血清白蛋白结合分子制造技术

本发明专利技术涉及一种基于结合血清白蛋白的纤连蛋白III型第十(10Fn3)结构域的抗体样蛋白质。本发明专利技术进一步关于包含结合血清白蛋白的10Fn3连接于异源蛋白质的融合分子，其用于诊断及治疗应用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】血清白蛋白结合分子相关申请本申请主张2010年5月3日申请的美国临时申请第61/330，672号的权益，该申请以全文引用的方式并入本文中。现有技术许多治疗剂，尤其诸如肽、多肽及多核苷酸的生物制剂的效用因血清半衰期不足而受损。这导致需要以高频率及/或较高剂量投与此类治疗剂，或使用持续释放制剂，以维持为治疗效果所必需的血清水平。频繁地全身投与药物会引起相当大的消极副作用。举例而言，频繁地全身注射给受试者带来相当大的不适，且造成投药相关性感染的高风险，并可能需要住院治疗或频繁地到医院就诊，尤其当欲静脉内投与治疗剂时。另外，在长期治疗中，每天静脉内注射亦会导致相当大的如下副作用由反复穿刺血管引起的组织疤痕形成及血管病变。已知关于所有频繁的全身性治疗剂投与均存在类似问题，例如向糖尿病患者投与胰岛素，或向罹患多发性硬化症的患者投与干扰素药物。所有此等因素均导致患者顺应性降低并增加卫生系统的成本。本申请提供可延长各种治疗剂的血清半衰期的化合物、具有延长的血清半衰期的化合物，及延长治疗剂的血清半衰期的方法。用于延长治疗剂的血清半衰期的此类化合物及方法可以成本有效的方式制造或实施，具有理想的生物物理学性质(例如Tm、基本上为单体或良好折叠)，且尺寸足够小而允许组织穿透。
技术实现思路
本专利技术涉及结合血清白蛋白的纤连蛋白III型第十C°Fn3)结构域及其用途。本文还公开了包含血清白蛋白结合性kiFM的融合分子及其用途。在一个方面，本专利技术提供一种包含纤连蛋白III型第十C°Fn3)结构域的多肽，其中该kiFM结构域以I μ M或更 小的Kd结合人类血清白蛋白(HSA)的结构域I或II，且其中在白蛋白存在下该多肽的血清半衰期为在血清白蛋白不存在下该多肽的血清半衰期的至少5倍。在一个实施方式中，相对于野生型wFM结构域，该kiFM结构域在BC、DE及FG环中的一或多者中包含经修饰的氨基酸序列。在某些实施方式中，该％113结构域在5. 5至7. 4的pH值范围内结合HSA。在一个实施方式中，该kiFM结构域在5. 5至7. 4的pH值范围内为以200nM或更小的Kd结合HSA。 在另一个实施方式中，该uiFr^结构域在pH 5. 5以200nM或更小的Kd结合HSA。在一些方面中，本文提供一种包含uiFr^结构域的多肽，其中该kiFM结构域结合 HSA且包含与SEQ ID NO: 2至少70%同一的氨基酸序列。在一个实施方式中，该1QFn3结构域包括下列中的一或多者包含SEQ ID N0:5所示的氨基酸序列的BC环、包含SEQ ID NO:6 所示的氨基酸序列的DE环、及包含SEQ ID NO: 7所示的氨基酸序列的FG环。在任一上述方面及实施例中，该结构域还结合称猴(rhesus)血清白蛋白 (RhSA)、食蟹猴(cynomolgous monkey)血清白蛋白(CySA)或鼠血清白蛋白(MuSA)中的一或多者。在某些实施方式中，该kiFM结构域不与RhSA、CySA或MuSA中的一或多者交叉反应。在任一上述方面及实施方式中，该uiFr^结构域以I μ M或更小的Kd结合HSA。在一些实施方式中，该wFM结构域以500ηΜ或更小的Kd结合HSA。在其它实施方式中，该wFM 结构域以至少 200ηΜ、100ηΜ、50ηΜ、20ηΜ、10ηΜ 或 5ηΜ 的 Kd 结合 HSA。在任一上述方面及实施方式中，该kiFM结构域结合HSA的结构域I或II。在一个实施方式中，该kiFM结构域结合HSA的结构域I与II。在一些实施方式中，该uiFr^结构域在5. 5至7. 4的pH值范围内结合HSA。在其它实施方式中，该uiFr^结构域在pH 5.5 以200nM或更小的Kd结合HSA。在另一个实施方式中，该kiFM结构域在5. 5至7. 4的pH 值范围内以至少500nM、200nM、100nM、50nM、20nM、10nM或5nM的Kd结合HSA。