伤口修复剂组合物的制备工艺、管子及装置制造方法及图纸

本发明专利技术涉及组织再生领域。特别是涉及凝血酶、血小板浓缩液和伤口修复剂单独或合并细胞抽提物、细胞组合物的新工艺、管子和装置及其使用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及组织再生领域。特别是涉及凝血酶、血小板浓缩液和伤口修复剂制剂、组合物的新工艺、管子和装置及其使用。
技术介绍
在各种文献中已经广泛论述过伤口愈合过程中生物自体材料的重要性。最重要的是，研究发现在血凝块形成过程中直接牵涉到两种生物自体材料，其提供一道止血屏障，确保止血效果及封闭伤口:(1)纤维蛋白，其通过血浆纤维蛋白原在凝血酶作用下分离成两部分而产生，以及(2)活化血小板膜。通常伤口愈合过程先后表现为凝血阶段、发炎过程和再生过程。凝血阶段(血液凝结或血凝块的形成)是一个非常复杂的过程，在这一过程中，受损的血管壁被纤维蛋白凝块覆盖，以阻止出血，并且由血小板α颗粒大量释放细胞活素和生长因子而发起受损血管的修复。血凝块的形成(在生理条件下由纤维蛋白、血小板和红细胞以及其他血成分而形成)是组织创伤及其在伤口愈合过程中以及骨折愈合中的作用所导致的一种自然现象，这已经众所周知。血液凝固是许多蛋白凝血因子一连串复杂相互作用的结果。一般而言，血管内皮损伤会导致内皮下结构裸露，由此吸引血小板，诱导血小板可逆聚集。在凝血通路活化过程中形成的蛋白凝血酶产生不可 溶的交叉连接的纤维蛋白原纤维，并引起血小板不可逆聚集。由此产生的血小板纤维蛋白凝块是防止血管系统失血的有效屏障，同时也是后续血管内壁修复的支架。紧随血凝块形成过程的发炎过程是由白细胞和血小板释放的大量血管活性介质和趋化因子(以蛋白质形式出现的特殊信号)刺激而产生的一个过程。这些信号吸引巨噬细胞，这些巨噬细胞在新细胞迁移之前，“清除”伤口的细菌、外来粒子以及红细胞。组织再生阶段涉及由血凝块形成的支架(或生长基质)中未分化细胞的趋化和有丝分裂。在血小板生长因子刺激下繁殖的新细胞将取代被巨噬细胞损伤或摧毁的细胞。生长因子和大量的血浆蛋白质，也称为信号分子，能促进血凝块中的细胞迁移和分裂，在伤口愈合过程中发挥着关键作用。生物粘合剂和纤维蛋白胶代表较新的技术进步，其作用是复制最后凝血阶段的生物过程。一些临床试验报告记录了纤维蛋白胶在各种外科领域的效用，如心血管、胸、移植、头颈部、口腔、胃肠、矫正外科、神经外科及整形手术。在外科手术时，含有纤维蛋白胶的两种主要成分纤维蛋白原和凝血酶混合在一起形成血液凝块。血液凝块可在数秒钟内粘附在必要的组织、骨头、或神经上，但是在之后大约十天左右通过纤维蛋白溶解作用被身体重新缓慢吸收。纤维蛋白胶的重要特征在于它能够:(I)在血管吻合处，特别是在很难进行伤口缝合的部位或者缝合固定意味着额外风险的部位，实现止血；(2)控制仅通过缝合无法控制的针眼或动脉裂缝流血；(3)实现肝素化患者或凝血病患者的止血。参阅Borst, H.G.等人在《胸心血管外科杂志》上发表的论文，84:548-553 (1982) ；ffalterbusch, G.J等人在《胸心血管外科杂志》上发表的论文，30:234-235 (1982)；以及Wolner，F.J等人在《胸心血管外科杂志》上发表的论文，30:236-237 (1982)。