工程化调节性T细胞制造技术

本发明专利技术提供了一种工程化调节性T细胞(Treg)，其包含嵌合抗原受体(CAR)，其中所述CAR包含特异性结合去唾液酸糖蛋白受体(ASGR)的抗原识别结构域。本发明专利技术还提供了一种在受试者中促进肝脏组织修复和/或再生的方法，其包括向所述受试者施用包含CAR的工程化Treg或包含所述工程化Treg的药物组合物的步骤，其中所述CAR包含肝脏特异性抗原识别结构域。述CAR包含肝脏特异性抗原识别结构域。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】工程化调节性T细胞


[0001]本专利技术涉及工程化调节性T细胞以及此类细胞在免疫介导的肝脏损伤中的治疗用途。特别地，本专利技术涉及能够识别肝细胞、治疗和/或预防移植排斥或免疫介导的损伤以及促进肝细胞再生的工程化调节性T细胞。

技术介绍

[0002]肝脏是一个重要的器官，它支持着身体中几乎所有其他器官。由于其关键位置和重要功能，肝脏很容易发生疾病，特别是免疫介导的损伤。全世界每年约有200万人死于肝病，其中100万人死于肝硬化的并发症，100万人死于病毒性肝炎和肝细胞癌。肝硬化目前是全球第11位最常见的死亡原因。肝硬化是造成伤残调整寿命年和寿命损失年的前20大原因，占全世界负担的1.6％和2.1％(Asrani,S.K.,等.,2018.Journal of hepatology,70,第151
‑
171页)。
[0003]常见的自身免疫性肝脏疾病，如原发性胆汁性胆管炎和原发性硬化性胆管炎，可能会损害肝脏并导致肝硬化。原发性胆汁性胆管炎的疾病负担通常表现为生活质量差、健康状况受损以及明显的疲劳、瘙痒和抑郁症状。原发性硬化性胆管炎是胆管癌、胆囊癌和结直肠癌的风险因素，并可能导致过早死亡。与普通人群相比，原发性硬化性胆管炎患者的死亡风险增加4倍，但特别是患胆管癌的风险增加了398倍(Asrani,S.K.,等.2018.Journal of hepatology,70,第151
‑
171页)。
[0004]肝硬化也可以由炎症性肝脏疾病引起，如病毒性肝炎或脂肪性肝炎。2010年，每年因病毒性肝炎死亡的人数为30万，比1990年增加了46％。病毒性肝炎从第10位主要死因(1990年)上升到2013年的第7位主要死因。2015年，病毒性肝炎相关疾病导致134万人死亡，与结核病造成的死亡人数(137万)相似，高于HIV(106万死亡)或疟疾(44万死亡)造成的死亡人数(Asrani,S.K.,等.2018.Journal of hepatology,70,第151
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171页)。
[0005]此外，移植物耐受和存活是在肝移植过程中的一个重要的问题。15
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25％的肝移植受者在基于他克莫司的免疫抑制方案中发生急性细胞排斥反应，一般在使用类固醇后会改善。虽然急性排斥反应通常对治疗反应良好，但慢性排斥反应代表了一种困难的情况，相当一部分患者对增加的免疫抑制没有反应。慢性排斥反应经常导致再移植或死亡(Choudhary,N.S.,等,2017.Journal of clinical and experimental hepatology,7(4),第358
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366页)。因原发性胆汁性胆管炎而接受肝移植的患者中五年死亡率最低。可复发的疾病包括自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化和原发性硬化性胆管炎(Hirschfield,G.M.,等,2009.BMJ,338,p.b1670)。
[0006]肝移植还可能导致由移植物抗宿主病引起的免疫介导的损伤。报道的移植物抗宿主病的发生率从0.1％至2％不等，死亡率超过75％(Akbulut,S.,等,2012.World journal of gastroenterology,18(37),第5240页)。
[0007]肝脏具有独特的再生特性，可以帮助减轻免疫介导的损伤。然而，在慢性免疫介导的损伤的情况下，肝细胞会发生衰老，其再生能力受损，这导致了肝衰竭的发展，并导致显
著的患者发病率和死亡率(Aravinthan,A.D.和Alexander,G.J.,2016.Journal ofhepatology,65(4),第825
‑
834页)。此外，响应免疫介导的损伤的肝脏再生会产生不利影响，导致肝硬化和肝癌(Michalopoulos,G.K.,2017.Hepatology,65(4),第1384
‑
1392页)。
[0008]因此，能够治疗和/或预防免疫介导的损伤并促进肝脏再生的疗法将对肝脏疾病的处理具有巨大的治疗潜力。
[0009]因此，需要有治疗和/或预防免疫介导的损伤并促进肝脏再生的疗法。