在一个实施方式中，该 10Fn3 结构域在 pH 5. 5 以至少 500nM、200nM、100nM、50nM、20nM、IOnM 或 5nM 的 Kd 结合HSA。在任一上述方面及实施方式中，在血清白蛋白存在下该多肽的血清半衰期为在血清白蛋白不存在下该多肽的血清半衰期的至少2倍。在某些实施方式中，在血清白蛋白存在下该多肽的血清半衰期为在血清白蛋白不存在下该多肽的血清半衰期的至少5倍、7倍、 10倍、12倍、15倍、20倍、22倍、25倍、27倍或30倍。在一些实施方式中，所述血清白蛋白为 HSA、RhSA、CySA 或 MuSA 中的任一者。在任一上述方面及实施方式中，在血清白蛋白存在下该多肽的血清半衰期为至少 20小时。在某些实施方式中，在血清白蛋白存在下该多肽的血清半衰期为至少2小时、2. 5 小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、15小时、20小时、25小时、30小时、40小时、50小时、75小时、90小时、100小时、110小时、120小时、130 小时、150小时、170小时或200小时。在一些实施方式中，该多肽的半衰期是在灵长类(例如人或猴)或鼠类中观察到的。 在一个方面，本专利技术提供一种包含uiFr^结构域的多肽，其中该kiFM结构域结合 HSA，且包括包含SEQ ID NO: 5所示的氨基酸序列的BC环、包含SEQ ID N0:6所示的氨基酸序列的DE环、及包含SEQ ID N0:7所示的氨基酸序列的FG环。在另一方面中，该kiFM结构域包括以下的一或多者包含SEQID NO: 5所示的氨基酸序列的BC环、包含SEQ ID NO: 6 所示的氨基酸序列的DE环、及包含SEQ ID NO: 7所示的氨基酸序列的FG环。在一个方面，本专利技术提供一种包含uiFr^结构域的多肽，其中该kiFM结构域结合 HSA，且包括包含SEQ ID NO: 9所示的氨基酸序列的BC环、包含SEQ ID N0:10所示的氨基酸序列的DE环、及包含SEQ ID NO: 11所示的氨基酸序列的FG环。在另一方面中，该1QFn3 结构域包括以下一或多者包含SEQID NO:9所示的氨基酸序列的BC环、包含SEQ ID N0:10 所示的氨基酸序列的DE环、及包含SEQ ID NO: 11所示的氨基酸序列的FG环。在一个方面，本专利技术提供一种包含uiFr^结构域的多肽，其中该kiFM结构域结合 HSA，且包括包含SEQ ID NO: 13所示的氨基酸序列的BC环、包含SEQ ID NO: 14所示的氨基酸序列的DE环、及包含SEQ ID NO: 15所示的氨基酸序列的FG环。在另一方面中，该 10Fn3结构域包括以下一或多者包含SEQ ID NO: 13所示的氨基酸序列的BC环、包含SEQ ID NO: 14所示的氨基酸序列的DE环及包含SEQ ID NO: 15所示的氨基酸序列的FG环。在一个方面，本专利技术提供一种包含uiFr^结构域的多肽，其中该kiFM结构域结合HSA且包括包含SEQ ID NO: 17所示的氨基酸序列的BC环、包含SEQ ID NO: 18所示的氨基酸序列的DE环及包含SEQ ID NO: 19所示的氨基酸序列的FG环。在另一方面中，该1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.05.03 US 61/330,672;2011.05.02 US 13/098,8511.一种包含纤连蛋白III型第十C°Fn3)结构域的多肽，其中该kiFM结构域以ΙμΜ或更小的Kd结合人血清白蛋白的结构域I或2，且其中在白蛋白存在下该多肽的血清半衰期是在血清白蛋白不存在下该多肽的血清半衰期的至少5倍。2.权利要求1的多肽，其中相对于野生型uiFr^结构域，该kiFM结构域在BC、DE及FG环中的一或多者中包含经修饰的氨基酸序列。3.权利要求1或2的多肽，其中该kiFM结构域在5.5至7. 4的pH范围结合血清白蛋白。4.权利要求1-3中任一项的多肽，其中该kiFM结构域在pH5. 5以200nM或更小的Kd结合HSA。5.一种包含纤连蛋白III型第十C°Fn3)结构域的多肽，其中该kiFM结构域结合人血清白蛋白且包含与SEQ ID NO:2至少70%同一的氨基酸序列。