理论上可以通过丢弃红细胞和提高生长因子的浓度来增强这些早期阶段在伤口愈合过程中的效果。血凝放大作用可以定义为“富化血凝块”(EC)的形成。富化血凝块通过使用血小板浓缩液获得，在《血小板和巨核细胞》2004年第1、2卷中被描述为“结构与信号”，新泽西州胡马纳出版社Ed.Gibbins和Mahaut-Smith。富血小板血浆(PRP)可定义为少量血浆中的自体血小板浓缩液；它已经被开发成一种自体生物材料，而且已经被证明在组织愈合和再生方面非常有用(Marx等人，2004年，《国际口腔颌面外科杂志》，62，489-496)。PRP不仅含有血小板浓缩液，同时还含有生长因子(如由血小板衍生的生长因子TOGF、血管内皮生长因子VEGF、转化生长因子TGF和表皮生长因子EGF等)，这些生长因子由血小板积极分泌，并且已知在伤口愈合初始阶段发挥着极其重要的作用。例如，我们知道TOGF会发起结缔组织愈合，包括骨头再生和修复。I3DGF还能够促进有丝分裂(愈合细胞)、血管生成(内皮有丝分裂成机能毛细血管)以及巨噬细胞活化。同样已知的是粒细胞释放的VEGF对内皮细胞具有有效的血管生成、促有丝分裂和血管通透性增强作用。TGF-β促进结缔组织和骨头的细胞有丝分裂和分化，作用于间质干细胞、前成骨细胞和成纤维细胞，并且抑制破骨细胞的形成。已知EGF能够诱导上皮发育并促进血管生成。血小板浓缩液通常用于牙种植和骨外科，特别是在美国。人们已经开发出各种通过离心法制备PRP的技术。然而，由于血小板细胞的敏感性和从红细胞中分离血小板的方法之效率的变化性，在各种血小板浓缩液制备方法之间存在巨大的差别。Biomet PCCS&GPS(上述Marx等人于2004年发表)的自动化设置在大血样流程中面临流程复杂、成本高昂这一缺点。在那些系统中，还出现了患者宝贵的生物组织的重大损失。因此，亟需开发一种可靠、高产量、易于使用并且经济合算的浆细胞采集流程。另外，获得血小板浓缩液还需要使用相对复杂的成套工具和成本高昂的专用机械设备以及需要成本同样高昂的专业技术人员的参与。这一缺点使现有的PRP制备方法无法适应就地医疗使用的需要。再者，鉴于移植、术后再生或出于美容目的之细胞或组织再生，细胞的制备面临细胞与组织长期保存这一难题。虽然通常采用组织或细胞冷冻保存方法来长期养护组织或细胞，特别是血小板，但是这项技术具有严重的缺点和问题，如结晶、渗透问题、聚集、蛋白合成能力受抑制以及因热应激反应而出现的应激蛋白表达。因此，已知组织或细胞低温保存会改变细胞活力和稳定性(Agence lrnn^nlsc de securitesanitaire, 2003 ；Arnaud 等人，1999年，《低温生物学》，38，192-199，Tablin等人，2001年，《低温生物学》，43 (2)，114-23)。低温保存的某些副作用可能可以通过采用防冻剂进行限制，例如，二甲基亚砜(DMSO)、甘油或其他冷冻保护剂(US 5,5891,617, Oh等人，Cornea，26，840-846)，但是这些化学剂的浓度必须进行改良以限制其毒性和副作用。因此，需要一种全新的或备选的细胞和组织制备方法，使细胞和组织可以就地使用，同时保存其完整性，特别是生长因子分泌能力和活力。专利技术概沭 本专利技术涉及组织再生领域。