【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药理学和医药
，涉及药物诱导干细胞定向分化的蛋白 质差异表达图谱的构建与应用，具体涉及构建淫羊藿苷诱导干细胞定向分化心 肌细胞的蛋白质差异表达图谱，鉴定淫羊藿苷诱导组和自发分化组表达蛋白质 组的特征性变化。技术背景胚胎干细胞(embryonic stem cell, ES细胞)体外可定向分化为具有典型 结构和功能的心肌细胞，该分化体系己成为研究心脏基因表达和功能的重要工 具。目前，对ES细胞定向分化为心肌细胞过程中众多基因功能和信号转导网 络调控机制尚不十分清楚。虽有一些研究进行了初步探索，但主要集中于一种 或少数几种己知基因及蛋白质对心肌细胞终末分化途径的影响。而ES细胞定 向分化过程中有众多基因、转录因子、蛋白质和生长因子在不同层面和不同时 间调控着心肌细胞分化，若只利用传统基因、蛋白分析方法，难以系统、彻底 地阐释整个心脏发育的基本机制。仅从DNA序列尚不能回答某基因的表达时 间、表达量、蛋白质翻译后加工和修饰的情况等等，因此在整体水平上研究蛋 白质表达及功能变得日益重要。近年来发展起来的蛋白质组学技术是以基因组编码的所有蛋白质为研...
【技术保护点】
一种心肌细胞蛋白质差异表达图谱的构建方法，其特征是：通过以下步骤实现： （１）建立药物诱导干细胞定向分化为心肌细胞模型：ＥＳ细胞经悬滴培养形成拟胚体，加入药物ＩＣＡ诱导其定向分化为心肌细胞； （２）制备二维电泳蛋白质样品：收集上述不同分化时相的分化细胞，加入裂解缓冲液混匀，液氮中反复冻融３次，加５０μｇ／ｍｌ ＲＮａｓｅ及２００μｇ／ｍｌ ＤＮａｓｅ，在４℃放置１５分钟，１６１００转离心，弃上清，再用１％二硫苏糖醇预冷丙酮洗两遍，室温干燥１小时，水化液溶解后测蛋白浓度，上述裂解缓冲液组成含１０％三氯乙酸丙酮冷溶液和１％二硫苏糖醇，水化液组成含８ｍｏｌ／Ｌ尿素，４％ＣＨＡＰＳ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：朱丹雁，楼宜嘉，李欢，张翔南，周立民，梁星光，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]
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