本发明专利技术涉及基于p38MAP激酶抑制剂在和细胞生长因子的新颖药物组合物，其制法及其用于治疗辐射、化学毒物诱导骨髓抑制疾病中的用途。通过现代药理学实验证明，小鼠在受照后注射p38抑制剂与G-CSF，可对化学毒物、辐射诱导的骨髓抑制具有一定的缓解作用，提示该药物组合物可用于治疗化学毒物、辐射诱导骨髓的损伤。对于放疗患者，进行p38抑制剂与细胞因子联合治疗，有利于保护骨髓细胞功能，缓解骨髓长期抑制。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基于细胞生长因子及P38激酶抑制剂的新颖药物组合物，其制法及其用于防治辐射、化学毒物诱导骨髓抑制疾病中的用途。
技术介绍
P38丝裂原活化激酶(P38MAPK，p38)通路是一种应激反应通路，它可被不同的外部与细胞内刺激所激活，这些压力包括渗透压，热休克，不同毒素，UV,辐射，活性氧，细胞因子，端粒缺失，DNA损伤等。P38MAPK的激活与级联反应P38MAPK的激酶反应信息传递为细胞受到刺激后，通过某种中间环节使MAPKKK活化，其转而激活MAPKK，后者通过双位点磷酸化调控P38MAPK的活性。 如同其它丝裂原活化激酶，p38 MAPK通路可被MAPK激酶激酶类所激活，其中最主要的两种为MKK3和MKK6。此外MKK4在一些细胞中对p38的激活也有一些辅助作用。P38MAPK可被细胞外多种刺激激活，主要原因在于其上游MKK3可被多种刺激激活。研究发现，TAKI, ASK1/MAPKKK5, DLK/MUK/ZPK 和 MEKK4 等均能激活 MKK3。此外，Rho 家族的 Racl和Cdc42等也能激活p38MAPK上游通路。p38 MAPK通路激活后，其下游靶点也分布广泛，有转录因子如p53，ATF1/2/6，MEF2A/C, SAP I, STATl，Gaddl53, Max 等，还有蛋白激酶 MSKl，MSK2, MNK1，MNK2，MK2, MK3 和MK5等。P38MAPK通路对其下游的激活，会引发细胞产生炎症或免疫反应，或者导致细胞周期停滞，衰老，凋亡等。近年，Reinhardt等人发现除经典的ATM/Chk2及ATR/Chkl通路外，P38MAPK/MK2复合体也是ATM/ATR下游因子，并与Chkl，Chk2平行作用于检验点。在造血系统中，p38MAPK通路在多个发育过程中占据重要地位。如ρ38 α (-/-)缺陷型小鼠会在胚胎期Ε10. 5-Ε12. 5间死亡。在造血细胞中，Ρ38ΜΑΡΚ通路可被各类细胞因子如造血因子ΕΡ0，骨髓抑制因子IFN-a，IFN-β，TGF-β和TNF-α等激活。通过对红细胞分化过程中Ρ38四种亚型的mRNA表达分析，发现ρ38 α和p38 y mRNA在造血祖细胞早期及红细胞晚期均表达，而P38 δ mRNA仅在红细胞分化后期有表达。与之相反的是ρ38 β在造血祖细胞早期很少表达，在红细胞晚期不表达。这说明Ρ38ΜΑΡΚ通路参与红细胞生成调节。抑制Ρ38ΜΑΡΚ通路能加强中性白细胞发育，但持续性激活Ρ38ΜΑΡΚ通路会彻底抑制中性白细胞分化。这说明Ρ38ΜΑΡΚ通路还参与了髓系祖细胞分化与扩增的调节。近年来随着研究的深入，逐步发现ρ38ΜΑΡΚ在造血干/祖细胞衰老和凋亡中具有重要作用。研究发现抑制Ρ38 MAPK通路可能治疗多发性骨髓瘤。而利用Atm缺陷小鼠发现小鼠HSC积聚的活性氧会导致造血干细胞过度增殖分化最终衰竭，其中Ρ38ΜΑΡΚ通路被激活。随后进一步研究发现，在活性氧诱导衰老的造血干细胞中，ρ38, ρ16, ρ19表达升高。对造血干细胞加入 BSO(Buthionine sulfoximine)、NAC(N-acetyl-L-cysteine)或者P38MAPK抑制剂(SB203580)均能降低ROS诱导的pl6和pl9表达，并且使造血干细胞功能有所恢复。而在ROS较低的造血干细胞中，其功能较强，并且pl6基本未表达，p38表达较低。这些研究均提示P38MAPK通路可作为治疗靶点。粒细胞集落刺激因子(granulocytecolony stimulating factor, G-CSF)是一种促进造血细胞增殖的多肽因子，通过与靶细胞表面受体结合发挥其生物学效应。G-CSF作用于中性细胞的前体细胞，促进其分化、增殖并促进骨髓中成熟的中性粒细胞释放，增强中性粒细胞的功能。G-CSF除了能够提高中性粒细胞的水平外，还能增强外周血中性粒细胞的吞噬、杀伤及趋化功能，从而减少感染的发生率。但有实验证实，G-CSF可能导致造血干细胞功能衰竭，这严重限制了 G-CSF的临床应用。本专利技术人在实验中首次发现p38MAP激酶抑制剂及联合细胞生长因子在防治骨髓抑制中具有明显的治疗作用。特别是防治辐射诱导骨髓抑制更加明显，基于上述的发现经过进一步实验完成本专利技术
