本发明专利技术提供一种在降低细胞毒性的同时，显示高核酸导入效率·基因表达效率的优异的核酸递送用组合物。本组合物包含具有非荷电亲水性聚合物链段和阳离子聚合物链段的嵌段共聚物、阳离子聚合物以及核酸，嵌段共聚物所具有的阳离子基团相对于嵌段共聚物及阳离子聚合物所具有的总阳离子基团的摩尔百分率(B/H比)为25％～90％。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种用于向靶细胞或组织递送核酸的。
技术介绍
目前，在核酸治疗中，作为用于向靶细胞或组织递送核酸的载体，研究了病毒载体和合成载体(非病毒性载体)。一般认为，合成载体与现有的医疗中所研究的药物递送系统(DDS) —样，虽然存在涉及毒性等的风险，但若与病毒载体相比，毒性较低而且对承载的核酸的尺寸没有限制，以及可对载体进行精密的分子设计，因此，持续进行大力的开发研究。 作为代表性的合成载体，可以举出与带负电荷的DNA形成离子络合物的阳离子脂质体或阳离子聚合物。对于阳离子脂质体(脂转染物等)，在体外(in vitro)获得一定的成果(例如参照非专利文献I)，但在体内(in vivo)未必能得到期望的效果。另一方面，作为阳离子聚合物，研究有聚(L-赖氨酸)、DEAE-葡聚糖、聚乙烯亚胺(例如参照非专利文献2)、壳聚糖(例如参照非专利文献3)等。但是，这些阳离子聚合物不仅具有细胞毒性，而且核酸导入效率 基因表达效率也不充分。本申请专利技术人报告了通过使具有在侧链具有特定的胺基的阳离子聚合物链段和聚乙二醇(PEG)等非荷电亲水性聚合物链段的嵌段共聚物进行自组装而形成内包核酸的聚离子络合物(PIC)型的高分子胶束，在降低细胞毒性的同时，可得到一定的核酸导入效率 基因表达效率(参照专利文献I :日本特开2004-352972号公报)。但是，由这种PIC型高分子胶束构成的核酸递送系统在核酸导入效率 基因表达效率方面有待改进。另外，本申请专利技术人报告了通过将在侧链具有特定的胺基的阳离子均聚物与核酸进行混合，可以显著地改善核酸导入效率 基因表达效率，同时，也可以相对地抑制对于动物细胞(特别是哺乳类细胞)的毒性(参照专利文献2 :国际公开第2006/085664号小册子)。但是，对于由这种均聚物构成的核酸递送系统，要求细胞毒性的进一步降低。现有技术文献专利文献专利文献I :日本特开2004-352972号公报专利文献2 :国际公开第2006/085664号小册子非专利文献非专利文献I :C. F. Benett et al. , J. Drug Targeting, 5,149 (1997)非专利文献2 0. Boussif et al. , Proc. Natl. Acad. Sci.，USA，92，7297 (1995)非专利文献3 S. C. Richardson et al.，Int. J. Pharm. 178，(1999)23
技术实现思路
专利技术所要解决的课题由以上的背景可知，仍 然需要提供一种在降低细胞毒性的同时，显示高核酸导入效率及基因表达效率的优异的核酸递送用组合物及其载体。用于解决课题的方法本申请专利技术人进行了潜心研究，结果发现，在由具有特定的阳离子聚合物链段和非荷电亲水性聚合物链段的嵌段共聚物构成的聚离子络合物(PIC)型的高分子胶束中，通过以特定的比例混合特定的阳离子均聚物，可以得到兼具低细胞毒性和高核酸导入效率这样两种特性的优异的核酸递送用组合物，直至完成了本专利技术。S卩，本专利技术涉及一种核酸递送用组合物，其用于向靶细胞或组织递送核酸，包含具有非荷电亲水性聚合物链段和阳离子聚合物链段的嵌段共聚物、阳离子聚合物以及核酸，嵌段共聚物所具有的阳离子基团相对于嵌段共聚物及阳离子聚合物所具有的总阳离子基团的摩尔百分率(B/H比)为25% 90%。本专利技术还涉及一种载体组合物，其用于向靶细胞或组织递送核酸，包含具有非荷电亲水性聚合物链段和阳离子聚合物链段的嵌段共聚物以及阳离子聚合物，嵌段共聚物所具有的阳离子基团相对于嵌段共聚物及阳离子聚合物所具有的总阳离子基团的摩尔百分率(B/H比)为25% 卯％。