同步检测沙眼衣原体和细小脲原体的荧光定量PCR试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种快速同步检测沙眼衣原体和细小脲原体荧光定量ＰＣＲ试剂盒，涉及一种性传播疾病病原体基因检测技术，适用于沙眼衣原体和细小脲原体快速同步定性定量检测。本发明专利技术由ＤＮＡ裂解液、荧光定量ＰＣＲ反应液、标准阳性模板ｐＵ－ＵＰ、标准阳性模板ｐＵ－ＣＴ、阴性质控标准品组成；荧光定量ＰＣＲ反应液含有沙眼衣原体特异性引物对和荧光探针，以及细小脲原体特异性引物对和荧光探针。本发明专利技术特异性好，灵敏度高，定量精确，快速简便，可重复性高，可同步检测沙眼衣原体和细小脲原体，并可替代传统的培养法和ＥＬＩＳＡ（酶联免疫吸附试验）诊断方法。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种同步检测沙眼衣原体和细小脲原体荧光定量ＰＣＲ试剂盒，其特征在于：由ＤＮＡ裂解液、荧光定量ＰＣＲ反应液、标准阳性模板ｐＵ－ＵＰ、标准阳性模板ｐＵ－ＣＴ、阴性质控标准品组成；荧光定量ＰＣＲ反应液含有沙眼衣原体特异性引物对和荧光探针， 以及细小脲原体特异性引物对和荧光探针；①ＵＰ正向引物为５′－ＣＡＴＴＧＡＴＧＴＴＧＣＡＣＡＡＧＧＡＧＡＡＡ－３′，反向引物为５′－ＴＴＡＧＣＡＣＣＡＡＣＡＴＡＡＧＧＡＧＣＴＡＡＡＴＣ－３′；荧光探针序列为５′ －ＴＴＧＡＣＣＡＣＣＣＴＴＡＣＧＡＧ－３′；荧光探针５′端标记报告荧光基团ＨＥＸ，３′端标记不发光的淬灭基团标记，并连接小型凹槽结合物－ＭＧＢ基团，可以大大提高探针的退火温度，标准阳性模板ｐＵ－ＵＰ是含有细小脲原体高度保守基因－脲酶 基因的１１１个碱基对的核苷酸片段构成的ｐＵＣｍ－Ｔ载体，该载体在大肠杆菌ＤＨ５α中增殖；②ＣＴ正向引物为５′－ＴＴＣＡＧＴＴＧＧＧＣＣＡＧＡＴＣＡＴＧ－３′，反向引物为５′－ＣＴＣＴＴＣＡＴＣＧＧＴＧＧＣＴＡＡＴＧＴ ＡＴＡＡＡ－３′；荧光探针序列为５′－ＡＧＧＣＴＣＧＴＣＣＴＧＡＣＴＣＡＴＧＣＡＴＴＴＣＧ－３′；荧光探针５′端标记ＦＡＭ，３′端标记ＴＡＭＲＡ基团，标准阳性模板ｐＵ－ＣＴ是含有沙眼衣原体高度保守基因ｔｒｐ基因７３个碱基对的 核苷酸片段构成的ｐＵＣｍ－Ｔ载体，该载体在大肠杆菌ＤＨ５α中增殖；所述的ＰＣＲ即聚合酶链式反应，所述的ＵＰ即细小脲原体，所述的ＣＴ即沙眼衣原体。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王业富，曹轩，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]