产生和使用原胶原的方法技术

提供了促进伤口愈合、治疗纤维化和/或促进血管发生的方法。该方法包括给有此需要的受试者施用治疗有效量的原胶原，从而在受试者中促进伤口愈合、治疗纤维化和/或促进血管发生。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】提供了促进伤口愈合、治疗纤维化和/或促进血管发生的方法。该方法包括给有此需要的受试者施用治疗有效量的原胶原，从而在受试者中促进伤口愈合、治疗纤维化和/或促进血管发生。【专利说明】 本申请是以下申请的分案申请：申请日：2009年4月16日；申请号： 200980121650. 9 ;专利技术名称：同上。 专利
和背景 本专利技术在其一些实施方案中涉及包括原胶原的组合物，及其在促进伤口愈合、治 疗纤维化和促进血管发生中的用途。 哺乳动物身体起始愈合应答以预防威胁生命的出血和感染的快速应答已进行进 化以确保存活，通常以受损组织的有效再生为代价。伤口愈合过程需要不同阶段，一些是顺 次的，而其他的是伴随的。然而，所有阶段在受损组织部位处小心地配合，以再生具有正常 功能性的组织。事件顺序涉及凝固、炎症、组织沉积（迁移和增殖）和最终组织重建。 在组织损伤时，血液从受损血管中释放，从而导致具有血小板陷入其内的血纤蛋 白纤维网格形成。网格充当被募集的细胞朝向其和遍及其移动的支架。活化的血小板脱粒 且释放趋化试剂，包括细胞因子和生长因子例如转化生长因子-β I (TGF-β 1)，从而导致成 纤维细胞和角质形成细胞的募集。在损伤后几天，通过沉积新胶原基质，成纤维细胞开始代 替受损组织。胶原纤维在厚度中逐步增加，并且沿着伤口的应激线（stress line)排成一 行。在正常瘢痕形成中，胶原纤维一般与表皮平行排列。通过肌成纤维细胞，这个新形成的 肉芽组织最终组构且收缩成更致密的结构。 瘢痕通常由于伤口愈合应答的正常进展形成，并且由在愈合过程期间沉积的结缔 组织组成。大多数瘢痕显示一定程度的异常组构（如皮肤瘢痕中可见）和结缔组织的量 (如中枢神经系统瘢痕中可见）。然而，正常组织生产级联中的改变导致小于最佳的伤口愈 合，伴随瘢痕形成组织的过量沉积，导致瘢痕疙瘩和肥厚性瘢痕形成，也称为纤维化。肥厚 性瘢痕的特征在于过量胶原沉积，改变的胶原重建和收缩，并且不同于瘢痕疙瘩瘢痕之处 在于它们限定在伤口部位的边界内。 转化生长因子-Pl(TGF-Pl)在这些愈合过程中起重要作用，并且已报告介导 成纤维细胞转变为肌成纤维细胞。这个成纤维细胞亚型的特征在于α-平滑肌肌动蛋白 (a-SMA)表达，并且与伤口收缩有关。TGF-β?通过上调原胶原的mRNA稳定性和表达来 诱导胶原沉积。此外，它通过抑制基质金属蛋白酶（MMPs)表达，同时诱导组织金属蛋白酶 (HMP s)抑制剂表达来减少胶原降解率。 除MMP/TIPMP平衡外，胶原分子对此种酶促活性的可接近性也是决定胶原降解率 中的重要因素。这种可接近性主要由胶原的组构状态（螺旋单体与组构成原纤维的单体比 较）和胶原三股螺旋之间的交联程度决定。 I和III型胶原是原纤维形成性胶原，其构成大量皮细胞外基质。胶原作为原胶原 前体合成，其中3个胶原多肽卷曲到彼此内，形成三股螺旋。这些螺旋随后在胶原原纤维生 物合成的最后一个步骤时连接在一起。I型原胶原由2条a 1胶原链和单条α 2链组成。 III型由3条α 1链构成。 在所有纤维胶原分子中，3条多肽链由重复Gly-X-Y三联体构成，其中X和Y可以 是任何氨基酸，但通常是亚氨基酸脯氨酸和羟脯氨酸。原纤维形成性胶原的重要特征是它 们作为包含球形N和C末端延伸前肽的前体原胶原合成。 每个原胶原分子在粗面内质网内由其3条组成成分多肽链装配。当多肽链共翻译 地转运越过内质网膜时，在Gly-X-Y重复区内发生脯氨酸和赖氨酸残基的羟基化。一旦多 肽链完全转运到内质网的腔内，3条前α链就经由其C前肽结合以形成三聚分子，从而允许 Gly-X-Y重复区在其C末端上形成成核点，确保链的正确排列。