本申请公开了一种CEA截短体及其制备方法和应用。本申请中开发了基于基因工程技术的CEA制备方法，该方法通过对CEA蛋白进行截短改造，获得CEA截短体，经人源同义密码子偏好性优化的编码CEA截短体的多核苷酸导入载体，构建了CEA真核表达体系，提高了可溶性目的蛋白的表达量和活性，易于分离纯化。易于分离纯化。易于分离纯化。
【技术实现步骤摘要】
CEA截短体、其制备方法和应用
[0001]本专利技术涉及基因工程领域，特别涉及CEA截短体、其制备方法和应用。
技术介绍
[0002]癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen，CEA)，是一种免疫球蛋白超家族的细胞表面粘附分子。CEA包括702个氨基酸，主要通过磷脂酰肌醇(GPI)锚固在细胞膜上。血清CEA的测定对患有恶性病的患者，尤其是对于结肠直肠癌患者的预后和处理具有重大意义。续测定可以监控经过治疗的患者癌症的渐进、回归或复发等现象。临床上已将CEA动态检测作为其阳性肿瘤早期诊断及预后评价的重要监控指标之一。近年来研究发现，CEA也可以为人体内特异性T细胞识别，诱发抗肿瘤免疫反应，因此又被用于CEA阳性肿瘤的免疫生物治疗。
[0003]现有技术中已公开了一些CEA的制备方法，例如天然提取法和原核系统表达法。天然提取需要用次氯酸从结肠癌肝转移灶中沉淀肿瘤细胞抽提物，然后经离子交换层析和亲和层析获得，但该法得到的CEA可能是不同特性的数个分子的混合物，分离难度高。利用原核表达系统表达缺乏人CEA翻译后后加工与修饰，存在产物生物学活性较低、灵敏度低的缺点。
[0004]为克服原核系统表达的缺陷，部分研究人员开发了基于真核表达系统的CEA制备方法，但其表达量极低，难以工业化。
[0005]因此，本领域尚需寻找可大量表达生物学活性较高的人源CEA蛋白的方法。
技术实现思路
[0006]本专利技术的目的在于提供一种CEA截短体。
[0007]本专利技术的另一目的在于提供一种重组CEA截短体制备方法。
[0008]本专利技术的另一目的在于提供一种编码CEA截短体的多核苷酸序列。
[0009]本专利技术的另一目的在于提供与编码CEA截短体的多核苷酸序列适配的载体。
[0010]本专利技术的另一目的在于提供含有编码A
‑
CEA截短体的多核苷酸序列的载体。
[0011]本专利技术的另一目的在于提供含有编码CEA截短体的多核苷酸序列的试剂盒。
[0012]为解决上述技术问题，本专利技术第一方面，提供了一种CEA截短体，且所述CEA截短体选自以下任一种：
[0013](i)具有如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列的多肽；
[0014](ii)具有与如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3所示序列的同源性大于95％的氨基酸序列的多肽。
[0015]本专利技术第二方面，提供了一种编码CEA截短体的多核苷酸，所述多核苷酸经密码子优化，且所述多核苷酸选自以下任一种：
[0016](i)具有如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.4所示序列的多核苷酸；
[0017](ii)具有与如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.4所示序列的同源性大于95％的多核苷酸；和
[0018](iii)具有与(i)或(ii)中所述的多核苷酸序列互补的多核苷酸。
[0019]本专利技术第三方面，提供了一种表达载体，所述表达载体包括本专利技术第二方面提供的多核苷酸。
[0020]在一些优选的方案中，所述表达载体为哺乳动物表达载体，更优选为pcDNA3.4。
[0021]在一些优选的方案中，所述表达载体包括编码A蛋白的多核苷酸序列，更优选地，所述表达载体中，所述的多核苷酸的5
’
端连接有编码A蛋白的多核苷酸序列。
[0022]在一些优选的方案中，所述编码A蛋白的多核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
[0023]在一些优选的方案中，所述表达载体包括编码A
‑
CEA截短体融合蛋白的多核苷酸序列。
[0024]在一些优选的方案中，所述编码A
‑
CEA截短体融合蛋白的多核苷酸序列选自以下任一种：
[0025](i)具有如SEQ ID NO.11或SEQ ID NO.9所示序列的多核苷酸；
[0026](ii)具有与如SEQ ID NO.11或SEQ ID NO.9所示序列的同源性大于95％的多核苷酸；和
[0027](iii)具有与(i)或(ii)中所述的多核苷酸序列互补的多核苷酸。在一些优选的方案中，所述表达载体包括表达His
×
6标签的多核苷酸序列，更优选地，所述表达载体中，所述的多核苷酸的3
’
端连接有表达His
×
6标签的多核苷酸序列。
[0028]在一些优选的方案中，所述表达载体包括位于所述的多核苷酸起始密码子前的kozak序列，更优选地，所述kozak序列如SEQ ID NO.7所示.
