TREM2嵌合受体制造技术

本发明专利技术涉及与TREM2配体结合的嵌合受体(例如包含单链和多链CAR两者的CAR)及其在疗法中的用途。具体地说，本发明专利技术提供了一种嵌合受体，其包括：(a)包括TREM2的配体结合结构域或其功能变体的外结构域，任选地其中所述外结构域对脱落酶的切割具有抗性；(b)跨膜结构域；以及(c)包括细胞内信号传导结构域的内结构域。域。域。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】TREM2嵌合受体


[0001]本专利技术总体上涉及嵌合受体、TREM2生物学及相关疗法领域，如治疗以神经元损伤、神经炎症或神经变性为特征的神经系统病症。更具体地说，本专利技术提供了与TREM2配体(例如ApoE、Aβ寡聚物等)结合并在免疫细胞(例如Treg)中表达的嵌合抗原受体(CAR)(单链和多链CAR)。这种免疫细胞在与TREM2表达细胞和/或可溶性TREM2积累相关的疾病和病状中，或其中TREM2配体存在和/或表达的疾病和病症中具有治疗用途。本专利技术进一步提供了编码这种CAR的核酸分子和含有所述核酸分子的载体，其可用于修饰宿主细胞(例如免疫细胞)以表达CAR。

技术介绍

[0002]炎症是人体对损伤和感染的生物响应，其功能是消除细胞损伤的最初原因并起到修复作用。然而，导致慢性炎症的免疫响应会导致组织损伤并最终破坏。慢性炎症通常是不适当的免疫响应的结果。
[0003]神经系统炎症(“神经炎症”)可能特别有害，尤其是长期持续时。虽然炎症本身可能不是致病的，但它可导致周围神经系统(例如神经性疼痛、纤维肌痛)和中枢神经系统(例如，肌萎缩侧索硬化症(ALS)、阿尔茨海默病、帕金森病、多发性硬化症和其它脱髓鞘疾病、缺血性和创伤性脑损伤、抑郁症和自闭症谱系障碍)的疾病发病机制。神经系统和免疫系统之间的交流可能是神经炎症的重要因素。
[0004]小胶质细胞是巨噬细胞样骨髓细胞，其通过调节细胞死亡和神经发生以及通过促进出生后发育期间的突触修剪而在维持神经系统的稳态中起着关键作用。小胶质细胞的一个关键性质是它们能够根据环境变化改变其活化状态。因此，在神经元损伤或神经退行性/神经炎症性疾病中，小胶质细胞被活化并发挥保护作用，如细胞碎片的吞噬作用和神经营养介质的分泌。然而，在某些情况下，小胶质细胞通过产生有毒分子、释放细胞因子/趋化因子、将抗原呈递给T细胞并吞噬受伤的神经元来放大神经组织的损伤。考虑到全球人口中患有神经炎症和神经退行性病症的比例正在增加，迫切需要新的疗法来调节小胶质细胞活性和可塑性，作为治疗这些疾病的手段。
[0005]TREM2是Ig超家族的1型跨膜蛋白成员，在小胶质细胞(和其它髓细胞亚群)上表达，并结合神经元和神经胶质损伤期间释放的阴离子脂质和DNA，以及其它分子，如淀粉样蛋白β低聚物(Aβ)。TREM2与DAP12形成复合物，所述DAP12在配体与TREM2结合后，通过其ITAM基序将信号转导到细胞质中。虽然据报道TREM2支持小胶质细胞代谢并促进细胞的迁移、细胞因子释放、吞噬作用、增殖和存活，但TREM2在特定疾病状况下的作用是复杂的。具体地说，虽然TREM2/DAP12介导的小胶质细胞活化对某些疾病有害，但据报道它对其它病状有益，并且TREM2作为促炎或抗炎分子的作用尚不清楚。因此，一些团体建议的基于靶向TREM2/DAP12本身的疗法可能仅代表治疗特定病状的特定方法。因此，需要调节小胶质细胞活化状态和保护受损神经组织的替代疗法，以应对各种神经炎症和神经退行性病状。
[0006]CD4+Foxp3+调节性T细胞(Treg)是一种淋巴细胞亚群，其通过抑制各种效应免疫
细胞亚群(包含巨噬细胞和树突状细胞等骨髓细胞)的功能而对于维持显性免疫耐受至关重要。此外，还已知Treg可促进组织修复和再生。已知Treg参与控制神经炎症性病症，如多发性硬化症、肌萎缩侧索硬化症以及缺血性和创伤性脑损伤。改善免疫病理学和重新建立炎症性疾病耐受性的前景促使人们对基于Treg的免疫疗法的临床开发越来越感兴趣。为了使Treg免疫疗法成功，必须开发出促进Treg运输到组织损伤部位并诱导其原位活化的策略。