Gly-X-Y区随后以C至N方 向折叠以形成三股螺旋。 C-前肽以及在较少程度上的N-前肽在其离开细胞的过程中维持原胶原可溶性 。在原胶原分子分泌到细胞外基 质后或在该过程中，前肽一般通过原胶原N和C蛋白酶切割，从而触发胶原分子自发自装配 成原纤维。 前肽通过原胶原N和C蛋白酶的去除急剧降低原胶原的可溶性，并且是起始胶原 在37°C自装配成纤维所必需的。对于这个装配过程关键的是称为端肽的短的非三股螺旋 肽，其是N和C末端前肽在用N/C蛋白酶消化后的残留部分。通过降低对于自装配所必需 的临界浓度，这些肽作用于确保胶原分子在原纤维结构内经由其可交联醛的正确共价对准 (Bulleid 等人，2000,同上）。 迄今为止，动物衍生的胶原是用于医学应用的胶原的主要来源。动物纯化的胶 原是完全加工的包含交联的端肽，这使得其高度不可溶。动物纯化的胶原的增溶作用一 般使用提取法来实现，所述提取法涉及用蛋白水解酶例如胰蛋白酶蛋白水解去除端肽区， 从而产生可以增溶的去端肽胶原（atelocollagen)(关于用于制备纯化的可溶性胶原的 一般方法，参见美国专利号 3, 934, 852 ;3, 121，049 ;3, 131，130 ;3, 314, 861 ;3, 530, 037 ; 3, 949, 073 ;4, 233, 360和4, 488, 911)。去端肽胶原在生理条件下经历原纤维生成，以形成 纤维。此种纤维是相对稳定的结构，对通过MMPs的蛋白水解有抵抗力。然而，这些纤维缺 乏在原胶原中发现的分子结构域，其对于天然伤口愈合过程和胶原结构的天然形成是必需 的。 如提及的，在伤口愈合过程期间正常组织生产级联中的改变可导致瘢痕形成组织 的过量沉积，导致纤维化。 美国专利号6, 448, 278和其中的参考文献描述了用于治疗与未调节的胶原生产 相关的各种医学状况的特异性原胶原C-蛋白酶（PCP)抑制剂，包括病理学纤维化或疤痕形 成。 Zhang Y等人，1999,13(1) :51-4教导了通过施用血小板衍生的伤口愈合因子 (PDWHF)直接刺激原胶原I (α 1)基因表达。 Saggers等人，报告了从大鼠尾腱中分离的酸溶性 胶原抑制在胶原包被的皿上生长的人皮成纤维细胞中的I和III型原胶原mRNA表达。促 蛋白合成类固醇一一氧雄龙，拮抗原胶原mRNA表达的此种胶原底物抑制。这些发现暗示氧 雄龙可通过增加与类似于愈合伤口的胶原基质相关的成纤维细胞中的原胶原mRNA表达直 接增强伤口愈合。 美国专利申请号20030199441和20050282737教导了用于治疗或预防纤维化疾病 的药物。它们描述了具有抗纤维化活性的（多）肽应用，包括至少一种N末端原胶原（III) 前肽和C末端原胶原（III)前肽、或（多）肽片段。 专利技术概沭 根据本专利技术的一些实施方案的一个方面，提供了促进伤口愈合、治疗纤维化和/ 或促进血管发生的方法，其包括给有此需要的受试者施用治疗有效量的原胶原，从而促进 受试者中的伤口愈合、治疗纤维化和/或促进血管发生。 根据本专利技术的一些实施方案的一个方面，提供了原胶原用于促进伤口愈合、治疗 纤维化和/或促进血管发生的用途。 根据本专利技术的一些实施方案的一个方面，提供了制造物品，其包括包装材料，所述 包装材料包装作为活性成分的原胶原和用于促进伤口愈合、治疗纤维化和/或促进血管发 生的试剂。 根据本专利技术的一些实施方案的一个方面，提供了药物组合物，其包括作为活性成 分的原胶原和本文档来自技高网...

【技术保护点】
人I型原胶原用于制备促进伤口愈合的药物中的用途，所述人I型原胶原包含：(i)两条胶原蛋白I型α1链，其各自具有登记号P02452所述的序列；和(ii)一条胶原蛋白I型α2链，其具有登记号P08123所述的序列。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：O肖塞约夫，O德加尼，DL西格尔，
申请(专利权)人：科尔普兰特有限公司，
类型：发明
国别省市：以色列;IL