本发明专利技术公开了三种香豆素类化合物瑞香新素、瑞香素和7-羟基-8-甲氧基香豆素在制备丙型肝炎病毒蛋白酶NS3/4A抑制剂和治疗丙型肝炎药物中的应用及其从瑞香（Daphnepapyracea?Wall.ex?Steud.var.?crassiuscula?Rehd.）中提取、分离和纯化方法，上述三种香豆素类物质对丙型肝炎病毒蛋白酶NS3/4A有较强的抑制作用，活性较高，可单独用于制备预防和治疗丙型肝炎的药物，也可与其它组分复配用于预防和治疗丙型肝炎；并且，发明专利技术人采用现代植物化学分离纯化技术首次从瑞香植物中提取分离得到三种香豆素类化合物，化合物纯度在98%，可作为药品检验中的化学标准品应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物
，特别是涉及香豆素类化合物的药物应用及其从瑞香 {Daphne papyracea Wall, ex Steud. var. crassiuscula Rehd.)中提取的方法。
技术介绍
人体感染丙型肝炎病毒所致的丙型肝炎，已成为全球最棘手的健康问题，目前全世界已有1. 7亿人感染。若无药物的治疗，长期感染丙型肝炎病毒将发展成为慢性肝炎、 肝坏死、肝癌等疾病。当前最有效的治疗方法是聚乙二醇干扰素联合利津巴韦，该方法对于广大发展中国家普遍存在的I型丙型肝炎治疗有效率低于50%，长期使用干扰素存在许多副作用，如白细胞、血小板、嗜中性白血球的减少和抑郁症等；长期使用利津巴韦，也将产生溶血性贫血等副作用，使得患者不能持续治疗，因此发展独特、有效、更安全的丙型肝炎治疗药物尤为紧迫。丙型肝炎病毒蛋白酶NS3/4A在病毒圆熟过程中起着重要的作用，已被证实是发现治疗丙型肝炎药物的有效靶点之一。目前三种丙型肝炎NS3/4A蛋白酶抑制剂，BILN 2061，VX-950和SCH 503034，已被临床证实疗效显著，但多为肽类抑制剂，合成困难，并有一定的毒副作用。中药瑞香papyracea Wall, ex Steud. var. crassiuscula Rehd.)系瑞香科瑞香属常绿灌木，又名山辣子皮，麝囊，蓬莱花，雪花、夺香花，野梦花、山梦花，雪地开花、红总管、雪冻花。主要分布于四川、贵州、云南等地海拔1000-3100米的山坡灌丛或草坡中，具有治咽喉肿痛，齿痛，风湿痛等功效。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有治疗丙型肝炎的药物合成困难、副作用多的缺陷，提供三种天然香豆素类化合物在制备丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶抑制剂和治疗丙型肝炎药物中的应用，同时提供从瑞香papyracea Wall, ex Steud. var. crassiuscula Rehd.)中提取、分离和纯化三种化合物的方法。为了解决上述技术问题，本专利技术采用如下的技术方案本专利技术提供了瑞香新素、瑞香素和7-羟基-8-甲氧基香豆素在制备丙型肝炎病毒 NS3/4A蛋白酶抑制剂和治疗丙型肝炎药物中的应用。 本专利技术还提供了从瑞香(Daphne papyracea Wall, ex Steud. var. crassiuscula Rehd.)中提取、分离和纯化上述三种香豆素类化合物的方法取瑞香植物全株，粉碎，用乙醇加热回流提取，提取液浓缩成乙醇浸膏，用水分散，用乙酸乙酯萃取，浓缩得乙酸乙酯浸膏，经硅胶柱层析，以体积比为50:1的氯仿-甲醇梯度洗脱，在氯仿甲醇的体积比为25:1的梯度获得A流份、氯仿甲醇的体积比为10:1的梯度获得B流份、氯仿 甲醇的体积比为8:1的梯度获得C流份，三流份分别经ODS柱层析分离，A流份以体积比为 6:4的甲醇-水洗脱、B流份以体积比为1:9的甲醇-水洗脱、C流份以体积比为1:9的甲醇-水洗脱，洗脱液分别用甲醇重结晶，A流份获得瑞香新素、B流份获得7-羟基-8-甲氧基香豆素、C流份获得瑞香素。进一步的，乙酸乙酯浸膏的提取方法为取瑞香植物全株，粉碎，加5 10重量倍 70 95%的乙醇加热回流提取2 4次，每次I 2小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至无醇味，用等体积的水分散，再用2倍体积量的乙酸乙酯萃取2 3次，浓缩得乙酸乙酯浸在前述方法中，硅胶柱层析时的硅胶为200 300目，上柱硅胶为浸膏用量的 50 150重量倍，ODS柱层析时反相娃胶为100-200目，上柱反相娃胶为浸骨用量的50 100 倍。前述提取、分离和纯化方法中所用到的瑞香为瑞香科瑞香属植物Daphne papyracea Wall, ex Steud. var. crassiuscula Rehd.