特别是涉及凝血酶、血小板浓缩液和伤口修复剂制剂、组合物的新工艺、管子和装置及其使用。本专利技术还涉及新型细胞制剂、新型富血小板(PRP)制剂、新型细胞制剂或PRP制剂的制备方法、此类细胞或PRP制剂的使用、以及可选地混入细胞抽提物，如角质形成细胞、骨髓细胞、成纤维细胞、骨外膜或角膜细胞、黑素细胞、朗汉斯巨细胞、脂肪细胞、脂肪组织、肌肉细胞如成肌细胞和卫星细胞、成骨细胞、软骨细胞、脐带细胞、间叶干细胞(MSC)、前成脂肪细胞、前内皮细胞、雪旺氏细胞或跟腱细胞的抽提物。一方面，本专利技术提供一种完全自体的就地伤口修复剂或组织修复剂组合物的制备方法。该自体伤口修复剂或组织修复剂组合物的所有血成分均来自于即将应用该自体伤口修复剂或组织修复剂的单个患者(同一个患者)。一方面，本专利技术提供一种凝血酶血清的制备工艺或方法，包括本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.03.11 GB 1004072.31.一种凝血酶血清制备工艺，包括下列步骤: a)采集全血到一支管子中，管子包含细胞选择胶体，优选为触变胶体； b)离心处理所述管子直到凝血酶血清释放；以及 c)采集所述凝血酶血清。2.根据前述权利要求的凝血酶血清制备工艺，其中所述管子的离心处理优选采用大约1000克至大约2000克之间的一个力处理大约20至40分钟之间一个的时间，较优选采用大约1500克的力处理大约25至35分钟，优选采用1500克的力处理大约30分钟。3.根据前述任一项权利要求的凝血酶血清制备工艺，其中用于制备凝血酶血清的所述管子选自: i)空玻璃分离管；或 )优选地，含有基于聚合物的触变胶体的玻璃分离管。4.一种伤口修复剂组合物或组织修复剂组合物制备工艺，包括下列步骤: i)采集全血； )离心处理所述全血，直到形成一个凝块； iii)采集所述凝块。5.根据前述权利要求的工艺获得的伤口修复剂组合物或组织修复剂组合物。6.一种伤口修复剂组合物或组织修复剂组合物制备方法，包括下列步骤: a)用含有触变胶体、细胞选择胶体和抗凝血酶的管子采集全血； b)离心处理所述管子； c)可选地，将所述透明质酸和富血小板血浆混合，优选采用倒置所述管子的方法进行混合； d)采集含有所述透明质酸和所述富化血浆的上清液； e)可选地，将所述透明质酸与所述富化血浆进一步混合。7.根据前述权利要求的伤口修复剂组合物或组织修复剂组合物的制备方法，其中所述离心处理步骤采用大约1000克至大约2000克之间的一个力处理大约3分钟至大约7分钟之间的一个时间；优选地，采用1500克的力处理大约3分钟至大约7分钟之间的一个时间；较优选地，采用大约1500克的力处理大约5分钟。8.伤口修复剂组合物或组织修复剂组合物，含有透明质酸和根据前述任一项权利要求的方法获得的富化血浆。9.管子含有透明质酸、抗凝血剂和细胞选择胶体，可选地进一步含有全血。10.管子含有透明质酸和富化血浆，可选地，可进一步含有细胞选择胶体和/或柠檬酸钠。11.根据前述任一项权利要求的方法、组合物或管子，其中所述细胞选择胶体是触变胶体和/或其中所述抗凝血剂为柠檬酸钠。12.—种富血小板血浆组合物的制备方法，包括下列步骤: a)离心处理一支管子中的全血，管子优选为本发明的管子，优选含有抗凝血剂，优选为柠檬酸钠缓冲液(0.10M)或无水柠檬酸钠(3.5mg/mL)。