6.权利要求5的多肽，其中该uiFr^结构域包含以下一或多者包含SEQIDNO:5所示氨基酸序列的BC环、包含SEQ ID NO: 6所示氨基酸序列的DE环、及包含SEQ ID NO: 7所示氨基酸序列的FG环。7.权利要求5的多肽，其中该1QFn3结构域包含选自SEQID NO:8、12、16、20及24-44的序列。8.权利要求5至7中任一项的多肽，其中该kiFM结构域还结合猕猴血清白蛋白(RhSA)、食蟹猴血清白蛋白(CySA)或鼠血清白蛋白(MuSA)中的一或多者。9.权利要求5至7中任一项的多肽，其中该1QFn3结构域不与RhSA、CySA或MuSA中的一或多者交叉反应。10.权利要求5至9中任一项的多肽，其中该wFM结构域以Iμ M或更小的Kd结合HSA。11.权利要求5至10中任一项的多肽，其中该kiFM结构域以500ηΜ或更小的Kd结合HSA。12.权利要求5至11中任一项的多肽，其中该kiFM结构域结合HSA的结构域I或II。13.权利要求5至12中任一项的多肽，其中该uiFr^结构域在5.5至7. 4的pH范围结合血清白蛋白。14.权利要求5至13中任一项的多肽，其中该kiFM结构域在pH5. 5以200nM或更小的Kd结合HSA。15.权利要求5至14中任一项的多肽，其中在血清白蛋白存在下该多肽的血清半衰期是在血清白蛋白不存在下该多肽的血清半衰期的至少5倍。16.权利要求5至15中任一项的多肽，其中在血清白蛋白存在下该多肽的血清半衰期为至少2小时。17.一种包含纤连蛋白III型第十C°Fn3)结构域的多肽，其中该kiFM结构域结合人血清白蛋白，且包含包含SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的BC环、包含SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的DE环、及包含SEQ ID NO: 7所示氨基酸序列的FG环。18.权利要求17的多肽，其中该kiFM结构域还结合猕猴血清白蛋白(RhSA)、食蟹猴血清白蛋白(CySA)或鼠血清白蛋白(MuSA)中的一或多者。19.权利要求17的多肽，其中该uiFr^结构域不与RhSA、CySA或MuSA中的一或多者交叉反应。20.权利要求17至19中任一项的多肽，其中该kiFM结构域以Iμ M或更小的Kd结合HSA。21.权利要求17至20中任一项的多肽，其中该kiFM结构域以500ηΜ或更小的Kd结合HSA。22.权利要求17至21中任一项的多肽，其中该kiFM结构域结合于HSA的结构域I或II。23.权利要求17至22中任一项的多肽，其中该uiFr^结构域在5.5至7. 4的pH范围结合血清白蛋白。24.权利要求17至23中任一项的多肽，其中该kiFM结构域在pH5. 5以200nM或更小的Kd结合HSA。25.权利要求17至24中任一项的多肽，其中在血清白蛋白存在下该多肽的血清半衰期是在血清白蛋白不存在下该多肽的血清半衰期的至少5倍。26.权利要求17至25中任一项的多肽，其中在血清白蛋白存在下该多肽的血清半衰期为至少2小时。27.一种包含纤连蛋白III型第十C°Fn3)结构域及异源蛋白质的融合多肽，其中该10Fn3结构域以I μ M或更小的Kd结合人血清白蛋白。28.权利要求27的融合多肽，其中该1QFn3结构域包含与SEQID N0:4至少70%同一的氨基酸序列。29.权利要求27或28的融合多肽，其中该1QFn3结构域包含选自SEQIDNO:8、12、16、20及24-44的氨基酸序列。30.权利要求27或28的融合多肽，其中该uiFr^结构域包含具有SEQIDNO:5所示氨基酸序列的BC环、具有SEQ ID NO: 6所示氨基酸序列的DE环、及具有SEQ ID NO: 7所示氨基酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：ML戈斯林，D法布里齐奥，JF斯万，TS米切尔，R坎福森，ST克洛德，E弗法恩，PE莫林，R穆克赫吉，SI泰勒，
申请(专利权)人：百时美施贵宝公司，
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