一种磷酸化胶原蛋白的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种磷酸化胶原蛋白的制备方法，其步骤包括：一、磷酸化；二、盐析；三、纯化；四、干燥；所得磷酸化胶原蛋白为白色粉末，其收得率≥87.5％，磷酸化程度15.2磷／mol。本发明专利技术比传统胶原蛋白具有更好的生理活性，能更好的促进人体对钙铁等的吸收和利用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种胶原蛋白的制备方法，尤其涉及。
技术介绍
合适条件下，用化学试剂与水解胶原蛋白分子中特定基团发生化学反应，生成水解胶原蛋白化学修饰物。如进行磷酸化，生成水解胶原蛋白；进行季铵化，生成季铵化水解胶原蛋白。由于新基团加入，改变了水解胶原蛋白的物理化学及功能性质，使之更适合于特殊用途。在三聚磷酸钠作用下，胶原蛋白分子中的羟基发生非酶磷酸化，形成磷酸化胶原蛋白质。磷酸化的胶原蛋白带负电荷，与钙、铁等离子形成离子配位化合物，即使在微碱性条件下也呈溶解状态，从而有利于上述离子的吸收利用。磷酸化胶原蛋白的作用类似于酪蛋白磷酸肽，但是其价格远低于酪蛋白磷酸肽，是一种值得开发的钙离子强化剂。因此，要想获得一种磷酸化胶原蛋白，就必须。
技术实现思路
为了解决现有技术中的问题，本专利技术的目的是提供。为达到上述目的，本专利技术所采用的技术手段是 一种磷酸化胶原蛋白的制备方 法，其步骤包括 一、磷酸化称取定量水解胶原蛋白液，置于反应釜中，在搅拌下用蒸馏水稀释至蛋白质质量浓度为O. 25%，用氢氧化钠溶液调节其pH值为8. 0-9. O,向反应釜夹层通入蒸汽，使稀释胶原蛋白液升温至70°C，在保温状态下加入三聚磷酸钠进行磷酸化反应，三聚磷酸钠用量为胶原蛋白质量的1/1 ,反应2. 5h; 二、盐析完成反应后，向反应釜夹层通入冷却水，降温至8°C以下，泵入沉淀罐，然后，在搅拌下向反应釜中泵入饱和硫酸铵溶液盐析沉淀磷酸化胶原蛋白，直至盐析液中硫酸被饱和度达到85%时止； 三、纯化静置处理30min后离心，离心机转速为13000r/ min，温度4°C，离心时间8min,弃上清液，沉淀物再次用饱和度为85%的硫酸铵溶液充分洗涤数次，冷冻离心，获得脱无机磷的磷酸化胶原蛋白沉淀，将脱无机磷的磷酸化胶原蛋白沉淀置于透析袋中，对PH值为8. 5的碳酸钠溶液进行过夜透析脱盐，获得脱盐磷酸化胶原蛋白液；四、干燥将脱盐磷酸化胶原蛋白液进行冷冻干燥，获得磷酸化胶原蛋白冻干粉，冷冻干燥条件为温度-50 _45°C，真空度为80 lOOPa，时间为12 16h。进一步的，所述步骤四中所得磷酸化胶原蛋白为白色粉末，其收得率> 87. 5%，磷酸化程度15. 2磷/ mo I胶原蛋白。本专利技术的有益效果在于通过本方法制备高纯度的磷酸化胶原蛋白，白色粉末，磷酸化胶原蛋白收得率>87.5%，磷酸化程度15.2磷/ mol胶原蛋白，比传统胶原蛋白具有更好的生理活性，能更好的促进人体对钙铁等的吸收和利用。具体实施例方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明，以助于理解本专利技术的内容。实施例1 ，其步骤包括 一、磷酸化称取Ikg水解胶原蛋白液，置于反应釜中，在搅拌下用蒸馏水稀释至蛋白质质量浓度为O. 25 %，用氢氧化钠溶液调节其pH值为8. O，向反应釜夹层通入蒸汽，使稀释胶原蛋白液升温至70°C，在保温状态下加入三聚磷酸钠进行磷酸化反应，三聚磷酸钠用量为胶原蛋白质量的1/1 ,反应2. 5h; 二、盐析完成反应后，向反应釜夹层通入冷却水，降温至8°C以下，泵入沉淀罐，然后，在搅拌下向反应釜中泵入饱和硫酸铵溶液盐析沉淀磷酸化胶原蛋白，直至盐析液中硫酸被饱和度达到85 %时止； 三、纯化静置处理30min后离心，离心机转速为13000r/ min，温度4°C，离心时间8min,弃上清液，沉淀物再次用饱和度为85%的硫酸铵溶液充分洗涤数次，冷冻离心，获得脱无机磷的磷酸化胶原蛋白沉淀，将脱无机磷的磷酸化胶原蛋白沉淀置于透析袋中，对PH值为8. 5的碳酸钠溶液进行过夜透析脱盐，获得脱盐磷酸化胶原蛋白液；四、干燥将脱盐磷酸化胶原蛋白液进行冷冻干燥，获得磷酸化胶原蛋白冻干粉，冷冻干燥条件为温度-50°C，真空度为80Pa，时间为12h。