本发明专利技术提供了一种枯草芽孢杆菌制剂及其制备方法，该制剂的制备方法是将枯草芽孢杆菌种液接入发酵培养基中进行培养，得到发酵液。然后向发酵液中加入沸石石粉，混合均匀后进行喷雾干燥，得到所述枯草芽孢杆菌制剂。所述发酵培养基的配方以质量体积比计为：玉米粉1.0-2.0%，低温豆粉1.0-2.0%，消泡剂0.2-0.5%，其余为水。本发明专利技术所述枯草芽孢杆菌制剂具有活菌浓度高、芽孢率高的优点，其制备方法操作简单、成本低廉。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于农业生物
，具体地说，涉及。
技术介绍
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一种有益的根际微生物。其生长代谢过程中，可生产多种蛋白质、氨基酸、维生素等营养物质。将其制备成活菌制剂添加至饲料中，不仅能促进动物生长，还能减少动物肠道内的有害菌，从而降低动物的发病率。现有的饲用枯草芽孢杆菌制剂，普遍存在活菌浓度不够高、稳定性较差的缺点。中 国专利申请201010604530. 9公开了，该方法采用液体深层发酵制备含有枯草芽孢杆菌的发酵液，然后再将发酵液制备成液体制剂或经闪蒸后制备成粉体制剂。该方法虽然在一定程度上提高了枯草芽孢杆菌制剂的活菌浓度和稳定性，但仍存在诸多不足之处，主要包括1、该方法并未对制剂中枯草芽孢杆菌的芽孢率进行考察，而芽孢率直接影响菌体的保存和复活，是影响制剂质量和稳定性的重要因素；2、该方法采用的发酵培养基包含氮源、碳源、金属离子等多种成分，其配制过程复杂，成本高；3、该方法发酵时需采用压力容器，对设备要求高，成本高。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种生产成本低、菌体转化率高的枯草芽孢杆菌制剂及其制备方法。为实现本专利技术目的，本专利技术所提供的枯草芽孢杆菌制剂的制备方法，包括以下步骤 a、将枯草芽孢杆菌种液接种至发酵培养基，接种量为发酵培养基质量的O. 2-0. 5%，在30-37°C、搅拌转速为200-300rpm、通气体积比1:0. 5-0. 8的条件下，发酵10_18h，得到发酵液； 所述发酵培养基，其配方以质量体积比计为玉米粉I. 0-2. 0%，低温豆粉I. 0-2. 0%，消泡剂O. 2-0. 5%，其余为水； 上述枯草芽孢杆菌种液是按照常规方法，由市售枯草芽孢杆菌菌株扩大培养得到的。上述低温豆粉是指优质大豆在不经过加热的条件下，将大豆所含油脂压榨完毕后得到脱油的豆饼，豆饼再经干燥研磨处理得到的固定细度的粉末。b、向a步骤所得发酵液中添加沸石粉，添加量为发酵液质量的2-6%，搅拌均匀后喷雾干燥，得到枯草芽孢杆菌干粉。本专利技术的发酵培养基采用玉米粉、低温豆粉等；上述原料廉价易得，生产成本低。加入消泡剂后，能有效减少发酵培养基中的泡沫，有利于发酵培养基的搅拌和通气，从而有利于枯草芽孢杆菌的生长和芽孢化；所得发酵液中枯草芽孢杆菌的活菌浓度高达I.01 X 109cfu/mL以上。向发酵液中添加沸石粉，能够对枯草芽孢杆菌的芽孢起到良好的吸附作用，避免芽孢在后续喷雾干燥过程中受到损伤；所得枯草芽孢杆菌干粉制剂中活菌浓度高达4. O X 108cfu/g以上，芽孢率高达98%以上。采用本专利技术的技术方案，无需添加Mg2+、Mn2+Xu2+等金属离子即可得到高芽孢率的枯草芽孢杆菌干粉制剂。该干粉制剂的高芽孢率保障了其储运过程中的稳定性和饲喂后的繁殖性能。本专利技术的制备方法，还具有操作简单的优点；其发酵步骤在常压下即可进行，对设备要求低。本专利技术a步骤中的发酵培养基在接入枯草芽孢杆菌种液之前，最好于115-125 下灭菌20-30min，然后冷却至常温备用。发酵培养基的灭菌处理可有效避免杂菌污染，提高所得发酵液中枯草芽孢杆菌的纯度。本专利技术所述消泡剂可以是聚醚型消泡剂、硅油型消泡剂、有机硅消泡剂中的任意一种，优选聚醚消泡剂。本专利技术所述喷雾干燥，其工艺条件优选进风温度180-200°c、出风温度70-100°C、进料速度3-5 L/h。在该工艺条件下，干燥速率较快，同时，枯草芽孢杆菌的芽孢损伤较小，所得枯草芽孢杆菌干粉粒度均匀。 本专利技术还提供了一种按照上述方法制备的枯草芽孢杆菌干粉。上述枯草芽孢杆菌干粉中，枯草芽孢杆菌活菌浓度> 5.3X108cfu/g，芽孢率彡 98%ο本专利技术所述枯草芽孢杆菌干粉具有活菌浓度高、芽孢率高的特点，从而使其具有稳定性强、繁殖性好的优势；本专利技术所述枯草芽孢杆菌干粉的制备方法，操作简便，成本低廉，效果优良，具有良好的经济效益和推广价值。