技术实现思路

[0007]本专利技术人已经确定，用于治疗与TREM2途径相关(即与可溶性TREM2或TREM2表达细胞的积累相关)的神经退行性和其它病状的通用疗法可以通过向免疫细胞亚群提供包括TREM2本身的细胞外结构域的嵌合抗原受体来开发。与本领域提出的其它直接TREM2靶向方法相反，专利技术人利用TREM2的细胞外结构域的方法通过不直接靶向分子或表达所述分子的细胞，避免了TREM2在特定条件下的作用不明确的问题。具体地说，专利技术人发现，可以通过使用TREM2的经修饰的细胞外结构域来产生功能性CAR以防止脱落酶切割所述结构域。更具体地说，鉴于Treg众所周知的旁观者效应及其一旦活化就降低免疫响应并调节骨髓细胞和其它免疫细胞亚群的活化状态的能力，这种CAR在Treg表面上的表达可能提供一种通用疗法，所述通用疗法可用于治疗与炎症相关的病状，其中TREM2在疾病部位局部表达。
[0008]因此，在一方面，本专利技术提供了一种嵌合受体，其包括：
[0009](a)包括TREM2的配体结合结构域或其功能变体的外结构域；
[0010](b)跨膜结构域；以及
[0011](c)包括细胞内信号传导结构域的内结构域。
[0012]在特定方面，本专利技术提供了一种嵌合受体，其包括：
[0013](a)包括TREM2的配体结合结构域或其功能变体的外结构域，其中所述外结构域对脱落酶的切割具有抗性；
[0014](b)跨膜结构域；以及
[0015](c)包括细胞内信号传导结构域的内结构域。在另外的方面，本专利技术提供了一种核酸分子，所述核酸分子编码本专利技术的嵌合受体。
[0016]另一方面，本专利技术提供了一种载体，所述载体包括本专利技术的核酸分子。
[0017]本专利技术还提供了表达本专利技术的嵌合受体的细胞(例如免疫细胞)和/或包括编码本专利技术的嵌合受体的核酸分子的细胞(例如免疫细胞)。所述细胞可以提供在细胞群中，这构成了本专利技术的另外的方面。
[0018]另一方面，本专利技术提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括本专利技术的细胞或细胞群。
[0019]本专利技术进一步提供了一种用于生产本专利技术的细胞的方法，所述方法包括将本专利技术的核酸或载体引入细胞中。
[0020]本专利技术进一步提供了一种用于治疗和/或预防受试者中的疾病或病状(例如神经系统疾病或病状)的方法，所述方法包括向所述受试者施用根据本专利技术的细胞、细胞群或药物组合物的步骤。
[0021]可替代地，从其它角度来看，本专利技术提供了一种根据本专利技术的细胞、细胞群或药物
组合物，其用于疗法中(例如治疗和/或预防神经系统疾病或病状)。
具体实施方式
[0022]术语“嵌合受体”是指包括来自两个或更多个蛋白质的连接结构域(例如来自第一蛋白质的外结构域和来自第二蛋白质的内结构域)的受体蛋白。通常，所述结构域中的至少一个结构域来源于受体蛋白。因此，嵌合受体可被视为“工程化受体”，并且这些术语在本文中可互换使用。
[0023]嵌合受体可以包括单个多肽链上的连接结构域(单个连续链)或者可以包括两个或更多个多肽链(多链嵌合受体)，其中所述多肽链中的至少一个多肽链包括来自两个或更多个蛋白质的连接结构域。因此，作为多链受体的本专利技术的嵌合受体可以包括第一多肽链和第二多肽链。因此，嵌合受体可以包括至少两个多肽链，它们在共表达时可以相互缔本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种嵌合受体，其包括：(a)包括TREM2的配体结合结构域或其功能变体的外结构域；(b)跨膜结构域；以及(c)包括细胞内信号传导结构域的内结构域。2.根据权利要求1所述的嵌合受体，其中所述外结构域对脱落酶的切割具有抗性。3.根据权利要求1或权利要求2所述的嵌合受体，其中所述嵌合受体包括单个多肽链中的(a)
‑
