用于1型糖尿病的胰岛素原肽制造技术

本发明专利技术涉及一种肽。所述肽可以用于治疗或预防1型糖尿病(T1D)，特别是具有DR3

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于1型糖尿病的胰岛素原肽


[0001]本专利技术涉及一种或多种可用于治疗或预防1型糖尿病(T1D)的肽。

技术介绍

[0002]1型糖尿病(T1D)是一种自身免疫疾病，其特点在于代谢功能障碍，最显著的是葡萄糖代谢失调，并伴有特征性的长期血管和神经系统并发症。T1D是最常见的自身免疫疾病之一，美国250个个体中的一个就受其影响，在美国每年报告约10,000至15,000例新病例，并且发病率正在上升。T1D患病率最高的地区是北欧。
[0003]T1D的特点在于胰岛素绝对缺乏，使得患者依赖于外源性胰岛素生存。在具有高血糖症状的T1D急性临床发作之前，存在长期的无症状临床阶段，在此期间，产生胰岛素的β细胞被逐渐破坏。
[0004]一旦发作，终生需要注射合成胰岛素的治疗，因为β细胞不会再生。一旦确定，糖尿病对患者、患者家庭和社会都是主要负担。尽管现代胰岛素的剂量、制剂和递送系统可以将血糖维持在合理的限度内，但在几年内不可避免地发生该疾病的并发症。糖尿病最常见的严重并发症是肾衰竭、失明和神经功能丧失。糖尿病患者的寿命平均缩短10年。鉴于此背景，重要的是考虑治疗或预防T1D的新手段。
[0005]与所有自身免疫疾病一样，T1D是由于免疫系统对自身抗原遭遇的不适当激活引起的，特别是通过特异性HLA分子呈递给它的短肽序列。尽管该病症可以在临床上越来越好地控制，但其仍对生活质量和预期寿命产生负面影响。
[0006]在1型糖尿病中丧失自身耐受性的原因仍然存在争议，但已经确定的是，HLA系统构成主要的遗传风险因素。HLA
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DR3
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DQ2(DRB1*03:01
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DQA1*05:01
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DQB1*02:01)是1型糖尿病患者中最常见的单倍型，约占34％(Erlich H et al.(2008)Diabetes 57(4):1084
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1092)，从而描绘了一个主要的、可鉴定的疾病群组。鉴于HLA分子的抗原呈递性能，假定与HLA
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DR3
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DQ2相关的糖尿病风险与潜在致糖尿病自身抗原的肽表位的选择性呈递有关。因此，鉴定这些自身抗原和特异性疾病决定区域是了解疾病病因学的重要步骤。
[0007]在临床研究中发现疾病相关表位的尝试通常涉及洗脱或预测与抗原呈递细胞上的候选HLA分子结合的肽和/或体外检查患有1型糖尿病的受试者中的T细胞应答。这种方法已经从许多胰岛抗原产生了几种潜在相关的HLA
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DR3
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DQ2限制性表位，包括谷氨酸脱羧酶65(GAD65)和胰岛抗原
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2(IA
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2)(Di Lorenzo TP et al.(2007)Clin Exp Immunol 148(1):1
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16)。有趣的是，通常认为与人类和小鼠1型糖尿病早期阶段有关的胰岛素原(Narendran P,et al.(2003)Autoimmun Rev 2(4):204
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210)尚未被鉴定为由HLA
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DR3
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DQ2呈递的糖尿病相关表位的稳健来源。然而，最近的一项研究强调了胰岛素原C肽的区域在患有1型糖尿病的受试者中产生HLA
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DQ2限制性CD4
+
T细胞应答(So M et al.(2018)Proc Natl Acad Sci USA 115(42):10732
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10737)。
[0008]小鼠模型中的临床前数据通常表明存在“驱动T细胞”，即，集中在自身抗原的单个肽区域上的T细胞群。这些的重要性在于它们对疾病具有更大的影响。作为其治疗推论，如
果可以使驱动T细胞无效，则对控制疾病的作用优于使用二线的、次优势的靶标/T细胞。在人类疾病中可能很难找到驱动T细胞和来自抗原的相关肽。随着疾病随着时间的推移而发展，许多次优势的T细胞克隆和靶标可能参与其中，从而掩盖驱动T细胞/靶标。
[0009]本专利技术解决了如何鉴定与人类1型糖尿病相关的驱动T细胞的分子靶标。通过鉴定这些肽，肽免疫疗法可以使最重要的疾病驱动因素丧失能力。这对于尚未启动自身免疫的个体尤为重要和有效。
[0010]专利技术人使用糖尿病易感的HLA转基因小鼠，利用体内方法来发现表位。通过抗原和肽促进易感动物中自身免疫性糖尿病发展的能力来检查抗原和肽的疾病相关性。本领域使用的HLA
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DR3
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DQ2转基因小鼠不会自发发展为糖尿病(de Kauwe AL et al.(2009)J Immunol 182(12):7440
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7450)。为了促进这种疾病表型，在C57BL/6背景上，专利技术人构建了一种新的HLA转基因小鼠模型，其表达1型糖尿病的高风险基因(DRB1*03:01
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DQA1*05:01
