【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种中药检测方法，具体涉及一种。
技术介绍
麝香具有一定的抗炎镇痛药理活性，现有研究显示麝香的抗炎活性与麝香中特有的糖肽有关，不同文献报道其抗炎糖肽分子量各不相同，不同来源的麝香其多肽成分有显著性差异。常规的电泳分析体系Tris-甘氨酸-SDS-PAGE电泳分析分辨大分子物质的相对分子质量范围在10 200 kDa,对于相对分子质量小于10 kDa的多肽分辨率低。利用含有SDS的凝胶中加入高浓度脲时可利用SDS-PAGE对小分子多肽进行分析的分离效果不甚理想，且重现性较差，且小分子多肽在固定染色的过程中容易丢失。故采用Tricine-SDS-PAGE电泳，建立麝香多肽电泳方法。
技术实现思路
本专利技术提供了一种。本专利技术目的是通过如下技术方案实现的:1、养殖麝香凝胶电泳分析样品的制备`称取养殖麝香样品0.003、.008重量份，加入I体积份乙醚，超声提取I 5 25min，离心去上清，挥干乙醚，不溶物加0.05体积份电泳上样缓冲液(IX)，超声提取15 25min，在4500rpm, 10°C条件下离心15 25min,取上清,加0.02%溴酹蓝,...
【技术保护点】
一种养殖麝香的多肽电泳图谱检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：A、养殖麝香凝胶电泳分析样品的制备称取养殖麝香样品0.003~0.008重量份，加入1体积份乙醚，超声提取15~25min，离心去上清，挥干乙醚，不溶物加0.05体积份电泳上样缓冲液（1X），超声提取15~25min，在4500rpm，10℃条件下离心15~25min，取上清，加0.02%溴酚蓝，沸水浴3~8min，即得电泳样品；B、Tricine?SDS?PAGE凝胶电泳分析方法（1）电泳溶液准备：(a)去离子水溶解100~150重量份Tris，用HCl调PH值至7~9，定容至500体积份，制得正极缓冲液（...
【技术特征摘要】
1.一种养殖麝香的多肽电泳图谱检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤: A、养殖麝香凝胶电泳分析样品的制备 称取养殖麝香样品0.003、.008重量份，加入I体积份乙醚，超声提取15 25min，离心去上清，挥干乙醚，不溶物加0.05体积份电泳上样缓冲液(IX)，超声提取15 25min，在4500rpm, 10°C条件下离心15 25min,取上清,加0.02%溴酹蓝,沸水浴3 8min,即得电泳样品; B、Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳分析方法 (O电泳溶液准备: (a)去离子水溶解100 150重量份Tris，用HCl调PH值至7 9，定容至500体积份，制得正极缓冲液(IOX); (b)去离子水溶解5(Γ70重量份Tris，8(Tl00重量份Tricine，3 8重量份SDS，定容至500体积份，制得负极缓冲液(10 X ); (c)去离子水溶解15(Γ200重量份Tris，Γ2重量份SDS，用HCl调PH值至7 9，定容至500体积份，制得凝胶缓冲液(3 X ); (d)40^60%丙烯酰胺，Γ2%甲叉丙烯酰胺，加入去离子水溶解，制得3C丙烯酰胺储液； (e)40^60%丙烯酰胺，Γ5%甲叉丙烯酰胺，加入去离子水溶解，制得6C丙烯酰胺储液； (f)0.2 I体积份lmol/L, PH为6.8的Tris-HCl，2 4体积份甘油，I 3体积份10% SDS,,0.6^1体积份β巯基乙醇，0.5^1.5体积份1%溴酚蓝，加蒸馏水补足10体积份，制得上样缓冲液(6Χ)； (g)0.2 I体积份lmol/L, PH为6.8的Tris-HCl，2 4体积份甘油，I 3体积份10% SDS,,0.6 1体积份β巯基乙醇，加蒸馏水补足60体积份，制得上样缓冲液(IX); (2)凝胶制备: 分离胶3体积份:取上述制得的凝胶缓冲液(3Χ) I体积份，0.2、.6重量份甘油，,0.5^1.5体积份6C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至2 4体积份，临用时加入0.005、.02体积份的10%过硫酸铵溶液和0.0005、.002体积份TEMED ； 夹层胶3体积份:取上述制得的凝胶缓冲液(3Χ)0.5^1.5体积份，0.5^0.8体积份3C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至2 4体积份，临用时加入0.005、.02体积份的10%过硫酸铵溶液和0.0005、.002体积份TEMED ； 浓缩胶2体积份:0.4^0.6体积份凝胶缓冲液(3X)，0.