【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及通过物理操作测定核酸序列的方法。尤其是，所述方法包括步骤:确定发生复制暂停的位点的物理位置，并由此推导核酸的序列信息。根据本专利技术的方法基于物理技术和电子处理，不同于当前的化学的或生化的方法。它的优点是多方面的:1)它允许单个分子的测序，从而不需要在先的扩增步骤(例如，通过PCR)。2)它远比本领域的方法便宜，由于标准核酸分子的使用，其远不及标记的核苷酸(有荧光团或一些其它基团)昂贵。3)它使得通过测量所述双链核酸分子两端之间的距离来确定新和成的互补链沿着双链核酸的定位(以bp为单位)成为可能。4)在一个实施方式中，其允许在一个聚合运行中测定给定核苷酸沿着链的位置。5)该测量可以在另一个时间尺度上周期性地重复，从而导致假阳性(聚合酶的伪滞留)的消除、改进的统计学以及仪器漂移的显著降低。 6)在同一分子上可以多次重复该实验，由于可以在复制步骤之后驱除(eject)新和成的单链核酸(例如，通过降低力或离子强度，或通过使用解旋酶或外切核酸酶活性)，从而改进了测量统计学和可靠性。它允许不同的双链核酸分子的平行测序，因为每个分子可以独立于其它分子而进行...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.05.27 EP 10305563.8;2010.08.27 US 61/377,6211.一种用于测定核酸序列的方法，所述方法包括步骤: a)使对应于所述核酸序列的双链核酸分子变性； b)单链核酸分子(“引物”)和所述变性的双链核酸分子杂交； c)向b)中获得的杂交的引物/双链核酸分子施加张力； d)将步骤b)中获得的杂交的引物/双链核酸分子与聚合酶在导致复制中至少一个暂停的条件下进行孵育；以及 e)确定所述暂停在复制中相对于双链核酸一端的位置。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述双链核酸分子是发夹。3.根据权利要求1或2任一项所述的方法,其中双链核酸其中一条链的至少一个碱基直接或间接地附着至表面，以及其中双链核酸的另一条链的至少一个碱基附着至可移动的表面。4.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中通过移开支持物使得双链核酸在步骤a)中变性。5.根据权利要求4所述的方法，其中通过移开支持物来向双链分子施加高于或等于15pN，优选高于或等于17pN，更优选高于或等于ISpN的物理力。6.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中步骤c)的所述张力介于12pN和IOpN之间。7.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中未附着至支持物的双链核酸的端共价或非共价地彼...
【专利技术属性】
技术研发人员：D·邦西蒙，V·克罗凯特，JF·阿勒芒，M·马诺萨斯，丁方圆，
申请(专利权)人：国家科学研究中心，巴黎高等师范学院，
类型：
国别省市：
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