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DQB1*02:01)以及在大鼠胰岛素启动子(RIP)和人类CD4下表达共刺激分子CD80(B7.1)的人类CD80β细胞特异性表达。佐剂抗原初次免疫(adjuvanted antigen priming)作为加速和延长糖尿病外显率的机制的应用证明了特异性胰岛抗原作为HLA
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DR3
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DQ2背景中致糖尿病驱动因子的重要性。专利技术人强调了一种新的HLA指导的方法来鉴定体内疾病相关的抗原驱动因子，并且鉴定了可用于肽免疫疗法以诱导耐受性的新型非天然存在的肽。专利技术人已经将胰岛素原的致糖尿病作用精确定位到先前未报道的区域，该区域开始于B链的C末端。
[0011]来自鼠或人的本专利技术胰岛素原的B23
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C20区域的肽先前未被鉴定为是HLA
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DR3或HLA
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DQ2限制性的。此外，先前的研究没有直接证明该区域与任何单倍型相关的糖尿病发生性。实际上，尚未提出使用针对选定的HLA背景的佐剂抗原初次免疫来探索抗原和表位的潜在致糖尿病性和相对优先性的方法。
[0012]很少有研究检查了T细胞对B
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C连接的反应性，并且仍然很少研究对于HLA
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DR3/DQ2限制性应答。Semana等人以前在糖尿病患者中发现了HLA
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DR限制性CD4+T细胞对胰岛素原肽C3
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16的应答，但未对HLA进行分析(Semana G,et al.(1999)J Autoimmun 12(4):259
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267)。在HLA
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DRB1*0401/DQB1*0302基因型(HLA
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DR4/DQ8单倍型)的自身抗体阳性个体中，经常识别出长B11
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C24肽(Durinovic
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Bello I,et al.(2002)J Autoimmun 18(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少78％的同源性的肽。2.根据权利要求1所述的肽，与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％或99％的同源性。3.根据权利要求1或权利要求2所述的肽，具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的氨基酸序列。4.根据权利要求3所述的肽，具有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的氨基酸序列。5.一种肽组合，包含两种或更多种根据权利要求1至4中任一项所述的肽。6.一种药学上可接受的组合物，包含根据权利要求1至5中任一项所述的肽或肽组合以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。7.根据权利要求6所述的药学上可接受的组合物，还包含半胱氨酸。8.根据权利要求6或7所述的药学上可接受的组合物，应用于治疗。9.根据权利要求8所述的药学上可接受的组合物，应用于1型糖尿病(T1D)的治疗或预防。10.根据权利要求9所述的药学上可接受的组合物，应用于1型糖尿病(T1D)的治疗或预防，其中，患者具有DR3单倍型。11.根据权利要求10所述的药学上可接受的组合物，应用于1型糖尿病(T1D)的治疗或预防，其中，所述患者具有DR3
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DQ2单倍型。12.根据权利要求6或7所述的药学上可接受的组合物，应用于治疗或预防1型糖尿病(T1D)的药物的制备。13.根据权利要求12所述的药学上可接受的组合物，应用于治疗或预防1型糖尿病(T1D)的所述药物的制备，其中，患者具有DR3单倍型。14.根据权利要求13所述的药学上可接受的组合物，应用于治疗或预防1型糖尿病(T1D)的所述药物的制备，其中，所述患者具有DR3
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DQ2单倍型。15.根据权利要求6至15中任一项所述的药学上可接受的组合物，其中，所述肽或所述肽组合涂覆在纳米颗粒上。16.根据权利要求15所述的药学上可接受的组合物，其中，所述肽或所述肽组合通过与附着于所述纳米颗粒的MHC复合体结合而涂覆在所述纳米颗粒上。17.根据权利要求6至16中任一项所述的药学上可接受的组合物，其中，所述组合物被配制为通过肠胃外、口服或局部途径递送，包括静脉内、皮内、肌内、皮下、腹膜内、鼻腔、口服或表皮途径。18.根据权利要求17所述的药学上可接受的组合物，其中，所述组合物被配制为通过皮内途径递送。19.一种1型糖尿病(T1D)的治疗或预防方法，其中，将根据权利要求6或7所述的药学上可接受的组合物施用于患有T1D的患者或被鉴定为处于T1D高风险的非糖尿病个体。20.根据权利要求14所述的治疗或预防方法，其中，所述患者具有DR3单倍型。21.根据权利要求20所述的治疗或预防方法，其中，所述患者具有DR3
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DQ2单倍型。22.根据权利要求19至21中任一项所述的治疗或预防方法，其中，将本发明所述的药学上可接受的组合物施用于具有β细胞群残余的患者。
23.根据权利要求19至22所述的治疗或预防方法，其中，所述药学上可接受的组合物通过肠胃外、口服或局部途径施用，包括静脉内、皮内、肌内、皮下、腹膜内、鼻腔、口服或表皮途径。24.根据权利要求23所述的治疗或预防方法，其中，通过皮内途径施用所...

【专利技术属性】
技术研发人员：马克，
申请(专利权)人：伦敦国王学院，
类型：发明
国别省市：