本发明专利技术公开了VSTM1蛋白在制备抑制白血病细胞增殖产品中的应用。本发明专利技术提供了如下1）-5）中任一一种物质在制备抑制白血病细胞增殖产品中的应用：1）VSTM1蛋白；2）VSTM1蛋白编码基因；3）含有所述VSTM1蛋白编码基因的重组载体；4）含有所述VSTM1蛋白编码基因的表达盒；5）含有所述VSTM1蛋白编码基因的转基因细胞系；所述VSTM1蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列1。本发明专利技术的实验证明，本发明专利技术说明过表达VSTM1可以抑制白血病细胞生长，可用于白血病治疗，尤其是为耐化疗药白血病的治疗提供了新的途径。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，尤其涉及ー种VSTMl蛋白在制备抑制白血病细胞増殖产品中的应用。
技术介绍
白血病是以造血细胞分化阻滞为特征的一类恶性疾病，目前根据累及的细胞类别不同分为淋巴细胞白血病、髓系白血病、红白血病及巨核细胞白血病等。其中以急性髓系白血病(AML)因髓系细胞分化阻滞阶段不同而呈现很大的异质性。传统的对AML的FAB分型已经不足以反映AML的特征，临床应用有限。因此，目前广泛运用的WHO的分型将AML的免疫标志物表达(免疫分型)、细胞遗传学改变及分子生物学(融合基因、突变)等納入分类因素，更详细的反映了 AML的真实特征及其与预后的关系，对临床治疗的指导意义更大。 VSTMl (V-set and transmembrane domain containing I)是由北京大学人类疾病基因研究中心新发现的ー种潜在的细胞因子编码基因。人类VSTMl基因定位于染色体19ql3. 42，存在五种剪切体，其中VSTMl-vl和VSTMl_v2是两种主要形式。VSTMl-vl为I型膜蛋白，在NK、T、B、单核和粒细胞中广泛表达，在大多数肿瘤来源的细胞系中表达缺失；VSTM1-V2为经典分泌的糖蛋白，能促进外周血CD4+T细胞分泌IL-17A。Gene Atlas数据库提示VSTMl在正常骨髓CD33+髓系细胞中选择性高表达，而在其它组织、细胞中的表达丰度非常低。提示VSTMl不仅參与正常髓系细胞的发生、发展，而且可能在血液肿瘤的病理机制中发挥重要作用。
技术实现思路
本专利技术提供了如下I) -5)中任一一种物质的新用途。本专利技术提供了如下1)-5)中任--种物质的在制备抑制白血病细胞增殖和/或治疗白血病产品中的应用I),VSTMl蛋白；2) VSTMl蛋白编码基因；3)含有所述VSTMl蛋白编码基因的重组载体；4)含有所述VSTMl蛋白编码基因的表达盒；5)含有所述VSTMl蛋白编码基因的转基因细胞系；所述VSTMl蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列I。上述应用中，所述VSTMl蛋白编码基因的核苷酸序列为序列表中的序列2。上述应用中，所述含有所述VSTMl蛋白编码基因的重组载体为将所述VSTMl蛋白编码基因插入表达载体中得到的重组载体。上述含有所述VSTMl蛋白编码基因的重组载体具体为pcDB-VSTMl，为将序列2(VSTMl蛋白编码基因)插入pcDNA3.トMyc-his㈠B的Not I和Kpn I酶切位点间得到的载体。上述应用中，所述含有所述VSTMl蛋白编码基因的转基因细胞系为将所述重组载体转入目的细胞得到的转基因细胞系。上述应用中，所述白血病细胞和所述目的细胞均为慢性髓性白血病细胞或巨核细胞白血病细胞系；所述慢性髓性白血病细胞系具体为K562细胞；所述巨核细胞白血病细胞具体为MEG-Ol细胞。本专利技术的另ー个目的是提供一种制备抑制白血病细胞増殖和/或治疗白血病产品。本专利技术提供的产品，为上述的应用中的所述I) -5)中任--种物质。上述产品中，所述白血病细胞为慢性髓性白血病细胞或巨核细胞白血病细胞系；所述慢性髓性白血病细胞系具体为K562细胞；所述巨核细胞白血病细胞具体为MEG-Ol细胞。本专利技术的实验证明，本专利技术发现VSTMl蛋白可以抑制白血病细胞的生长，将VSTMl蛋白编码基因转染白血病细胞K562细胞或MEG-Ol细胞，得到的转基因细胞的生长均慢于不转染该蛋白的编码基因。说明过表达VSTMl可以抑制白血病细胞生长，可用于白血病治疗，尤其是耐化疗药白血病的治疗提供了新的途径。 