技术实现思路

[0010]在第一方面，本专利技术提供了一种包含嵌合抗原受体(CAR)的工程化调节性T细胞(Treg)，其中所述CAR包含特异性结合去唾液酸糖蛋白受体(ASGR)的抗原识别结构域。
[0011]在一些实施方案中，所述CAR包含胞内结构域，所述胞内结构域包含STAT5结合基序以及JAK1结合基序和/或JAK2结合基序。在一些进一步的实施方案中，所述胞内结构域包含JAK3结合基序和/或不包含STAT3结合基序。
[0012]适当地，所述CAR胞内结构域不包含氨基酸序列YXXQ(SEQ ID NO:133)。适当地，所述CAR胞内结构域的IL2Rβ部分不包含氨基酸序列YXXQ(SEQ ID NO:133)。
[0013]与受试者的一般T细胞群相比，本专利技术的具有STAT5信号传导的工程化Treg在抗原识别后为工程化CAR
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Treg提供生存优势方面可能特别有效。特别地，在例如使用免疫抑制药物降低IL
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2可用性的移植的情况下，CAR
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Treg的STAT5信号传导在原本不利的微环境中为本专利技术的Treg提供了额外的存活和功能影响。
[0014]在另一方面，本专利技术提供了一种包含根据本专利技术的工程化Treg的药物组合物。
[0015]在另一方面，本专利技术提供了根据本专利技术的工程化Treg或药物组合物用于诱导受试者对肝移植的耐受性，或者用于治疗和/或预防受试者的肝移植排斥、肝移植物抗宿主病(GvHD)、自身免疫性肝病或炎症性肝病。
[0016]在另一方面，本专利技术提供了一种诱导受试者对肝移植的耐受性的方法，或者治疗和/或预防受试者的肝移植排斥、肝移植物抗宿主病(GvHD)、自身免疫性肝病或炎症性肝病的方法，其中，所述方法包括将根据本专利技术的工程化Treg或药物组合物施用于所述受试者的步骤。
[0017]在另一方面，本专利技术涉及根据本专利技术的工程化Treg在制备用于诱导受试者对肝移植的耐受性的药物中的用途，或者在制备治疗和/或预防受试者的肝移植排斥、肝移植物抗宿主病(GvHD)、自身免疫性肝病或炎症性肝病的药物中的用途。
[0018]在另一方面，本专利技术提供了包含嵌合抗原受体(CAR)的工程化调节性T细胞(Treg)或者包含所述工程化Treg的药物组合物用于在受试者中修复和/或再生肝脏组织，其中所述CAR包含肝脏特异性抗原识别结构域。
[0019]在另一方面，本专利技术提供了在受试者中促进肝脏组织修复和/或再生的方法，其包括向所述受试者施用包含嵌合抗原受体(CAR)的工程化Treg或者包含所述工程化Treg的药物组合物的步骤，其中所述CAR包含肝脏特异性抗原识别结构域。
[0020]在另一方面，本专利技术提供了包含嵌合抗原受体(CAR)的工程本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含嵌合抗原受体(CAR)的工程化调节性T细胞(Treg)，其中所述CAR包含特异性结合去唾液酸糖蛋白受体(ASGR)的抗原识别结构域。2.根据权利要求1所述的工程化Treg，其中所述抗原识别结构域特异性结合ASGR1和/或ASGR2，优选ASGR1。3.根据权利要求1或权利要求2所述的工程化Treg，其中所述抗原识别结构域结合人ASGR。4.根据权利要求1至3任一项所述的工程化Treg，其中所述抗原识别结构域结合一种或多种选自人ASGR1同种型a、人ASGR1同种型b、人ASGR2同种型a、人ASGR2同种型b、人ASGR2同种型c和人ASGR2同种型d的多肽，优选地其中所述抗原识别结构域结合人ASGR1同种型a。5.根据权利要求1至4任一项所述的工程化Treg，其中所述抗原识别结构域以约1pM至约100nM、约1pM至约10nM或者约1pm至约1nM的亲和力结合ASGR。6.根据权利要求1至5任一项所述的工程化Treg，其中所述抗原识别结构域为抗体、抗体片段或源自抗体。7.根据权利要求1至6任一项所述的工程化Treg，其中所述抗原识别结构域为抗原结合片段(Fab)、单链抗体(scFv)或单域抗体(sdAb)，优选单域抗体(sdAb)。8.根据权利要求6或权利要求7所述的工程化Treg，其中所述抗原识别结构域包含一个或多个选自SEQ ID NO:11
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73或其含有三个或更少的氨基酸取代的衍生物的CDR区。9.根据权利要求6至8任一项所述的工程化Treg，其中所述抗原识别结构域包含含有：分别为SEQ ID NO:11、12和13；分别为SEQ ID NO:14、15和16；分别为SEQ ID NO:17、18和19；分别为SEQ ID NO:20、21和22；分别为SEQ ID NO:23、24和25；分别为SEQ ID NO:26、27和28；和/或分别为SEQ ID NO:29、30和31的CDR1区、CDR2区和CDR3区；优选地其中所述抗原识别结构域包含含有分别为SEQ ID NO:11、12和13的CDR1区、CDR2区和CDR3区。10.