(c)。4.根据权利要求1、2或3所述的嵌合受体，其中所述嵌合受体包括两个或更多个多肽链，其中所述多肽链中的至少一个多肽链包括来自两个或更多个蛋白质的连接结构域，任选地其中所述外结构域和内结构域位于不同的多肽链中。5.根据权利要求2至4中任一项所述的嵌合受体，其中所述脱落酶是ADAM(崩解蛋白和金属蛋白酶)蛋白家族的成员，或者是金属蛋白酶的成员，如美普林β。6.根据权利要求2至5中任一项所述的嵌合受体，其中所述脱落酶是ADAM10和/或ADAM 17。7.根据权利要求1至6中任一项所述的嵌合受体，其中所述外结构域包括：(i)如SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的功能变体；或(ii)如SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的功能变体，其中，位于与SEQ ID NO:4的位置78等效的位置处的氨基酸是碱性氨基酸，优选地，赖氨酸或精氨酸。8.根据权利要求1至7中任一项所述的嵌合受体，其中所述外结构域包括SEQ IDNO:5或6中所示的氨基酸序列或其功能变体，或由所述氨基酸序列或其功能变体组成，其中，位于与SEQ ID NO:6的位置78等效的位置处的氨基酸是碱性氨基酸，优选地，赖氨酸或精氨酸。9.根据权利要求1至7中任一项所述的嵌合受体，其中所述外结构域包括以下各项或由以下各项组成：(i)如SEQ ID NO:7或8中所示的氨基酸序列或其功能变体，其中(a)位于与SEQ ID NO:8的位置78等效的位置处的氨基酸是碱性氨基酸，优选地，赖氨酸或精氨酸；(b)位于与SEQ ID NO:7或8的位置139
‑
140等效的位置处的氨基酸：(1)分别不是组氨酸和/或丝氨酸；和/或(2)被修饰成使所述外结构域对所述脱落酶的切割具有抗性；并且任选地(c)位于与SEQ ID NO:7或8的位置118
‑
119等效的位置处的氨基酸：(1)分别不是精氨酸和/或天冬氨酸；和/或(2)被修饰成使所述外结构域对脱落酶的切割具有抗性。10.根据权利要求1至9中任一项所述的嵌合受体，其中所述嵌合受体包括所述TREM2的配体结合结构域和所述跨膜结构域之间的铰链结构域。11.根据权利要求10所述的嵌合受体，其中所述铰链结构域是，或来源于，人CD8α、CD4、CD28、CD7或TREM2的铰链区域或茎结构域。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的嵌合受体，其中所述嵌合受体包括所述TREM2的配体结合结构域上游的信号序列。13.根据权利要求12所述的嵌合受体，其中所述信号序列是CD8α信号序列。14.根据权利要求1至13中任一项所述的嵌合受体，其中所述嵌合受体包括一个或多个共刺激信号传导结构域。15.根据权利要求14所述的嵌合受体，其中所述一个或多个共刺激信号传导结构域来自选自以下的蛋白质：CD27、CD28、4
‑
IBB(CD137)、OX40(CD134)、CD30、CD40、ICOS(CD278)、LFA
‑
1、CD2、CD7、LIGHT、NKD2C、B7
‑
H2和特异性结合CD83的配体。16.根据权利要求1至15中任一项所述的嵌合受体，其中所述跨膜结构域来自选自以下的蛋白质：受体酪氨酸激酶(RTK)、M
‑
CSF受体、CSF
‑
1R、Kit、TIE3、含ITAM的蛋白质、DAP12、DAP10、Fc受体、FcR
‑
γ、FcR
‑
ε、FcR
‑
β、TCR
‑
ζ、CD3
‑
γ、CD3
‑
δ、CD3
‑
ε、CD3
‑
ζ、CD3
‑
η、CD5、CD22、CD79a、CD79b、CD66d、TNF
‑
α、NF
‑
κB、TLR(toll样受体)、TLR5、Myd88、淋巴细胞受体链、IL
‑
2受体、IgE、IgG、CD16α、FcγRIII、FcγRII、CD28、4
‑
1BB、CD4、CD8(例如CD8α)、NKG2D(CD314)和T...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：伦敦国王学院，
类型：发明
国别省市：