b)可选地，将富化富血小板血浆从全血浆中分离出来；以及 c)可选地，将所述富化血浆与葡萄糖酸钙混合，或者可选地，将所述富化血浆与根据前述任一项权利要求的凝血酶血清混合，并且可选地进一步与葡萄糖酸钙混合。13.根据前述任一项权利要求制备的富血小板血浆组合物，含有: a)血浆； b)浓度至少为300X109个细胞/升的血小板； c)浓度至少为7X109个细胞/升的白细胞； d)浓度至少为3mg/L的纤维蛋白原； 以及其中红细胞浓度低于0.6X1012个细胞/升。14.根据前述任一项权利要求制备的伤口修复剂组合物或组织修复剂组合物含有: a)血浆； b)浓度至少为300X109个细胞/升的血小板； c)浓度至少为7X109个细胞/升的白细胞； d)浓度至少为3mg/L的纤维蛋白原； e)透明质酸； 以及其中，红细胞的浓度低于0.6X1012个细胞/升。15.止血剂、伤口修复剂组合物或组织修复剂组合物的制备工艺，包括: -将根据前述任一项权利要求的凝血酶血清与富血小板血浆组合物混合的步骤；或 -将凝血酶血清与根据前述任一项权利要求的富血小板血浆组合物混合的步骤；或 -将根据前述任一项权利要求的凝血酶血清与根据前述任一项权利要求的富血小板血浆组合物混合的步骤。16.—种伤口修复剂组合物或组织修复剂组合物或止血剂制备工艺,包括: a)提供一种根据前述任一项权利要求的富血小板血浆组合物、伤口修复剂组合物或组织修复剂组合物，优选为自体组合物； b)可选地，将所述组合物与凝血活化剂、凝血酶血清或根据前述任一项权利要求的凝血酶血清混合，优选为根据前述任一项权利要求的自体凝血酶血清；以及 c)可选地，混入至少一种细胞抽提物；优选地，混入一种自体细胞抽提物，其选自角质形成细胞、骨髓细胞、成纤维细胞、骨外膜或角膜细胞、黑素细胞、朗汉斯巨细胞、脂肪细胞、脂肪组织、肌肉细胞如成肌细胞和卫星细胞、成骨细胞、软骨细胞、脐带细胞、间叶干细胞(MSC)、前成脂肪细胞、内皮前体细胞、雪旺氏细胞或跟腱细胞的抽提物。17.一种自体伤口修复剂组合物或自体组织修复剂组合物或自体止血剂制备工艺，包括: a)将自体富血小板血衆组合物、自体伤口修复剂组合物或组织修复剂组合物，优选为根据前述任一项权利要求的自体组合物，与自体凝血酶血清，优选为根据前述任一项权利要求的自体凝血酶血清，进行混合；以及 b)可选地，混入至少一种自体细胞抽提物，选自角质形成细胞、骨髓细胞、成纤维细胞、骨外膜或角膜细胞、黑素细胞、朗汉斯巨细胞、脂肪细胞、脂肪组织、肌肉细胞如成肌细胞和卫星细胞、成骨细胞、软骨细胞、脐带细胞、间叶干细胞(MSC)、前成脂肪细胞、内皮前体细胞、雪旺氏细胞或跟腱细胞的抽提物。其中所述自体血小板浓缩液、所述自体伤口修复剂组合物或组织修复剂组合物、所述自体凝血酶血清和所述自体细胞抽提物均源自同一名患者或同一个动物。18.根据前述任一项权利要求的自体伤口修复剂组合物或自体组织修复剂组合物或自体止血剂制备工艺或方法，其中所述富血小板与所述凝血酶血清以大约1: 1、3:1或10:1的比率混合。19.