本发明专利技术公开了一种正品半夏的检测方法，包括如下步骤：（1）取待检样品，加1~3倍重量的水，水温0℃~5℃，匀浆，离心，得上清液；（2）用SDS-PAGE电泳方法检测步骤（1）的上清液，在Rm值0.208、0.232、0.312、0.335、0.383、0.405、0.429、0.491、0.615、0.85和/或0.897有谱带，所述电泳的浓缩胶浓度为5%，分离胶为浓度12%。本发明专利技术正品半夏的检测方法准确度高，操作方便，成本低廉，市场应用前景良好。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及正品半夏的检测方法，属于中药领域。
技术介绍
半夏来源于天南星科植物半夏Pinellia ternata (Thunb. ) breit.的干燥块莖， 呈类球形，有的稍偏斜少数为长远球形，直径f1. 5cm;表面白色或浅黄色，顶端有凹陷的茎痕，周围密布麻点状根痕；下面钝圆，较光滑；质坚实，断面洁白，富粉性，粉末嗅之呛鼻； 气微，味辛辣、麻舌而刺喉。近几年半夏的市场需求量持续增加，野生资源逐年减少，人工栽培发展缓慢，使得半夏资源蕴藏量和产量都在大幅下降。导致市场上出现了很多伪品，给半夏药材的质量、用药的安全性及有效性带来了很大的冲击。通过对中药材市场的调研发现，半夏的伪品主要为水半夏、虎掌南星和禹白附。水半夏，为天南星科植物鞭檐的干燥块茎。呈近圆形、椭圆形、圆锥形或倒卵形，直径O. 5^1. 5cm，高O. 8 3cm。表面类白色或淡黄色，不平滑，遍体隐约可见状根痕；上端类圆形，常用有偏斜而凸起的叶痕或芽痕，黄棕色，下端有点儿略尖。质坚实，断面白色，粉性。气微，味辛辣，麻舌而刺喉。虎掌南星，为天南星科植物掌叶半夏的干燥块茎。呈近球形，直径3 4cm，外皮粗糙，褐色，剥去外皮为类白色或淡棕黄色，顶端有深陷的茎痕，有的周边生有数个扁球状块茎，形如虎掌，气微，味辛辣。禹白附，为天南星科植物独角莲的干燥块茎。呈椭圆形或卵圆形，直径f2cm，高 2 5cm。表面白色或黄白色，略粗糙，有环纹及根痕，顶端具凹陷茎痕，下端钝圆。质坚硬，难折断，断面类白色，粉性。气微，味淡，嚼之麻辣刺舌。目前，正品半夏的有效检测方法是传统形态特征和理化特性的鉴别方法，其非常复杂并具有一定的局限性。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了。本专利技术正品半夏的检测方法，包括如下步骤(I)取待检样品，加f 3倍重量的水，水温为0°C飞。C，匀浆，离心，得上清液；(2)用SDS-PAGE电泳方法检测步骤(I)的上清液，其在Rm值O. 208、0.232、 O. 312,0. 335,0. 383,0. 405,0. 429,0. 491,0. 615,0. 85 和 / 或 O. 897 有谱带，所述电泳浓缩胶浓度为5%，分离胶浓度12%。其中，步骤(I)中，所述冰水重量为待检样品重量的2倍，所述离心为2000r/min离心 2min。其中，步骤(2)中，所述上清液在Rm 值 O. 208,0. 232,0. 312,0. 335,0. 383,0. 405、 O. 429,0. 491,0. 615,0. 85 和 O. 897 有谱带。SDS-PAGE电泳十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳。Rm值相对迁移率或者相对泳动率=蛋白绝对迁移距离/溴酚蓝迁移距离。其中，所述步骤(2)包括如下步骤I)取上清液，加入O. Γ1倍体积样品缓冲液，混匀，离心，得上样液，所述样品缓冲液是lmol/1 Tris-盐酸缓冲液，并添加有O. 15mol/l SDS和O. 03mol/l溴酚蓝；2)取步骤I)的上样液上样，电泳，固定，染色，洗脱即可，所述电泳缓冲液为 Tris-甘氨酸缓冲液。其中，步骤I)中，所述样品缓冲液为上清液的O.1倍；混匀后在沸水中加热3min ； 所述离心的条件是4000r/min离心离心30s。其中，步骤I)中，所述样品缓冲液还添加有20% (v/v)甘油和10% (ν/ν) β -巯基乙醇。其中，步骤2)中，所述固定采用的固定液为10%的三氯醋酸溶液；所述染色采用的染色液为考马氏亮蓝染色液；所述洗脱采用的洗脱液为考马氏亮蓝洗脱液。优选地，所述染色是用考马氏亮蓝染色液浸泡凝胶，50°C 60°C水浴加热15min， 并不断振荡，放冷后倾去染色液。本专利技术方法可以准确检测正品半夏，准确度高，检测方法简单、快速，可以替代传统检测方法，具有良好的应用前景。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形 式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1样品处理方法检测结果，其中，泳道I 9 :方法I 9，M :标准蛋白；图2染色方法检测结果；图3待见样品检测结果；图4待见样品检测结果；图5待见样品检测结果。