用于牛粒细胞集落刺激因子及其变体的制剂制造技术

本发明专利技术提供了包含bG-CSF多肽或其变体、缓冲物质和赋形剂的稳定的水性制剂，其中所述制剂基本上不含聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单月桂酸酯。本发明专利技术还提供了使用所述制剂的冻干形式或粉末形式的方法以及制备所述制剂的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于牛粒细胞集落刺激因子及其变体的制剂粒细胞集落刺激因子(G-CSF)是生长激素超基因家族的成员。G-CSF刺激特定的骨髓前体细胞的增殖和它们分化为粒细胞。此外，G-CSF是中性粒细胞增殖和体内成熟的有效刺激(Cohen 等人，Proc.Natl.Acad.Sc1., 1987 ；84: 2484-2488 ;还参见 Heidari等人，Vet.Tmmol.1munopathol.2001 ;81:45-57)。G-CSF还能够诱导体外成熟中性粒细胞的功能激活或者“引发” (ffeisbart, R.H.等人,Annals of Internal Medicine 1989 ；110:297-303)。G-CSF已被证明引发人粒细胞并且增加由趋化肽N-甲酰基-甲硫氨酰基-亮氨酰基-苯丙氨酸刺激的超氧化物释放(S.Kitagawa,等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.1987 ; 144:1143-1146 和 C.F.Nathan, Blood 1989 ;74:301-306)并且被证明激活人中性粒细胞IgA介导的吞噬作用(Weisbart，R.H.，等人，Nature 1988 ；332:647-649)。已经发现G-CSF在治疗其中中性粒细胞的增加将提供益处的适应症中是有用的。G-CSF单独地或与其它化合物(例如其它细胞因子)结合也可用于培养中的细胞的生长或扩增，例如用于骨髓移植。重组人G-CSF (hG-CSF)的cDNA克隆和表达已被描述，并且重组hG_CSF显示天然分子的大多数，即使不是全部的生物学特性。(Souza, L.等人，Science 232，61-65(1986))。cDNA和基因组DNA克隆的序列分析允许氣基酸序列的减除并且表明蛋白质是具有30个氨基酸信号序列的204个氨基酸长。成熟蛋白质是174个氨基酸长并且不具有潜在的N-连接糖基化位点但具有几个用于O-连接糖基化的可能位点。包含hG-CSF的药物制剂在本领域是已知的并且包括许多制剂。例如，hG-CSF的多种制剂描述在 Piedmonte 等人，Advanced Drug Delivery Reviews, 60: 50-58 (2008),Herman 等人，Formulation, Characterization, and Stability of Protein Drugs,Rodney Pearlman 和 Y.John Wang 编辑，Plenum Press, New York (1996), Michaelis 等人的第5，919，757号美国专利和Sato等人的第6，908，610号美国专利中。通常，表面活性剂包含在hG-CSF制剂中并且可在潜在地不稳定界面处保护hG-CSF免受加工过程中接触的表面的影响并且免受其构象稳定性改变的影响。还描述了重组牛G-CSF (bG-CSF)的cDNA克隆和表达。例如，成熟bG_CSF的多核苷酸和多肽序列在第5，849，883号美国专利中提供，其还描述了克隆、分离和纯化多肽及其类似物的方法。成熟bG-CSF的长度为174个氨基酸并且具有与hG-CSF的82%同源性。Heidari等人在上面描述了 bG_CSF的表达、纯化和生物活性。向牛给予bG-CSF能提供治疗益处。因此，包含bG-CSF的药物制剂适用于利用其治疗潜能。然而，根据本领域已知的常规方法开发的bG-CSF药物制剂导致不期望的产品性质，例如bG-CSF多肽和/或制剂的聚集和不稳定。因此，亟需具有期望性质如最小的产品聚集和不稳定性质的稳定的bG-CSF药物制剂。因此，本专利技术提供了具有bG-CSF多肽或其变体的稳定的水性药物制剂，其显示期望的性质并且还提供了相关优点。本专利技术提供了包含bG-CSF多肽或其变体、缓冲物质和赋形剂的稳定的水性制剂，其中所述制剂基本上不含聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单月桂酸酯。