解脲脲原体和微小脲原体的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种解脲脲原体和微小脲原体的检测方法，属于微孔反应板的检测技术。本发明专利技术是在包被有Uu和Up特异性探针的DNA-BINDING96孔测定板微孔内，分别加入经PCR扩增后热变性处理的临床样本，另外设立分别加入Uu、Up血清型标准株PCR扩增后热变性处理的阳性对照孔；经温箱杂交后洗板，拍干；每孔加入链亲和素辣根过氧化物酶结合物，后经洗板，晾干；每孔加入显色底物A、B，混匀后暗处显色，最后加入终止液，以颜色变化判断结果。本发明专利技术不仅解决了以液体培养基颜色改变判断阳性结果出现假阳性的问题，还能准确地进行Uu和Up的鉴别，提高了检测的敏感度，同时也实现了高通量的检测，可广泛用于临床筛查。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微孔反应板的检测技术，具体是一种解脲脲原体(Ureaplasmaurealyticum, Uu)和微小脲原体(Ureaplasma parvum, Up)的检测方法。
技术介绍
支原体(Mycoplasma)是一类介于细菌和病毒之间，没有细胞壁，能通过细菌滤器，能在人工培养基上生长繁殖的最小原核生物 。支原体归属于柔膜体纲，支原体目，支原体科。支原体科分为支原体，血虫体，血巴尔通体和脲原体4个属。其中，多项研究证明脲原体属的解脲脲原体与女性泌尿生殖道的非淋菌性尿道炎、流产、早产、低体重儿等密切相关。Janet等于1984年报道金属锰离子对Uu有抑制作用。ImM锰离子不仅抑制解脲脲原体在液体培养基中的生长或减少其生长比例，同时也改变其菌落形态和细胞的超微结构。然而这种抑制效应是独立的而且具有种特异性，正是由于这种差别，Janet把解脲脲原体划分为两种生物群即 parvum群(Ureaplasma parvum, Up)和urealyticum群(Ureaplasmaurealyticum, Uu)(对于parvum群,猛离子对其生长的抑制是短暂的而对于urealytic本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种解脲脲原体和微小脲原体的检测方法，其是按以下步骤进行的：①.在分别包被有Uu和Up特异性探针的DNA?BINDING96孔测定板微孔内，分别加入20μl经PCR扩增后热变性处理的临床样本；另将分别包被有Uu和Up特异性探针的DNA?BINDING96孔测定板4个阳性对照孔内，分别加入经PCR扩增后热变性处理的Uu血清型8标准株产物和Up血清型3标准株产物各20μl；上述各孔分别加180μl杂交液混匀，65?℃温箱杂交60min，弃液后，用0.1%SDS洗液Ⅱ、TBST洗板，弃液拍干；????②.每孔加入链亲和素辣根过氧化物酶∶封闭液1∶1000稀释的混合物50μl?,室温放置30分钟，用2...

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘运德，王蓉，李雪，张楠，谷亚军，鲍会静，齐新，李建，
申请(专利权)人：天津医科大学，
类型：发明
国别省市：