附图说明图I为转染细胞VSTMl蛋白表达水平检测图2为转染VSTMl的K562及MEG-01细胞生长受抑具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到，部分具体如下列出I、小牛血清、RPMI1640 :购自GIBCO公司。2、人慢性髓性白血病细胞系K562和巨核细胞白血病细胞系MEG-01 (K562细胞购自中国科学院细胞库，产品目录号为TCHul91 ； MEG-OI细胞购自中国科学院细胞库，产品目录号为TCHul97)。5、6孔、24孔及96孔培养板购自Corning公司。7、突光素标记的单克隆抗体OHlb-PE :购自美国Becton Dickinson公司。8、多克隆抗体VSTM1-FITC :将抗原多肽免疫免，收集兔血清，纯化并且荧光标记得到多克隆抗体VSTM1-FITC，抗原多肽为VSTMl，其氨基酸序列为序列表中的序列I。下述实施例中所用主要仪器设备I、超净工作台北京半导体设备厂。2、CO2培养箱美国NAPCO牌。3、低温高速离心机GS_15R型,美国Beckman公司。4、流式细胞仪FACSort 型，美国 Becton Dickinson 公司。5、倒置光学显微镜日本Olympus公司。6、低速离心机BFX5_320型(白洋离心机厂)。下述实施例中的流式细胞检测运用带不同荧光素的抗白细胞表面抗原的抗体标记骨髓细胞，具体步骤如下(I)骨髄细胞计数取IOul样本，加适量冰醋酸裂解红细胞并稀释血细胞，显微镜下计数；(2)按照抗体说明书加适量抗体至200 ill血样，室温(25 °C)避光孵育15min ；(3)加红细胞裂解液(NH4CL1. 8675g, TrisO. 65g 蒸馏水 250ml)，室温裂解 8min ；(4)离心 1200rpmX IOmin,弃上清液；(5)加磷酸缓冲液(phosphate buffer saline, PBS)(购自上海耕欣生物科技有限公司。)洗两遍； (6)离心1200rpmX10min，弃上清液，加200 上流式细胞仪检测。(7)数据分析下述实施例运用FCS Express V3软件分析流式细胞术检测数据。统计分析在SPSS软件17. 0中进行。经不同浓度ATRA诱导分化后不同时间点的NB4细胞VSTMl表达水平与⑶Ilb表达水平的相关性采用Pearson相关系数分析。P值小于0. 05定义为有统计学差异。下述实施例中的VSTMl蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列I。VSTMl蛋白编码基因的核昔酸序列为序列表中的序列2 实施例I、转染VSTMl的白血病细胞生长受抑VSTMl是胞浆尾端含有ITIM基序的抑制性受体，北京大学人类疾病基因基因研究中心的实验结果表明VSTMl-vl胞内段的ITM基序在磷酸化后同样可以与SHP-I相互作用，提示VSTMl-vl可能通过SHP-I传递抑制信号。而SHP-I作为ー种基本的负调控因子，通过酪氨酸激酶(PTKs)和酪氨酸磷酸酶(PTPs)两种酶调节蛋白水平酪氨酸残基磷酸化，使酪氨酸磷酸化水平通过PTKs和PTPs分别催化酪氨酸残基磷酸化和脱磷酸化而保持动态平衡。一旦这ー平衡被破坏打破，可促进细胞内与酪氨酸磷酸化相关的蛋白聚集，即可导致不正常的细胞増殖和分化。细胞内蛋白质磷酸化水平的提高是细胞癌变的重要表现之一，可能是细胞増殖分化机制的关键。因此SHP-I信号转导不仅參与调节免疫细胞的活化，而且与细胞的増殖、分化甚至肿瘤的发生也密切相关。实验表明，SHP-I可调节不同分化阶段的造本文档来自技高网...
【技术保护点】
如下1）？5）中任一一种物质在制备抑制白血病细胞增殖和/或治疗白血病产品中的应用：1）、VSTM1蛋白；2）VSTM1蛋白编码基因；3）含有所述VSTM1蛋白编码基因的重组载体；4）含有所述VSTM1蛋白编码基因的表达盒；5）含有所述VSTM1蛋白编码基因的转基因细胞系；所述VSTM1蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列1。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：阮国瑞，韩文玲，马大龙，黄晓军，谢敏，冷馨，李婷，
申请(专利权)人：北京大学人民医院，
类型：发明
国别省市：
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