Γ0.2体积份3C储液，去离子水稀释至广3体积份，临用时加入0.005、.02体积份的10%过硫酸铵溶液和0.0005、.002体积份TCMED ； (3)电泳条件:120V恒压电泳至溴酚蓝距凝胶底部Icm处 (4)染色方法 采用灵敏度高的银染，以下溶液临用前配制: 固定液:量取甲醇30-60体积份，冰醋酸5-20ml，加双蒸水稀释至100ml)； 染色液:称取0.5^1.0重量份AgNO3溶于3飞体积份双蒸水中；取洁净烧杯，加入0.36%NaOH 15 30体积份，再加入氨水f 2体积份混匀，将制备好的AgNO3溶液逐滴加入，边加边搅拌，全部加入后，加双蒸水至100体积份；显色液:0.3^0.8体积份I %柠檬酸，0.03、.08体积份甲醛，加双蒸水至100体积份；终止液:量取冰醋酸I体积份，加双蒸水稀释至100体积份； C、具体染色步骤: (a)电泳结束后，将凝胶转移至固定液中固定0.5^1.5h，每l(T30min换一次液； (b)弃去固定液，凝胶以双蒸水中漂洗3次，每次5 15min； (c)将胶移入一个干净的容器内，染色液中轻摇染色IOlOmin； (d)弃去染色液，加双蒸水震荡漂洗2 4min； (e)将胶移至显色液中轻摇显色，至色带清晰，弃去显色液； (f)将胶转移至终止液终止染色； (g)在蒸馏水中漂洗凝胶0.5^1.5h ； (h)进行凝胶扫描或将凝胶进行干胶保存； 各批次养殖麝香中，出现分子量约为67kDa、7kDa的蛋白条带；养殖麝香样品中均出现分子量约为19KDa的弱染色条带。2.如权利要求1所述的一种养殖麝香的多肽电泳图谱检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤: A、养殖麝香凝胶电泳分析样品的制备 称取养殖麝香样品 0.003重量份，加入I体积份乙醚，超声提取20min，离心去上清，挥干乙醚，不溶物加0.05体积份电泳上样缓冲液(IX)，超声提取20min，在4500rpm，10°C条件下离心20min,取上清,加0.02%溴酹蓝,沸水浴5min,即得电泳样品； B、Tricine-SDS-PA重量份E凝胶电泳分析方法 (O电泳溶液准备: (a)去离子水溶解100重量份Tris，用HCl调PH值至7.5，定容至500体积份，制得正极缓冲液(IOX); (b)去离子水溶解55重量份Tris，90重量份Tricine，8重量份SDS，定容至500体积份，制得负极缓冲液(IOX); (c)去离子水溶解160重量份Tris，1.5重量份SDS，用HCl调PH值至7.8，定容至500体积份，制得凝胶缓冲液(3 X ); (d)56%丙烯酰胺，1.2%甲叉丙烯酰胺，加入去离子水溶解，制得3C丙烯酰胺储液； (e)52%丙烯酰胺，2.0%甲叉丙烯酰胺，加入去离子水溶解，制得6C丙烯酰胺储液； (f)0.8体积份lmol/L, PH为6.8的Tris-HCl，2体积份甘油，3体积份10%SDS, 0.7体积份β -巯基乙醇，1.5体积份1%溴酚蓝，加蒸馏水补足10体积份，制得上样缓冲液^X); (g)0.4体积份lmol/L, PH为6.8的Tris-HCl，2体积份甘油，2.5体积份10%SDS, I体积份巯基乙醇，加蒸馏水补足60体积份，制得上样缓冲液(IX); (2)凝胶制备: 分离胶3体积份:取上述...
【专利技术属性】
技术研发人员：潘杰，黄进明，于娟，洪绯，袁慧君，
申请(专利权)人：漳州片仔癀药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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