本专利技术还提供了使用所述制剂的冻干形式或粉末形式的方法以及制备所述制剂的方法。本专利技术的牛粒细胞集落刺激因子(“bG-CSF”)的稳定的水性制剂包含bG-CSF多肽或其变体。如本文使用的，“牛G-CSF多肽”(或者称为“bG-CSF多肽”、“牛G-CSF”或“ bG-CSF，，)及其变体应包括具有CSF、bG-CSF类似物、bG-CSF突变体、改变糖基化的bG-CSF、PEG共轭bG-CSF、bG·-CSF亚型、bG-CSF模拟物、bG-CSF片段、混合bG-CSF蛋白质、其融合蛋白质、低聚物和多聚物、同系物、糖基化模型变体、变体、剪接变体和突变蛋白质的至少一种生物活性的那些多肽和蛋白质，不管相同的生物活性并且还不管其合成或制备方法，所述合成或制备方法包括但不限于通过显微注射核酸分子进行的体外、体内重组(不论从cDNA、基因组DNA、合成DNA或核酸的其它形式制备的)，合成、转基因和基因激活方法。此夕卜，术语bG-CSF多肽或其变体包括包含一个或多个氨基酸替换、添加或删除的bG-CSF多肽。参见第5，849，883号美国专利，例如牛G-CSF的类似物。长度为174个氨基酸的成熟bG-CSF多肽的序列如下:TPLGPARSLPQSFLLKCLEQVRKIQADGAELQERLCAAHKLCHPEELMLLRHSLGIPQAPLSSCSSQSLQLTSCLNQLHGGLFLYQGLLQALAGISPELAPTLDTLQLDVTDFATNIWLQMEDLGAAPAVQPTQGAMPTFTSAFQRRAGGVLVASQLHRFLELAYRGLRYLAEP。此外，具有初始甲硫氨酸氨基酸残基的bG-CSF多肽如下: MTPLGPARSLPQSFLLKCLEQVRKIQADGAELQERLCAAHKLCHPEELMLLRHSLGIPQAPLSSCSSQSLQLTSCLNQLHGGLFLYQGLLQALAGISPELAPTLDTLQLDVTDFATNIWLQMEDLGAAPAVQPTQGAMPTFTSAFQRRAGGVLVASQLHRFLELAYRGLRYLAEP。bG-CSF中许多氨基酸位置的替换已被描述。包括但不限于调节药物稳定性、增加激动剂活性、增加蛋白酶抗性、转化多肽成为拮抗剂等的那些替换被术语bG-CSF多肽或其变体所包括。术语bG-CSF多肽或其变体还包括糖基化bG-CSF，例如但不限于在任何氨基酸位置处的多肽糖基化、多肽的N-连接糖基化形式或多肽的O-连接糖基化形式。包含单一核苷酸变化的变体也被认为是bG-CSF多肽的生物活性变体。包含单一核苷酸变化的变体也被认为是bG-CSF的生物活性变体。此外，还包括剪接变体。术语bG-CSF多肽或其变体还包括任何一种或多种bG-CSF的bG-CSF异源二聚体、同源二聚体、异源多聚体或同源多聚体，或任何其它多肽、蛋白质、碳水化合物、聚合物、小分子、连接物、配体或通过化学方法连接的或表达为融合蛋白质的其它任何类型的活性分子(参见例如，第6，261，550号；第6，166，183号；第6，204，247号；第6，261，550号；和第6，017，876号美国专利)以及包含例如特定删除或其它改变仍保持生物活性的多肽类似物(参见例如，第6，261，55本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.09.23 US 61/3856291.定的水性制剂，其包含bG-CSF多肽或其变体、缓冲物质和赋形剂，其中所述制剂基本上不含聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单月桂酸酯。2.按权利要求1所述的制剂，其中所述bG-CSF多肽或其变体与连接物、聚合物或生物活性分子连接。3.按权利要求1所述的制剂，其中所述bG-CSF多肽或其变体与水溶性聚合物连接。4.按权利要求3所述的制剂，其中所述水溶性聚合物包含聚(乙二醇)部分。5.按权利要求4所述的制剂，其中所述水溶性聚合物具有约0.1 kDa至约100 kDa的分子量。6.按权利要求4所述的制剂，其中所述水溶性聚合物具有约0.1 kDa至约50 kDa的分子量。7.按权利要求4所述的制剂，其中所述水溶性聚合物具有约20kDa的分子量。8.按权利要求1所述的制剂，其中所述bG-CSF多肽或其变体为bG-CSF-T133pAF-20KPEG。