肾移植耐受的确定方法技术

本发明专利技术涉及一种根据多个生物标志的水平确定个体移植耐受性的方法。本发明专利技术还包括一个含有用于测定生物标志水平所需试剂的试剂盒。此外，本发明专利技术还公开了一种传感器，用于测定多个决定个体移植耐受性基因的表达水平。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及一种根据多个生物标志的水平确定个体移植耐受性的方法。本专利技术还涉及一个含有用于测定生物标志水平所需试剂的试剂盒。本专利技术还涉及了一种传感器，用于测定多个决定个体移植耐受性基因的表达水平。移植耐受性是指在持续无免疫抑制治疗的情况下稳定维持良好的异源移植功能。在临床领域，仅当患者尽管在长期停止接受所有的免疫抑制治疗时，仍具备稳定的同种异体移植功能时可见。这一状态被称之为可操作的耐受，在肾移植中很少有报道(1-5)，在肝脏移植中更为常见出、7)。肾移植患者的长期生存依赖于药物持续诱导的免疫抑制。然而，这通常伴随着发病率和死亡率的提高，主要是心血管疾病，偶然机会引起的感染和恶性肿瘤(8)。目前，我们不能提前确定哪些患者会对他们接受的移植体耐受，哪些患者可以从部分或完全中止免疫抑制获益。因此，日益需要研发检测和鉴定生物标志，从而能够使临床医生在患者自身特异的免疫特性的基础上，安全地使免疫抑制作用最小化。先前的研究已经在肝移植受体中鉴定出耐受相关的生物标志。特别研究了儿童受体的患者群中的细胞因子基因的多态性。与持续接受免疫抑制的对照组患者相比，所有未进行免疫抑制的患儿和绝大多数接受最小量免疫抑制的患儿显示出较低的肿瘤坏死因子(TNF)-Q和高度/中度白介素(IL)-1O (36)。此外，在两组患者之间，还存在树突细胞亚群比率的差异。与持续接受免疫抑制的患者相比，类浆细胞树突细胞(PDC2)，即报道的选择诱导的T-辅助细胞(Th) 2型应答的循环水平相对于单核树突细胞(pDCl)来说更为普遍，后者在未接受免疫抑制或最小量免疫抑制的患者体内诱导Thl型应答(37)。研究者进一步尝试使用外周血液基因表达特征和大量血细胞免疫表型来确定成人肝脏移植受体耐受的生物标志。研究证明，可操作的耐受患者可通过编码Y S T细胞的基因和自然杀伤(NK)细胞受体，以及涉及细胞增殖阻滞的基因得以确定(38)。他们还在耐受患者体内发现了大量的潜在的周期调节T-细胞亚群、⑶4+⑶25+T细胞和Y S T细胞，特别是在上皮组织的免疫调控过程涉及的S Vl+亚型。有趣的是，之前观察到的树突细胞亚群比率的差异在该患者群 体内没有发现。研究了相同群体内肝移植受体的外周血中的基因表达特征，与中断免疫抑制的患者及健康对照相比，前者成功尝试了中断过程，但导致需要重新采用免疫抑制的急性细胞排斥(39)。他们确定了三个不同的基因，涉及适量的基因(2至7个之间)，以区别耐受和非耐受同种异体肝移植受体与健康者对照。对附加的肝移植受体的独立人群中验证了可操作的耐受的基因组印记，其主要特征是由NK细胞、CD8+细胞和Y ST细胞表达的多种细胞表面受体编码基因的上调。外周血内假定的调节性T细胞(⑶4+CD25+Foxp3+，y S TCR+和S ITCR+T细胞)的扩增也在这一组新的耐受受体中观察到。总体而言，结合外周血中的转录特征和流式细胞仪研究可以确定那些能够在不接受药物免疫抑制的情况下接受移植体的肝移植受体。索里娄(Soulillou)等分析了五个可操作的耐受性肾移植受体中的TCR (T细胞抗原受体)，并在这些偏离的TCR 链使用的患者中进行论证，主要观察了⑶8+亚型。这些细胞具有细胞因子(IL10，IL2，IL13，IFN-Y )转录下降的特征，代表一种反应低下状态(40)。与慢性同种异体移植排斥的患者相比，耐受患者体内还有明显较少的循环⑶8+CD28_W巴球功能细胞，这意味着在这些患者体内存在对细胞毒性的抑制(Baeten等，2005(45))。随后，该研究组使用基因表达芯片来鉴定一套33个基因，能够区分高度特异的可操作的耐受性肾移植受体和急性/慢性同种异体移植排斥及相应年龄的健康志愿者(41)。与对照组相比，耐受患者体内共刺激基因和早期及后期T细胞活性标志的表达量有所减少，尽管耐受患者体内的抗炎症的细胞因子一转化生长因子P (TGFP)并未像很多TGFP调节基因那样上调。该研究组还分析了一组含有8个可操作的耐受肾移植受体的血细胞的表型和转录模式，研究表明与慢性排斥患者对照组相比，该组显示了较高的循环B细胞和调节性T细胞(⑶25hira4+)，而在慢性排斥受体体内则表现有F0XP3转录水平的显著下降(42)。有趣的是，在本研究中，临床耐受患者的血细胞表型与健康个体之间没有差别，这意味着可操作的耐受并非归因于调节性T细胞的增长，而是由于慢性排斥患者体内缺乏对自然状态的维持。相反，另一个研究组报道了与慢性排斥患者、透析患者和健康对照组相比，在长期稳定性肾移植受体内表现有更为多变的TCR-V ^组成和较高的CD4+CD25high百分比，该两个是没有接受免疫抑制的(43)。