具体实施例方式下面用具体实施例来进一步说明本专利技术的内容，但并不以任何方式意味着对本专利技术进行限制。下述实施例所采用的枯草芽孢杆菌菌株购自中国农业微生物菌种保藏管理中心，编号为 ACCC01430。实施例I a、枯草芽孢杆菌种液的制备将上述枯草芽孢杆菌菌株在无菌环境下接入IL三角玻璃摇瓶LB培养基中培养12-14h，培养基装量为20%，全程培养温度为30-32°C，培养摇床转数为 200-220rpm。发酵培养基的制备将I. Okg玉米粉、I. Okg低温豆粉、O. 2kg的聚醚消泡剂混合后，加水至100L,混合均勻后于115_125°C下灭菌20-30min,冷却至常温备用。枯草芽孢杆菌发酵取上述枯草芽孢杆菌种液O. 2kg接种至上述发酵培养基进行发酵，控制温度为30-32°C、搅拌转速为200-220rpm、通气体积比为1:0. 5，发酵10h，得到发酵液，发酵过程中培养基的PH值自然变化，采用平板稀释法测定发酵液中的枯草芽孢杆菌活菌浓度，结果为I. 01 X 109cfu/mL ； b、喷雾干燥向a步骤所得发酵液中添加沸石粉，作为菌体附着剂，沸石粉添加量为发酵液质量的2%，搅拌O. 5h后，进行喷雾干燥处理。喷雾干燥设备的进风温度为180-190°C,出风温度为70-80°C，进料速度为3L/h，得到枯草芽孢杆菌干粉。经平板稀释法测定其中的枯草芽孢杆菌活菌浓度，结果为5. 3X108cfu/g ;采用结晶紫染色法，于油镜下观察，测得其芽孢率为98%。结果表明本专利技术方法所得枯草芽孢杆菌制剂活菌浓度高、芽孢率高。实施例2 a、发酵培养基的制备将2.Okg玉米粉、2. Okg低温豆粉、O. 5kg的聚醚消泡剂混合后，加水至100L，混合均匀后于115-125°C下灭菌20_30min，冷却至常温备用。枯草芽孢杆菌发酵取实施例I中制备的枯草芽孢杆菌种液O. 5kg接种至上述发酵培养基进行发酵，控制温度为35-37°C、搅拌转速为280-300rpm、通气体积比为1:0. 8，发酵18h，得到发酵液，发酵过程中培养基的pH值自然变化，采用平板稀释法测定发酵液中的枯草芽孢杆菌活菌浓度，结果为I. 17X109cfu/mL ； b、喷雾干燥向a步骤所得发酵液中添加沸石石粉，作为菌体附着剂，沸石石粉添加量为发酵液质量的6%，搅拌Ih后，进行喷雾干燥处理。喷雾干燥设备的进风温度为190-200°C，出风温度为90-100°C，进料速度为5L/h，得到枯草芽孢杆菌干粉。经平板稀释法测定其中的枯草芽孢杆菌活菌浓度，结果为5. 5X 108cfu/g ;采用结晶紫染色法，于油镜下观察，测得其芽孢率为98%。结果表明本专利技术方法所得枯草芽孢杆菌制剂活菌浓度高、芽孢率高。实施例3 a、发酵培养基的制备将I.5kg玉米粉、I. 8kg低温豆粉、O. 3kg的聚醚消泡剂混合后，加水至100L，混合均匀后于115-125°C下灭菌20_30min，冷却至常温备用。枯草芽孢杆菌发酵取实施例I中制备的枯草芽孢杆菌种液O. 3kg接种至上述发酵培养基进行发酵，控制温度为32-35°C、搅拌转速为220-280rpm、通气体积比为1:0. 6，发酵15h，得到发酵液，发酵过程中培养基的pH值自然变化，采用平板稀释法测定发酵本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种枯草芽孢杆菌制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：a、将枯草芽孢杆菌种液接种至发酵培养基，接种量为发酵培养基质量的0.2？0.5%，在30？37℃、搅拌转速为200？300rpm、通气体积比为1:0.5？0.8的条件下，发酵10？18h，得到发酵液；所述发酵培养基，其配方以质量体积比计为：玉米粉1.0？2.0%，低温豆粉1.0？2.0%，消泡剂0.2？0.5%，其余为水；b、向a步骤所得发酵液中添加沸石石粉，添加量为发酵液质量的2？6%，搅拌均匀后喷雾干燥，得到枯草芽孢杆菌干粉。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘磊，谷新华，袁昉，
申请(专利权)人：河北圣雪大成制药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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