合物，对白血病阿霉素耐药细胞（K562/ADR）、人肺腺癌/顺铂耐药细胞（A549/DDP）和人卵巢癌/顺铂耐药细胞（SK-OV-S/DDP）有很强的逆转作用；本发明专利技术的生物碱可以利用微生物进行液体发酵生产，操作工艺简便，周期短，成本低，来源有保证；本发明专利技术利用生物法合成，对环境无污染；

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种生物碱及制备和应用，具体涉及一种从药用植物黄花蒿(Artemisia annuaLinn.)莖部提取的内生真菌烟曲霉 SPS-02 (Aspergillus fumigatus)液体发酵物中分离的一种新生物碱及其制备方法与逆转肿瘤细胞多药耐药性的应用，该化合物可以与抗肿瘤药物作用提高逆转效果，从而为临床上治疗多药耐药性肿瘤提供新的方法和手段。
技术介绍
微生物与人类息息相关，其活性次生代谢产物如抗生素已被广泛研究和应用。植物内生菌是一种分布广、种类多、具有重要生理和生态作用的特境微生物，其活性次生代谢产物已成为天然产物化学领域和应用微生物领域的研究热点。恶性肿瘤是威胁人类健康、导致死亡的重要原因之一，化学治疗是其治疗的主要手段，然而肿瘤细胞对化疗药物产生的多药耐药性(multidrug resistance, MDR)是影响化疗效果的重要原因之一。MDR是指肿瘤细胞接触一种抗肿瘤药物后产生耐药性，同时对结构和作用机理不同的多种抗肿瘤药物表现出交叉抵抗现象。MDR是肿瘤细胞耐药的常见方式，也是肿瘤难治疗、易复发的主要原因。理想的MDR逆转剂应具有一定的抗肿瘤活性，且对正常组织细胞毒性小，在体内及肿瘤细胞内能达到有效浓度。然而，一些经典的MDR逆转剂具有严重的毒副作用，如维拉帕米产生心血管疾病、valsodar与细胞色素P45tl同工酶3A4产生竞争性抑制等，所以这些药物无法应用于临床。因此，寻找安全、高效、低毒的肿瘤细胞MDR逆转剂成为当今药物研发的热点之一。植物内生菌具有丰富的生物多样性和化学多样性，能够产生化学结构独特、活性显著的物质。到目前为止，尚未见从黄花蒿内生菌烟曲霉(Aspergillusfumigatus)分离到新逆转肿瘤细胞多药耐药性生物碱的报道。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种具有逆转肿瘤细胞多药耐药性的新生物碱，以及该生物碱的提取分离方法，在制备肿瘤细胞多药耐药性逆转剂中的应用。本专利技术采用的技术方案是:本专利技术涉及一种式(I )所示生物碱，命名为16-β-hydroxy-5-N-acetylardeemin(16- β -羟基-5-Ν-乙酰基-阿迪米):权利要求1.一种式(I)所示生物碱，2.一种用于权利要求1所述生物碱提取的烟曲霉SPS-02，其特征在于所述烟曲霉(Aspergillusfumigatus)SPS-02保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉武汉大学，保藏日期为2013年I月13日，保藏编号为CCTCCN0:M2013014。3.—种如权利要求1所述生物碱的制备方法，其特征在于所述方法为:将保藏编号为CCTCC N0:M2013014即烟曲霉SPS-02发酵培养获得的培养液过滤或离心，取滤液或上清液用乙酸乙酯在室温下进行萃取，取有机层低温真空浓缩，获得浸膏F，将浸膏F进行分离纯化，获得所述生物碱；所述浸膏F分离纯化方法为:(I)将浸膏F进行硅胶柱层析，用1(Γ15倍柱体积的氯仿进行洗脱，收集洗脱液，低温真空浓缩，获得浸膏Fl ;(2)将浸膏Fl进行硅胶柱层析，用3飞倍柱体积的氯仿进行洗脱，合并所有洗脱液，低温真空浓缩，获得浸膏F2 ；(3)利用葡聚糖凝胶S印hadex LH-20对浸膏F2进行柱层析，洗脱剂为体积比1:1的氯仿和甲醇混合液，TLC跟踪检测含有蓝色荧光点的部分，收集该部分洗脱液，合并洗脱液后低温真空除去洗脱剂，得到浸膏F3 ； (4)浸膏F3采用反相高效液相色谱分离，流动相为体积比1:1.5的双蒸水和甲醇混合液，收集保留时间Ilmin时的洗脱液，低温真空除去流动相得到式(I)所示的生物碱。4.如权利要求3所述生物碱的制备方法，其特征在于所述培养液的制备方法为:(I)斜面培养:将烟曲霉SPS-02接种至斜面培养基，28 30°C培养7 10天，获得菌体斜面；所述斜面培养基终浓度组成为:马铃薯20g/L、琼脂20g/L，溶剂为水，自然pH值；(2)种子培养:从菌体斜面挑取一接种环菌体接种至H)培养基，在10(Tl50rpm、28 30°C条件下摇床培养3天，获得种子液；所述H)培养基终浓度组成为:土豆200g/L、葡萄糖20g/L，溶剂为水，自然PH值；(3)发酵培养 :将步骤(2)获得的种子液以体积比1:10的接种量接种至发酵培养基，在140rpm、28°C条件下摇床培养15天，获得发酵培养液；所述发酵培养基终浓度组成为:蔗糖 30g/L, NaN033g/L，K2HP04lg/L，酵母膏 lg/L，KC10.5g/L，MgSO4.7Η200.5g/L，FeSO4.7Η200.01g/L，溶剂为水，自然 pH 值。5.一种权利要求1所述生物碱在制备肿瘤细胞多药耐药性逆转剂中的应用。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述的应用为:所述生物碱在制备白血病阿霉素耐药细胞、人肺腺癌顺钼耐药细胞或人卵巢癌顺钼耐药细胞耐药性逆转剂中的应用。7.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述生物碱在肿瘤细胞多药耐药性逆转剂中的浓度为5 10 μ Mo8.如权利要求7所述的应用，其特征在于所述生物碱在肿瘤细胞多药耐药性逆转剂中的浓度为5 μ Μ。全文摘要本专利技术公开了一种式(Ⅰ)所示生物碱及制备方法和在制备肿瘤细胞多药耐药性逆转剂中的应用，本专利技术提供一种生物碱，可作为具有逆转肿瘤细胞多药耐药性的新药物或先导化合物，对白血病阿霉素耐药细胞(K562/ADR)、人肺腺癌/顺铂耐药细胞(A549/DDP)和人卵巢癌/顺铂耐药细胞(SK-OV-S/DDP)有很强的逆转作用；本专利技术的生物碱可以利用微生物进行液体发酵生产，操作工艺简便，周期短，成本低，来源有保证；本专利技术利用生物法合成，对环境无污染；文档编号A61P35/00GK103113376SQ20131004453公开日2013年5月22日 申请日期2013年2月4日 优先权日2013年2月4日专利技术者章华伟, 应晨, 汤逸飞 申请人:浙江工业大学本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种式（Ⅰ）所示生物碱，FDA00002816555200011.jpg

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：章华伟，应晨，汤逸飞，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：