[0029]本专利技术第四方面，提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包括本专利技术第三方面提供的表达载体；或者
[0030]所述宿主细胞的基因组中整合有如本专利技术第二方面提供的多核苷酸。
[0031]在一些优选的方案中，所述宿主细胞为CHO细胞(Chinese Hamster Ovary)或293F细胞，最优选为293F细胞。
[0032]本专利技术第五方面提供了一种制备CEA截短体的方法，所述方法包括步骤：培养本专利技术第四方面所述的宿主细胞，以表达出目的蛋白；和
[0033]分离所述目的蛋白，即得所述CEA截短体；
[0034]其中，所述目的蛋白具有如氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。
[0035]在一些优选的方案中，所述宿主细胞通过含有本专利技术第二方面所述多核苷酸的质粒转化CHO细胞或293F细胞获得。
[0036]在一些优选的方案中，所述转化的时间为15至24小时。
[0037]在一些优选的方案中，在含有增强剂和辅料的培养体系中培养所述宿主细胞。
[0038]在一些优选的方案中，在温度为35至37℃的环境中培养所述宿主细胞。
[0039]在一些优选的方案中，在CO2浓度为8％的环境中培养所述宿主细胞。
[0040]在一些优选的方案中，培养所述宿主细胞至成活率不低于50％，优选为60％时，离心收集上清液，获得含有目的蛋白的上清液。
[0041]在一些优选的方案中，所述分离所述目的蛋白的步骤包括：
[0042]将含有目的蛋白的上清液通过层析柱，进行洗脱，收集洗脱液。
[0043]在一些优选的方案中，所述层析柱为Ni
‑
柱亲和层析柱。
[0044]本专利技术第六方面提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括：如本专利技术第一方面提供的CEA截短体；或者
[0045]本专利技术第二方面提供的多核苷酸；或者
[0046]如本专利技术第三方面提供的表达载体；或者
[0047]如本专利技术第四方面所述的宿主细胞。
[0048]本专利技术相对于现有技术而言，至少具有下述优点：
[0049](1)本专利技术开发了基于基因工程技术的CEA制备方法，该方法通过对CEA蛋白进行截短改造，获得CEA截短体，本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种CEA截短体，其特征在于，所述CEA截短体选自以下任一种：(i)具有如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的多肽；(ii)具有与如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.1所示序列的同源性大于95％的氨基酸序列的多肽。2.一种编码CEA截短体的分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸经密码子优化，且所述多核苷酸选自以下任一种：(i)具有如SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.2所示序列的多核苷酸；(ii)具有与如SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.2所示序列的同源性大于95％的多核苷酸；和(iii)具有与(i)或(ii)中所述的多核苷酸序列互补的多核苷酸。3.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包括如权利要求2所述的多核苷酸。4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为哺乳动物表达载体，优选为pcDNA3.4。5.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体包括编码A
‑
CEA截短体融合蛋白的多核苷酸序列。6.根据权利要求5所述的表达载体，其特征在于，所述编码A
‑
CEA截短体融合蛋白的多核苷酸序列选自以下任一种：(i)具有如SEQ ID NO.11或SEQ ID NO.9...
【专利技术属性】
技术研发人员：蒋析文，颜青青，黄黉，汪育泰，陈游，
申请(专利权)人：广州达安基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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