【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物学
，具体涉及一种检测肺炎支原体抗体的方法、采用此方法进行检测的试剂盒、以及该试剂盒的制备方法。
技术介绍
肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae, Mp)是人类原发性非典型肺炎的病原体，还可以引起其他呼吸道感染性疾病甚至机体其它组织疾病，且发病率日益增加并有流行趋势。由于Mp无细胞壁，故其引起感染的治疗与其它细菌和病毒感染在治疗方法上有所不同，因此，Mp感染的病原学诊断对于疾病的及时正确治疗有重要意义。目前检测肺炎支原体的方法虽然很多，但缺乏更为快速简易而又可靠的方法。X线征象均缺乏特异性，且须与病毒性肺炎、军团菌肺炎相鉴别，只能通过实验室检查病原体分离阳性和血清学试验进行鉴别诊断、确诊。血清中特异性IgM及IgG抗体可通过冷凝集试验(CAT)、明胶颗粒凝集实验(PLA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、金标免疫斑点法(DIM)等方法进行测定。CAT特异度和敏感度均为最低，因此其临床诊断价值不大；金标斑点法虽操作简便快捷，但敏感度略低，有漏诊的可能；明胶颗粒凝集试验试剂准备与操作过程较为繁琐费时，且需要专业操作人员。酶联...
【技术保护点】
一种用于检测肺炎支原体抗体的方法，其特征在于：将抗人IgM与抗人IgG分别固定在膜上，加入待检血清，待检血清中的肺炎支原体抗体和固定到膜上的抗人IgM与抗人IgG结合后，加入酶标记肺炎支原体抗原溶液，最后加入显色液显色显示结果；所述酶标记肺炎支原体抗原溶液采用辣根过氧化物酶标记肺炎支原体抗原溶液，并采用以下步骤制备：（1）将1g辣根过氧化物酶溶于25ml～30ml的0.01M磷酸盐缓冲液中，加入70～85mg乙二胺，用0.1M盐酸将pH值调节至5.0，所得溶液再与115～125mg1?乙基?(3?二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐混合，室温振荡反应后，采用0.01M磷酸盐缓冲...
【技术特征摘要】
1.一种用于检测肺炎支原体抗体的方法，其特征在于将抗人IgM与抗人IgG分别固定在膜上，加入待检血清，待检血清中的肺炎支原体抗体和固定到膜上的抗人IgM与抗人IgG结合后，加入酶标记肺炎支原体抗原溶液，最后加入显色液显色显示结果；所述酶标记肺炎支原体抗原溶液采用辣根过氧化物酶标记肺炎支原体抗原溶液，并采用以下步骤制备(1)将Ig辣根过氧化物酶溶于25ml 30ml的O.OlM磷酸盐缓冲液中，加入70 85mg乙二胺，用O.1M盐酸将pH值调节至5. 0，所得溶液再与115 125mgl-乙基_ (3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐混合，室温振荡反应后，采用O. OlM磷酸盐缓冲液对所得溶液进行透析，制得氨基化辣根过氧化物酶溶液；(2)将步骤(I)制得的溶液配制成1ml、浓度为5 5.2mg/ml的氨基化辣根过氧化物酶溶液，再向所得溶液内加入60 85 μ I交联剂，混匀后于室温下反应25 35min ；(3)将所述反应物加入截留分子量为IOK的超滤管，并对反应物进行离心处理8 12min，再以O. OlM的磷酸盐缓冲液复溶滞留结合物至1ml，再以同样离心力离心8 12min,以除去过量的交联剂，并再次复溶滞留物至Iml ；(4)加入700 900μ I浓度为1. 6mg/ml的肺炎支原体抗原溶液，并于室温下反应25 35min ；(5)使步骤(4)制得的溶液通过SephadexG-200层析柱，收集第一峰的产物，即为酶标肺炎支原体抗原溶液。2.如权利要求1所述的用于检测肺炎支原体抗体的方法，其特征在于，所述膜为硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯膜。3.如权利要求1所述的用于检测肺炎支原体抗体的方法，其特征在于，所述辣根过氧化物酶标记肺炎支原体抗原所用交联剂分子结构如下4.如权利要求1所述的用于检测肺炎支原体抗体的方法，其特征在于，所述显色液为包括四甲基联苯胺、过氧化脲、抗氧化剂绿原酸、还原剂抗坏血酸、紫外线吸收剂2-氰基-3，3- 二苯基丙烯酸异辛酯和pH5. O的乙酸钠缓冲溶液体系。5.如权利要求4所述的用于检测肺炎支原体抗体的方法，其特征在于，所述显色液采用如下方法制得⑴将8. 3 8. 5g三水合乙酸钠晶体溶于600ml超纯水中，振荡混匀，并调整溶液pH至5. O ；⑵再将O. 4 1. Og四甲基联苯胺溶于3ml无水乙醇中，制得四甲基联苯胺乙醇溶液；⑶将上述两种溶液混合，振荡混匀；⑷分别将70 90mg绿原酸与70 90mg抗坏血酸、8 12ml2_氰基-3，3- 二苯基丙烯酸异辛酯、2. 5 2. 9g磷酰甘氨酸及O. 2 O. 8g过氧化脲加入到步骤(3)所得到的混合溶液中，振荡混...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨致亭，杨金红，邓旭，李升香，武国威，石中强，丁兆明，尚永明，
申请(专利权)人：青岛汉唐生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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