步骤四中所得磷酸化胶原蛋白为白色粉末，其收得率为87. 8%，磷酸化程度15. 2磷/ mol胶原蛋白。实施例2 ，其步骤包括 一、磷酸化称取1.5kg水解胶原蛋白液，置于反应釜中，在搅拌下用蒸馏水稀释至蛋白质质量浓度为O. 25%，用氢氧化钠溶液调节其pH值为9. O,向反应釜夹层通入蒸汽，使稀释胶原蛋白液升温至70°C，在保温状态下加入三聚磷酸钠进行磷酸化反应，三聚磷酸钠用量为胶原蛋白质量的1/1 ,反应2. 5h; 二、盐析完成反应后，向反应釜夹层通入冷却水，降温至8°C以下，泵入沉淀罐，然后，在搅拌下向反应釜中泵入饱和硫酸铵溶液盐析沉淀磷酸化胶原蛋白，直至盐析液中硫酸被饱和度达到85 %时止； 三、纯化静置处理30min后离心，离心机转速为13000r/ min，温度4°C，离心时间8min,弃上清液，沉淀物再次用饱和度为85 %的硫酸铵溶液充分洗涤数次，冷冻离心，获得脱无机磷的磷酸化胶原蛋白沉淀，将脱无机磷的磷酸化胶原蛋白沉淀置于透析袋中，对PH值为8. 5的碳酸钠溶液进行过夜透析脱盐，获得脱盐磷酸化胶原蛋白液；四、干燥将脱盐磷酸化胶原蛋白液进行冷冻干燥，获得磷酸化胶原蛋白冻干粉，冷冻干燥条件为温度-45°C，真空度为lOOPa，时间为16h。步骤四中所得磷酸化胶原蛋白为白色粉末，其收得率为88. 0%，磷酸化程度15. 2磷/ mol胶原蛋白。本专利技术的实施例所表述的，并不局限于此，任何熟悉本
的技术人员在本专利技术揭露的技术范围 内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种磷酸化胶原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤包括：一、磷酸化：称取定量水解胶原蛋白液，置于反应釜中，在搅拌下用蒸馏水稀释至蛋白质质量浓度为0.25％，用氢氧化钠溶液调节其pH值为8.0?9.0，向反应釜夹层通入蒸汽，使稀释胶原蛋白液升温至70℃，在保温状态下加入三聚磷酸钠进行磷酸化反应，三聚磷酸钠用量为胶原蛋白质量的1/1?，反应2.5h；二、盐析：完成反应后，向反应釜夹层通入冷却水，降温至8℃以下，泵入沉淀罐，然后，在搅拌下向反应釜中泵入饱和硫酸铵溶液盐析沉淀磷酸化胶原蛋白，直至盐析液中硫酸被饱和度达到85％时止；三、纯化：静置处理30min后离心，离心机转速为l3000r／min?，温度4℃，离心时间8min，弃上清液，沉淀物再次用饱和度为85％的硫酸铵溶液充分洗涤数次，冷冻离心，获得脱无机磷的磷酸化胶原蛋白沉淀，将脱无机磷的磷酸化胶原蛋白沉淀置于透析袋中，对pH值为8.5的碳酸钠溶液进行过夜透析脱盐，获得脱盐磷酸化胶原蛋白液；?????四、干燥：将脱盐磷酸化胶原蛋白液进行冷冻干燥，获得磷酸化胶原蛋白冻干粉，冷冻干燥条件为温度?50～?45℃，真空度为80～100Pa，时间为12～16h。...

【技术特征摘要】
1.一种磷酸化胶原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤包括 一、磷酸化称取定量水解胶原蛋白液，置于反应釜中，在搅拌下用蒸馏水稀释至蛋白质质量浓度为O. 25%，用氢氧化钠溶液调节其pH值为8. 0-9. O,向反应釜夹层通入蒸汽，使稀释胶原蛋白液升温至70°C，在保温状态下加入三聚磷酸钠进行磷酸化反应，三聚磷酸钠用量为胶原蛋白质量的1/1 ,反应2. 5h; 二、盐析完成反应后，向反应釜夹层通入冷却水，降温至8°C以下，泵入沉淀罐，然后，在搅拌下向反应釜中泵入饱和硫酸铵溶液盐析沉淀磷酸化胶原蛋白，直至盐析液中硫酸被饱和度达到85%时止； 三、纯化静置处理30min后离心，离心机转速为1300...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹荣军，任宪君，杨庆利，孙杰，武鑫，刘少芳，张秋艳，金海明，姚秀芬，台文静，
申请(专利权)人：青岛贝尔特生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：