根据权利要求6至9任一项所述的工程化Treg，其中所述抗原识别结构域包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，其含有：(i)分别为SEQ ID NO:11、12和13；以及分别为SEQ ID NO:23、24和25；或者分别为SEQ ID NO:26、27和28；或者分别为SEQ ID NO:29、30和31；优选地其中所述抗原识别结构域包含含有分别为SEQ ID NO:11、12和13以及分别为SEQ ID NO:23、24和25的CDR1区、CDR2区和CDR3区；(ii)分别为SEQ ID NO:14、15和16；以及分别为SEQ ID NO:23、24和25；或者分别为SEQ ID NO:26、27和28；或者分别为SEQ ID NO:29、30和31；优选地其中所述抗原识别结构域包含含有分别为SEQ ID NO:14、15和16以及分别为SEQ ID NO:26、27和28的CDR1区、CDR2区和CDR3区；或者(iii)分别为SEQ ID NO:17、18和19；以及分别为SEQ ID NO:23、24和25；或者分别为SEQ ID NO:26、27和28；或者分别为SEQ ID NO:29、30和31；优选地其中所述抗原识别结构域包含含有分别为SEQ ID NO:17、18和19以及分别为SEQ ID NO:29、30和31的CDR1区、CDR2区和CDR3区。11.根据权利要求1至10任一项所述的工程化Treg，其中所述抗原识别结构域包含或由与SEQ ID NO:74
‑
80的一个或多个具有至少约70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列组成，优选地其中所述抗原识别结构域包含或由与SEQ ID NO:
74具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列组成。12.根据权利要求1至11任一项所述的工程化Treg，其中所述CAR包含跨膜(TM)结构域和胞内信号传导结构域，以及任选地其中所述CAR包含铰链结构域和/或一个或多个共刺激结构域。13.根据权利要求1至12任一项所述的工程化Treg，其中所述CAR包含一个或多个选自由CD28铰链结构域、CD8α铰链结构域、IgG铰链结构域和IgD铰链结构域组成的组的铰链结构域，优选地所述CAR包含CD8α铰链结构域或CD28铰链结构域。14.根据权利要求1至13任一项所述的工程化Treg，其中所述CAR包含一个或多个选自由CD28 TM结构域、ICOS TM结构域、CD8αTM结构域、CD4 TM结构域、OX40 TM结构域、4
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1BB TM结构域和CD3ζTM结构域组成的组的TM结构域，优选地所述CAR包含CD28 TM结构域。15.根据权利要求1至14任一项所述的工程化Treg，其中所述CAR包含一个或多个选自由CD28信号传导结构域、ICOS信号传导结构域、OX40信号传导结构域、4
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1BB信号传导结构域、CD27信号传导结构域或TNFRSF25信号传导结构域组成的组的共刺激结构域，优选地其中所述CAR包含CD28信号传导结构域。16.根据权利要求1至15任一项所述的工程化Treg，其中所述CAR包含选自由CD3ζ信号传导结构域或其任何同源物、CD3多肽、syk家族酪氨酸激酶、src家族酪氨酸激酶、CD2、CD5和CD8组成的组的胞内信号传导结构域，优选地其中所述CAR包含所述CD3ζ信号传导结构域。17.根据权利要求1至16任一项所述的工程化Treg，其中所述CAR包含：CD8α铰链结构域或CD28铰链结构域；CD28 TM结构域；CD28信号传导结构域；以及所述CD3ζ信号传导结构域。18.根据权利要求1至17任一项所述的工程化Treg，其中所述CAR包含通过自切割或切割结构域连接的信号肽和/或报告肽。19.根据权利要求1至18任一项所述的工程化Treg，其中所述CAR包含或由与SEQ ID NO:149
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152或167
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169中的一个或多个具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列组成。20.根据权利要求1至19任一项所述的工程化Treg，其中所述CAR包含含有STAT5结合基序以及JAK1
‑
结合基序和/或JAK2
‑
结合基序的胞内结构域。21.根据权利要求20所述的工程化Treg，其中所述胞内结构域包含JAK3
‑
结合基序。22.根据权利要求20或权利要求21所述的工程化Treg，其中所述胞内结构域不包含STAT3结合基序。23.根据权利要求20或权利要求21所述的工程化Treg，其中所述胞内结构域不包含氨基酸序列YXXQ(SEQ ID NO:133)。24.根据权利要求1至19任一项所述的工程化Treg，其中所述CAR不包含含有STAT5结合基序、JAK
‑
1结合基序和/或JAK
‑
2结合基序的胞内结构域，优选地所述胞内结构域不包含STAT5结合基序。25.根据权利要求1至24任一项所述的工程化Treg，其中所述Treg为CD4
+
CD25
+
CD127
‑
T细胞和/或CD4
+
CD25
+
FOXP3
+
T细胞。26.根据权利要求1至25任一项所述的工程化Treg，其中所述Treg包含编码FOXP3多肽的外源多核苷酸。
27.包含根据权利要求1至26任一项所述的工程化Treg的药物组合物。28.根据权利要求1至26任一项所述的工程化Treg，或根据权利要求27所述的药物组合物，用于诱导受试者对肝移植的耐受性，或用于...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：伦敦国王学院，
类型：发明
国别省市：