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是寻找能够有效保护各种因素诱导骨髓细胞和功能的损伤得到防护和治疗的药物。因此，本专利技术的目的在于提供P38MAP激酶抑制剂联合细胞生长因子在制备预防或治疗辐射、化学毒物诱导骨髓抑制药物中的应用，降低化疗所带来的毒副作用。附图说明 图1ρ38抑制剂联合G-CSF对辐射暴露小鼠骨髓细胞CAFC能力的影响。小鼠照射剂量为4Gy。照射后分别给予生理盐水、SB(15mg/kg，隔日给药，5次),G-CSF (lug/次，2次/日，连续6次)，SB+G-CSF,腹腔注射，每处理组5只。照射10天后，取骨髓细胞，进行CAFC能力检测。结果表明SB及联合用药组在第四周对小鼠的CAFC能力有显著保护作用。图2p38抑制剂联合G-CSF对辐射暴露小鼠存活率的影响(7. 2Gy)。雄性C57小鼠75只，分为5组，照射后分别给予生理盐水、SB (15mg/kg,隔日给药，5次)、G-CSF (lug/次，2次/日，连续6次)，SB+G-CSF,腹腔注射，每处理组15只，观察30天，小鼠存活率得到显著提高。具体实施例方式一种p38MAP激酶抑制剂联合细胞生长因子在制备预防辐射、化学毒物诱导骨髓抑制药物中的应用。所述的辐射诱导骨髓损伤，包括接受放射治疗的肿瘤患者、辐射暴露的工作人员、意外辐射性同位素暴露的人员。另一个优选的实施方式是p38MAP激酶抑制剂联合细胞生长因子在制备治疗化学毒物诱导的骨髓型死亡药物中的应用。其中所述化学毒物诱导的骨髓抑制，包括接受化学治疗的肿瘤患者、抑制骨髓的化学毒物接触的工作人员及意外暴露的人员。本专利技术所述的骨髓抑制(骨髓抑制性死亡)，包括外周血白细胞下降、骨髓增生不良或再生障碍性贫血。本专利技术对辐射诱导骨髓抑制的实验内容主要包括以下几个方面I. p38MAP激酶抑制剂联合G-CSF可显著提高全身照射的小鼠生存率2. p38MAP激酶抑制剂联合G-CSF对接收全身照射的小鼠骨髓细胞功能损伤有保护作用下面通过药效学实验进一步说明p38抑制剂联合G-CSF在预防或治疗辐射、化学毒物诱导骨髓抑制作用的药理实验情况。I、骨髓单个核细胞分离无菌取小鼠股骨，含2% FCS的Hanks液冲洗骨髓，Ficoll分离，制备单个核细胞悬液，洗涤，计数调整所需的细胞浓度后待用。2、饲养层细胞的培养无菌取小鼠骨髓细胞，计数后调整到一定浓度，加于96孔板，每孔200ul，放于33度二氧化碳培养箱中培养，每周换液一次。一周后照射15Gy,再培养一周后种入细胞。3、CAFC能力测定无菌取小鼠骨髓细胞，计数后用MDM培养基调整到一定浓度，取部分装于14ml的·falcon管。对照组需细胞3. 0375 X 106个细胞，照射组上调三倍，共需细胞9. 1125X106个细胞。对照组配置浓度为40. 5X 104/ml的细胞悬液7. 5ml，照射组配置浓度为12. 15X105/ml的细本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种药物组合物，其特征在于其中包含一或多种细胞生长因子(A)与一或多种p38激酶抑制剂(B)组合，其可任选以其对应异构体、对应异构体的混合物形式或其消旋物形式，可任选以其溶剂合物或水合物形式，及可任选并用药学上可接受的赋形剂。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李德冠，孟爱民，王月英，吴红英，路璐，张恒，王小春，张俊伶，常建辉，翟志斌，杜利清，王彦，褚丽萍，
申请(专利权)人：中国医学科学院放射医学研究所，
类型：发明
国别省市：
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