的全株为了确认所提取化合物的结构及验证其抗丙型肝炎病毒作用，专利技术人做了相关的实验如下1、化合物结构的确认采用上述技术方案从A、B、C三流份中所提取得到的三个化合物，经1H-NMR, 13C-NMR, MS 和与文献对照，分别被确定为A 流份获得的化合物淡黄色粉末，MS (ESI), m/z 409 [M+Na]+，mp. 235_237°C，1H NMR (Pyridine-1/^, 400 MHz) δ 3.81 (6H, s, 2 X -OCH3), 3.90 (2H, d, J = 2.7， 13.0 Hz), 4. 29 (1H, d, J =1. 7, 13.0 Hz), 4. 31 (1H, d, J =8.1，10. 3 Hz), 5. 59 (1H, d, J = 8.2 Hz), 6. 38 (1H, d, J = 9. 5 Hz), 7.04 (1H, d, J = 8.1 Hz), 7.69 (1H, d, J = 9. 5 Hz). 13C NMR (Pyridine-^, 100 MHz) δ 56. 4, 60. 8, 78. 0, 80.1, 106.2，113.4，113.8，113.9，120.0，126.6，132.4，138.5，144.3，144.6，147.8， 160.6。以上光谱数据与文献报道的瑞香新素波谱数据一致(Liu Yan Ze, et al. , Chin Chem. Lett. , 1997, 8(3): 229)。A流份化合物被确定为瑞香新素。分子式为=C2tlH18O8，结构式如下B流份获得的化合物无色针晶；Gibbs反应呈阴性，E1-MS 192 [M]+, 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 3.29 (3Η, s, -OCH3), 6. 17 (1H, d, J = 9· 2 Hz)，6.81 (1Η, d, J = 8.6 Hz), 7. 17 (1H, d, J = 8. 6 Hz), 7. 80 (1H, d, J = 9.2 Hz )· 13C NMR (MeOD, 100 MHz) δ 60.4, 111.1, 112.7， 113.3， 123.5， 134.5， 145.1， 148.3， 154.1， 161. 7。以上光谱数据与文献报道的7-羟基-8-甲氧基香豆素波谱数据一致(王明时等，中草药，1980,11 (2),49). B流份化合物被确定为7-羟基-8-甲氧基香豆素。分子式为=CltlH8O4，结构式如下C 流份获得的化合物无色针晶；MS (ESI), m/z 191 [Μ+ Na]+，1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 6. 17 (1H, d, J = 9. 2 Hz), 6.80 (1H, d, J = 8. 6 Hz), 6.98 (1H, d, J = 8.6 Hz), 7.81 (1H, d, J = 9. 2 Hz )· 13C NMR (MeOD, 100 MHz) δ 110.0 (C_3)， 112.4 (C-1O) ，112.6 (C_6)，118.8 (C_5)，132.2 (C_8), 143.6 (C_4)，145.3 (C_9)， 149.8 (C-7), 162.1 (C_2)。以上光谱数据与文献报道的瑞香素波谱数据一致(Sadtler Standar本文档来自技高网...
【技术保护点】
瑞香新素、瑞香素和7?羟基?8?甲氧基香豆素在制备丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶抑制剂和治疗丙型肝炎药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.瑞香新素、瑞香素和7-羟基-8-甲氧基香豆素在制备丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶抑制剂和治疗丙型肝炎药物中的应用。2.从瑞香中提取、分离和纯化权利要求1所述三种香豆素类化合物的方法，其特征在于取瑞香植物全株，粉碎，用乙醇加热回流提取，提取液浓缩成乙醇浸膏，用水分散，用乙酸乙酯萃取，浓缩得乙酸乙酯浸膏，经硅胶柱层析，以体积比为50:1的氯仿-甲醇梯度洗脱，在氯仿甲醇的体积比为25:1的梯度获得A流份、氯仿甲醇的体积比为10:1的梯度获得B流份、氯仿甲醇的体积比为8:1的梯度获得C流份，三流份分别经ODS柱层析分离，A流份以体积比为6:4的甲醇-水洗脱、B流份以体积比为1:9的甲醇-水洗脱、C流份以体积比为1:9的甲醇-水洗脱，洗脱液分别用甲醇重结晶，A流份获得瑞香新素、B流份获得7-羟基-8-甲氧基香豆素、C流份获得瑞香素。3.按照权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：危英，马超美，服部征雄，梁光义，汪冶，危莉，
申请(专利权)人：贵阳中医学院，
类型：发明
国别省市：
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