一种检测含有KPC-15基因肺炎克雷伯菌的PCR试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种检测含有KPC-15基因肺炎克雷伯菌的PCR试剂盒，所述试剂盒含有扩增KPC-15基因的特异性引物KPC-15TF和KPC-15TR，所述引物的序列分别如序列表中SEQ?ID?NO.7和SEQ?ID?NO.8所示。本发明专利技术还公开了所述的所述试剂盒的使用方法。本发明专利技术的PCR试剂盒有利于监测耐药菌株、指导临床合理用药、减少耐药菌产生和传播。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，涉及肺炎克雷伯临床耐药菌株，具体涉及一株肺炎克雷伯临床耐药菌株携带有新耐药的基因KPC-15。本专利技术还涉及检测携带有KPC-15基因的PCR检测方法。
技术介绍
肺炎克雷伯菌是医院感染的常见病原菌，其耐药的主要机制是细菌产生质粒介导的超广谱-内酰胺酶(ESBLs)和头孢菌素酶(AmpC酶)。碳青酶烯类抗菌药物是目前临床使用的抗菌谱广、抗菌活性强的一类抗菌药物，尤其对产ESBLs和AmpC酶肠杆菌科细菌感染的治疗有较好的疗效；但随着碳青酶烯类抗菌药物在临床上使用增加，碳青霉烯类抗生素的耐药性也不断增加且多重耐药性菌株的不断增加常导致临床抗菌药物治疗的失败和病程迁延。近年来，碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌呈世界性流行。肠杆菌科细菌对碳青霉稀类抗生素耐药的机制主要为AmpC酶过度表达合并外膜孔蛋白丢失，青霉素结合蛋白对碳青霉烯类抗生素亲和力的下降，碳青霉烯类抗生素水解β-内酰胺酶的产生I。其中，耐药的主要机制就是细菌产生碳青霉烯酶。KPC(Klebsiellapneumoniae carbapenemase,KPC)型碳青霉烯酶属于功能分类法的2f组，分子分类本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种KPC?15的PCR检测试剂盒，包括DNA裂解液、PCR反应液、阳性对照样品、高保真PCR酶；其中所述的DNA裂解液包括：100mM的NacCl，pH8.0的10mM的Tris?HCl，pH8.0的25mmol/L的EDTA，按重量体积比含量为1％的SDS和4μg/μL的蛋白酶K的混合溶液。所述的PCR反应液包括：终浓度各50?400μmol/L的4种dNTPs，终浓度为0.1?0.5μmol/L的引物KPC?15TF和KPC?15TR，其核苷酸序列分别如序列表SEQ?ID?NO.7和SEQ?ID?NO.8所示；1.5?5.0μmol/L的Mg2+。所述的阳性对照样品为KPC?15基因的阳...

【技术特征摘要】
1.一种KPC-15的PCR检测试剂盒，包括DNA裂解液、PCR反应液、阳性对照样品、高保真PCR酶； 其中所述的DNA裂解液包括:100mM的NacCl，pH8.0的IOmM的Tris-HCl，pH8.0的25mmol/L的EDTA，按重量体积比含量为I %的SDS和4 μ g/ μ L的蛋白酶K的混合溶液。所述的PCR反应液包括:终浓度各50-400 μ mo I/L的4种dNTPs，终浓度为0.1-0.5 μ mol/L的引物KPC-15TF和KPC-15TR，其核苷酸序列分别如序列表SEQ ID N0.7和 SEQ ID N0.8 所示；1.5-5.0 μ mol/L 的 Mg2+。所述的阳性对照样品为KPC-15基因的阳性质粒。2.权利要求1所述试剂盒检测KPC-15的方法，具体包括以下步骤: 1)样品的预处理:取检测的样品，加入600μ...

【专利技术属性】
技术研发人员：王冬国，杨林军，王海宝，陶宝鸿，燕东亮，胡恩平，
申请(专利权)人：台州市立医院，
类型：发明
国别省市：