根据前述任一项权利要求制备的伤口修复剂组合物、组织修复剂组合物或止血剂，含有: a)血浆； b)浓度至少为300X109个细胞/生的血小板； c)浓度至少为7X109个细胞/升的白细胞； d)浓度至少为3mg/L的纤维蛋白原； e)凝血活化剂、自体凝血酶血清或根据前述任一项权利要求的自体凝血酶血清； f)可选地，透明质酸； g)可选地，自体细胞抽提物，其选自角质形成细胞、骨髓细胞、成骨细胞、软骨细胞、成纤维细胞、骨外膜或角膜细胞、黑素细胞、朗汉斯巨细胞、脂肪细胞、脂肪组织、肌肉细胞如成肌细胞和卫星细胞、脐带细胞、间叶干细胞(MSC)、前成脂肪细胞、内皮前体细胞、雪旺氏细胞、跟腱细胞或胰岛细胞的抽提物。其中，红细胞浓度低于0.6X1012个细胞/升。20.根据前述任一项权利要求制备的伤口修复剂组合物、组织修复剂组合物或止血剂含有: a)血浆； b)浓度至少为300X109 个细胞/升的血小板； c)浓度至少为7X109个细胞/升的白细胞； d)浓度至少为3mg/L的纤维蛋白原； e)根据前述任一项权利要求的自体凝血酶血清； f)可选地，透明质酸； g)可选地，自体细胞抽提物，其选自角质形成细胞、骨髓细胞、成骨细胞、软骨细胞、成纤维细胞、骨外膜或角膜细胞、黑素细胞、朗汉斯巨细胞、脂肪细胞、脂肪组织、肌肉细胞如成肌细胞和卫星细胞、脐带细胞、间叶干细胞(MSC)、前成脂肪细胞、内皮前体细胞、雪旺氏细胞、跟腱细胞或胰岛细胞的抽提物。其中，红细胞浓度低于0.6X1012个细胞/L。21.一种伤口或组织修复剂组合物制备工艺，包括下列步骤: a)离心处理一支管子中的全血，管子可选地含有透明质酸； b)可选地，将可选地含有透明质酸的富化富血小板血浆从全血浆中分离出来； c)再悬浮可选地含有透明质酸的富化血浆； d)可选地，将步骤c)获得的、可选地含有透明质酸的血小板浓缩液与凝血活化剂、凝血酶血清、自体凝血酶血清或根据前述任一项权利要求的自体凝血酶血清混合； e)提供一种细胞抽提物，其选自角质形成细胞、成纤维细胞、黑素细胞、朗汉斯巨细胞、脂肪细胞、骨髓细胞、肌肉细胞如成肌细胞和卫星细胞、成骨细胞、软骨细胞、骨膜细胞、角膜细胞、脐带细胞、间叶干细胞(MSC)、前成脂肪细胞、内皮前体细胞、雪旺氏细胞、跟腱细胞或胰岛细胞的抽提物； f)将步骤d)中获得的、可选地含有透明质酸的血小板浓缩液混合物与步骤e)中获得的细胞抽提物混合。22.根据前述任一项权利要求制备的分离细胞组合物含有: a)血浆； b)浓度至少为300X109个细胞/升的血小板； c)浓度至少为7X109个细胞/升的白细胞； d)浓度至少为3mg/L的纤维蛋白原； e)可选地，凝血活化剂、凝血酶血清、自体凝血酶血清或根据前述任一项权利要求的自体凝血酶血清； f)可选地，透明质酸； g)细胞抽提物，选自角质形成细胞、成纤维细胞、黑素细胞、朗汉斯巨细胞、脂肪细胞、骨髓细胞、肌肉细胞如成肌细胞和卫星细胞、成骨细胞、软骨细胞、骨膜细胞、角膜细胞、脐带细胞、间叶干细胞(MSC)、前成脂肪细胞、内皮前体细胞、雪旺氏细胞、跟腱细胞或胰岛细胞的抽提物；23.伤口或组织修复剂组合物或止血剂或可缝合膜或生物胶,含有根据前述任一项权利要求的分离细胞组合物。24.根据前述任一项权利要求的伤口修复剂组合物、组织修复剂组合物、细胞组合物、富血小板血浆组合物或止血剂，其中所述伤口修复剂组合物、组织修复剂组合物、富血小板血浆组合物或止血剂与磷酸三钙(TC...

【专利技术属性】
技术研发人员：安托万·图瑞兹，
申请(专利权)人：安托万·图瑞兹，
类型：
国别省市：