具体实施方式试剂A液1. 5MTris-HCL溶液(分离胶储存液)精密称取Tris碱(分析纯)18. 15g，加适量的超纯水溶解，用浓盐酸(分析纯)调 PH值至8.8，加超纯水定容至10011^。贴上标贴，4°C保存。此溶液有效使用期限为三个月。B液IMTris-HCL溶液(浓缩胶储存液)精密称取Tris碱(分析纯)12.1g,加适量的超纯水溶解，用浓盐酸(分析纯)调 pH值至6. 8，加超纯水定容至100mL。贴上标贴，4°C保存。此溶液有效使用期限为三个月。C液30%丙烯酰胺储存液精密称取丙烯酰胺(Acr，分析纯)29. 2g、N，N’ -甲叉双丙烯酰胺(分析纯)O. Sg, 加适量的超纯水溶解，再定容至IOOmL,用滤纸过滤，贴上标贴，避光4°C保存。此溶液有效使用期限为三个月。D 液10%SDS 溶液精密称取SDS (分析纯)10g，用超纯水溶解至IOOmL,贴上标贴，室温储存。此溶液有效使用期限为三个月。 E液10%过硫酸胺(AP)溶液精密称取过硫酸胺(分析纯)10g，用超纯水溶解至IOOmL,贴上标贴，_20°C保存。 此溶液最好于临用前配置。F 液1%TEMED 溶液精密吸取T液lmL，加超纯水定容至IOOmL,置于棕色瓶中于4°C保存。取上述原料，配制浓度为5%浓缩胶和浓度为12%的分离胶。电泳缓冲液精密称取称取Tris碱(分析纯)6g、甘氨酸(分析纯)28. 8g、SDS (分析纯)10g，加超纯水定容至IOOOmL,临用前加超纯水稀释10倍，贴上标贴，室温储存。样品缓冲液精密称取SDS(分析纯)4g，溴酚蓝(分析纯)0. 2g,加20mL甘油 (分析纯)，IOmLlMTris-HCl (ρΗ6· 8)溶液，IOmL β -巯基乙醇(分析纯)，加超纯水溶解至 IOOmL,贴上标贴，室温储存。考马氏亮蓝染色液精密称取考马氏亮蓝R — 250 (分析纯)lg，加甲醇(分析纯)200mL,冰醋酸(分析纯)50mL,以超纯水定容至500mL，贴上标贴，室温储存。考马氏亮蓝洗脱液量取乙醇(分析纯)250mL,冰醋酸(分析纯)80mL,加超纯水定容至IOOOmL,贴上标贴，室温储存。染色固定液10%的三氯醋酸溶液。实施例1本专利技术检测方法1、检测方法(I)供试品的制备称取半夏药材2g，加冰水4mL，在研钵中快速研磨，立即转移至离心管中，于 2000r/min条件下离心2min ；取上清液50 μ 1，加样品 缓冲液5 μ 1，混匀后于沸水中加热3min，于4000r/min条件下离心30s，冷冻储存备用。(2)电泳制备浓缩胶和分尚胶，待分尚胶与浓缩胶充分凝固后，在电泳槽中加入稀释10倍的电泳缓冲液，加入量以没过玻璃板为准。然后用移液枪吸取20μ I样品，注入加样孔中。 接通电源本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种正品半夏的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）取待检样品，加1~3倍重量的水，水温0℃~5℃，匀浆，离心，得上清液；（2）用SDS?PAGE电泳方法检测步骤（1）的上清液，其在Rm值0.208、0.232、0.312、0.335、0.383、0.405、0.429、0.491、0.615、0.85和/或0.897有谱带，所述电泳的浓缩胶浓度为5%，分离胶浓度为12%。
【技术特征摘要】
1.一种正品半夏的检测方法，其特征在于包括如下步骤(1)取待检样品，加广3倍重量的水，水温(TC飞。C，匀浆，离心，得上清液；(2)用SDS-PAGE电泳方法检测步骤(I)的上清液，其在Rm值O.208,0. 232、0· 312、O.335、O. 383、O. 405、O. 429、0. 491、0. 615、0. 85 和 / 或 O. 897 有谱带，所述电泳的浓缩胶浓度为5%，分离胶浓度为12%。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤(I)中，所述水为待检样品重量的2倍；所述离心为2000r/min离心2min。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤(2)中，所述上清液在Rm值O.208,0. 232,0. 312,0. 335,0. 383,0. 405,0. 429,0. 491,0. 615,0. 85 和 O. 897 有谱带。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述步骤(2)包含如下步骤1)将上清液加入O.Γ1倍体积样品缓冲液，混匀，离心，得上...
【专利技术属性】
技术研发人员：李敏，卢道会，杨小艳，
申请(专利权)人：成都中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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