9.按权利要求1所述的制剂，其中 bG-CSF多肽或其变体以约0.5至约12克/升的量存在。10.按权利要求9所述的制剂，其中bG-CSF多肽或其变体以约5克/升的量存在。11.按权利要求1所述的制剂，其中所述缓冲物质为柠檬酸盐、组氨酸、马来酸盐、琥珀酸盐、磷酸盐或其组合。12.按权利要求11所述的制剂，其中所述缓冲物质为柠檬酸盐或琥珀酸盐。13.按权利要求12所述的制剂，其中所述缓冲物质为柠檬酸盐。14.按权利要求12所述的制剂，其中所述缓冲物质为琥珀酸盐。15.按权利要求12所述的制剂，其中所述缓冲物质具有约10mM至约50 mM的摩尔浓度。16.按权利要求15所述的制剂，其中所述缓冲物质具有约30mM的摩尔浓度。17.按权利要求1所述的制剂，其中所述赋形剂为氯化钠、海藻糖、山梨醇、精氨酸或其组合。18.按权利要求17所述的制剂，其中所述赋形剂为精氨酸。19.按权利要求18所述的制剂，其中精氨酸具有约100mM至约500 mM的摩尔浓度。20.按权利要求19所述的制剂，其中精氨酸具有约200至约300mM的摩尔浓度。21.按权利要求20所述的制剂，其中精氨酸具有约250mM的摩尔浓度。22.按权利要求1所述的制剂，其中所述制剂具有约5.7至约6.6的pH。23.按权利要求22所述的制剂，其中所述制剂具有约6.0至约6.3的pH。24.按权利要求1所述的制剂，其中在压力贮存条件下在五天孵育期后所述制剂具有小于约2.1% wt/wt%的bG-CSF多肽或其变体的平均聚集体浓度。25.按权利要求1所述的制剂，其中在加速贮存条件下在一天孵育期后所述制剂具有小于约1.5% wt/wt%的bG-CSF多肽或其变体的平均聚集体浓度。26.按权利要求1所述的制剂，其任选包含一种或多种其它治疗成分。27.权利要求1所述的制剂的冻干粉或粉末。28.溶液，其通过将权利要求27所述的冻干粉或粉末溶于水制备。29.关于制备权利要求1所述的制剂的方法，其包括形成包含bG-CSF多肽或其变体、缓冲物质和赋形剂的稳定的水溶液，其中所述制剂基本上不含聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单月桂酸酯。30.疗患有由bG-CSF调节的病症的动物的方法，其包括给予所述动物治疗有效量的权利要求1所述的制剂。31.按权利要求30所述的方法，其中所述病症为感染。32.按权利要求31所述的方法，其中所述感染为乳腺炎并且其中所述动物为围产期奶牛。33.定的水性制剂，其包含bG-CSF多肽或其变体、柠檬酸盐或琥珀酸盐缓冲液、精氨酸和任选用于精氨酸的抗衡离子。34.按权利要求33所述的制剂，其中所述制剂基本上不含聚山梨醇酯表面活性剂。35.按权利要求33所述的制剂，其中所述bG-CSF多肽或其变体与连接物、聚合物或生物活性分子连接。36.按权利要求33所述的制剂，其中所述bG-CSF多肽或其变体与水溶性聚合物连接。37.按权利要求36所述的制剂，其中所述水溶性聚合物包含聚(乙二醇)部分。38.按权利要求37所述的制剂，其中所述水溶性聚合物具有约0.1 kDa至约100 kDa的分子量。39.按权利要求37所述的制剂，其中所述水溶性聚合物具有约0.1 kDa至约50 kDa的分子量。40.按权利要求37所述的制剂，其中所述水溶性聚合物具有约20kDa的分子量。41.按权利要求34所述的制剂，其中所述聚山梨醇酯表面活性剂为单月桂酸钠的聚氧乙烯衍生物。42.按权利要求34所述的制剂，其中所述聚山梨醇酯表面活性剂为聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单月桂酸酯。43.按权利要求33所述的制剂，其中所述bG-CSF多肽或其变体为bG-CSF-T133pAF-20KPEG。44.按权利要求43所述的制剂，其中bG-CSF-T133pAF-20KPEG以约0.5至约12克/升的量存在，所述柠檬酸盐缓冲液具有约30 mM的摩尔浓度，精氨酸具有约250 mM的摩尔浓度并且其中所述制剂具有约6.0的pH值。45.按权利要求43所述的制剂，其中在25°C下的28天孵育期后所述制剂具有小于约1.6% wt/wt% 的 bG-CSF-T133pAF-20K PEG 的平均聚集体浓度。46.按权利要求43所...

【专利技术属性】
技术研发人员：J达瓦尼诺，CN哈，AV克罗茨，
申请(专利权)人：伊莱利利公司，
类型：
国别省市：