本专利技术还涉及一种药物组合物，其用于核酸治疗，其中，所述医药组合物包含所述核酸递送用组合物或所述载体组合物。本专利技术还涉及一种方法，其用于向靶细胞或组织递送核酸，其中，所述方法包括使所述核酸递送用组合物与靶细胞或组织进行接触。本专利技术还涉及一种方法，其用于向靶细胞或组织递送核酸，其中，所述方法包括使具有非荷电亲水性聚合物链段及阳离子聚合物链段的嵌段共聚物和核酸组成的核酸递送用组合物以及阳离子聚合物与靶细胞或组织进行接触，同时，将与靶细胞或组织进行接触时的核酸递送用组合物的嵌段共聚物所具有的阳离子基团相对于核酸递送用组合物的嵌段共聚物及阳离子聚合物所具有的总阳离子基团的摩尔百分率(B/H比)设为25% 90%。专利技术的效果根据本专利技术的核酸递送用组合物及核酸递送方法，可在降低细胞毒性的同时发挥优异的核酸导入效率。另外，根据本专利技术的载体组合物，可以容易地得到这种优异的核酸递送用组合物。本专利技术的核酸递送用组合物及载体组合物优选作为例如核酸治疗用的药物组合物。附图简述图I (a)及(b)是表示在各B/H比下的颗粒形状的透射电子显微镜照片；图2是表示B/H比和Z-电位的关系的图； 图3是表示转染效率和B/H比及N/P比的关系的图；图4表示细胞毒性和B/H比及N/P比的关系的图；图5是表示肿瘤体积的经时变化的图；图6是表示核酸递送用组合物的血中滞留性的图7 (a) (d)均是表示肿瘤组织中的Venus的表达状况的CLSM (共聚焦激光显微镜)照片，具体而言，图7(a)为对照、图7(b)为B/H比100%、图7(c)为B/H比70%、图7(d)为B/H比50%的结果；图8 (a)及(b)是表示肿瘤组织的sFlt-1的表达状况的CLSM照片，图8 (a)为对照、图8 (b)为B/H比70%的结果；图9 (a)是免疫染色后的肿瘤组织的血管内皮细胞的CLSM照片，图9 (b)是表示通过图9(a)的图像解析求出的血管密度的图；附图说明图10是表示组合物的经肺给药时的转染效率和B/H比的关系的图；图11 (a) (d)均是表示肺组织的免疫染色照片，具体而言，图11 (a) 为B/H比100%、图11(b)为B/H比70%、图11(c)为B/H比50%、图11(d)为对照的结果；图12(a) (d)均为表示mRNA的表达量的图，具体而言，图12(a)为IL_6、图12 (b)为 TNF- a、图 12 (c)为 Cox_2、图 12 (d)为 IL-10 的 mRNA 的 mRNA 的表达量。具体实施例方式根据本专利技术，可提供一种组合物(本专利技术的核酸递送用组合物)，其用于向靶细胞或组织递送核酸，包含后述的特定的嵌段共聚物及阳离子聚合物以及核酸，同时嵌段共聚物和阳离子聚合物的比率在后述的特定的范围内。根据本申请专利技术人的研究，通过以后述的B/H比满足特定范围的比值的方式使用后述特定的嵌段共聚物和阳离子聚合物，可以与由嵌段共聚物单独构成的PIC胶束型核酸递送系统(专利文献I等)同等程度地抑制对于动物细胞(特别是哺乳类细胞)的毒性使其较低，同时可以与阳离子均聚物单独构成的核酸递送系统(专利文献2等)同等程度地改善核酸导入效率。即，根据本专利技术，可提供一种只是兼具现有的嵌段共聚物单独构成的核酸递送系统及阳离子均聚物单独构成的核酸递送系统两者的优点的核酸递送用组合物。这种效果无法由涉及现有的核酸递送系统的见解的简单拼凑进行预测，而是相乘的效果。另外，根据本专利技术，也可提供一种组合物(本专利技术的载体组合物)，其作为向靶细胞或组织递送核酸的载体，包含后述特定的嵌段共聚物本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：片冈一则，石井武彦，长田健介，陈麒先，位高启史，内田智士，
申请(专利权)人：国立大学法人东京大学，
类型：
国别省市：
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