在波罗尔德(Brouard)等2007发表的文章中(41)，使用了 49个基因，在训练组内获得90%的最大灵敏性。绝大多数不同的33个基因被用来区分耐受和慢性排斥的个体。MS4A1是一种又被称为⑶20的分子，它在B淋巴细胞的表面表达。该分子出现在Brouard等2007的文章(41)中的两个基因组中，例如33个基因和49个基因组。此外，娄伊特(Louyet)等2005 (44)确定MS4A1为一种大鼠动物模型中的移植耐受相关标志。这提出需要一种改进的方法来有效地确定个体对器官移植的耐受。本专利技术提出了一种确定个体对肾移植免疫耐受的方法，包括确定从个体体内获得的样品中的 TLR5、PNOC, SH2D1B、CD79B、TCL1A、HS3ST1、MS4A1、FCRLl、SLC8A1 和 FCRL2 基因内选择至少两个基因的表达水平。通过上述确定的结果，可能会高度特异性和灵敏性地确定个体是否对器官移植具有免疫耐受。特异性是指本方法确定为非耐受的真阴性(非耐受个体)比例。灵敏性是指本方法确定为耐受的真阳性(耐受个体)比例。本方法提供了一个高度精确的测试，能够仅通过检测少量的生物标志(例如，基因表达水平)而相对容易地进行。从而提供了一种针对个体对器官移植耐受性的简单且有效的测试。“免疫耐受”一词对本领域的技术人员来说是非常熟悉的，该术语是指在持续无免疫抑制治疗的情况下，能够稳定的维持良好的异体移植功能。在临床领域，仅当患者在很长一段时间内即使停止了所有的免疫抑制治疗，例如一年，仍具有稳定的异体移植功能时才可视为免疫耐受。本专利技术的方法可用于确定个体对肾移植的耐受性。有研究表明，在能够耐受移植器官的个体中，SH2D1B、PN0C、CD79B、TCL1A、HS3ST1、MS4A1、FCRLl和FCRL2基因的表达水平升高，而TLR5和SLC8A1基因的表达水平则降低。这些基因的任意组合都可用于确定个体对器官移植的耐受性。尽管这10个基因都可用于耐受性的确定，也可优选为仅用2、3、4或5个基因来确定，进一步优选为仅用3个基因来确定。 更优选地，本专利技术公开的方法包含确定从个体获得的样本中的TLR5、PNOC和SH2D1B基因的表达水平。个体对器官移植耐受性的阳性预测是由SH2D1B和PNOC的高表达水平和TLR5的低表达水平决定的。如本领域的技术人员所熟知的那样，本专利技术公开的方法还包括确定CD79B、TCL1A、HS3ST1、MS4A1、FCRLl、SLC8A1和FCRL2基因中的一个或多个基因的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.05.04 GB 1007454.01.种确定个体对肾移植免疫耐受的方法，其特征在于，该方法包含确定从个体所获取样本的一组基因中选择的至少2个基因的表达水平，这组基因由TLR5、PNOC, SH2D1B、CD79B、TCL1A、HS3ST1、MS4A1、FCRLl、SLC8A1 和 FCRL2 组成。2.权利要求1所述方法,其特征在于，SH2D1B、PN0C、CD79B、TCL1A、HS3ST1、MS4A1、FCRLl和FCRL2的表达水平比具有免疫耐受性个体的正常水平更高，而TLR5和SLC8A1的表达水平则比具有免疫耐受性个体的正常水平低。3.权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法确定了来自个体样本中的TLR5、PNOC和SH2D1B基因的表达水平。4.权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法通过SH2D1B和PNOC的高表达水平，以及TLR5的低表达水平能够确定个体对器官移植耐受的阳性预测结果。5.权利要求3所述方法，其特征在于，所述方法还确定了⑶79B、TCL1A、HS3ST1、MS4A1、FCRLl、SLC8A1和FCRL2基因中的一个或多个的表达水平。6.上述权利要求中任意之一所述的方法，其特征在于，所述方法包含确定B细胞和NK细胞的水平，该两种细胞的水平升高代表免疫耐受。7.上述权利要求中任意之一所述的方法，其特征在于，所述方法包含确定⑶4+⑶25int T细胞的水平，该细胞水平相对于⑶4+ T细胞总数而降低代表免疫耐受。8.上述权利要求中任意之一所述的方法，其特征在于，所述方法包含确定供体特异性CD4+ T细胞的水平，该细胞水平的降低代表免疫耐受。9.上述权利要求中任意之一...

【专利技术属性】
技术研发人员：玛利亚·赫尔南德兹富恩特斯，艾琳·梅萨，乌维·杨森，斯蒂凡·汤米尤，波吉特·萨维斯基，汉斯迪特·沃尔克，罗伯特·莱克勒，
申请(专利权)人：伦敦国王学院，柏林夏洛蒂医科大学，美天旎生物技术有限公司，
类型：
国别省市：