一种10-羟基喜树碱纳米微球及其制备方法技术

本发明专利技术公开一种10-羟基喜树碱纳米微球及其制备方法。所述10-羟基喜树碱纳米微球的制备方法为采用由乙醇或甲醇与二氯甲烷组成的二元溶剂将10-羟基喜树碱纳米微球及PLGA溶解，然后与聚乙烯醇溶液混合，乳化，分散，离心，冷冻干燥得到。采用本发明专利技术的可降解聚合物载10-羟基喜树碱纳米微球的制备方法，可以极大提高羟基喜树碱和聚合物浓度的适用范围，使用有机溶剂量少，微球的载药率和包封率高，可实现自动化和规模化生产；所述制备的10-羟基喜树碱纳米微球，在模拟磷酸盐缓冲溶液条件下可持续释放10天以上，大大延长了10-羟基喜树碱在体内的作用时间，并且活性的内酯环结构得到较好的保护，几乎100%都保持内酯环结构。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医学材料领域，具体涉及。
技术介绍
喜树碱是从我国特有的珙桐科植物喜树中提取得到的微量生物碱。10-羟基喜树碱是喜树碱分子的第10位碳原子的氢被羟基取代，因此可认为是喜树碱的天然衍生物。10-羟基喜树碱抗瘤谱广，其抗癌作用与抗代谢药及烷化剂不同。研究表明，10-羟基喜树碱可选择性的抑制拓扑异构酶，因而干扰DNA的复制，造成不可逆的DNA链破坏，从而导致细胞死亡。此外，动物实验证明，10-羟基喜树碱作用于S期，为细胞周期特异性药物。对S期的作用较Gl期和G2期明显。对GO期细胞无作用。在较高浓度时对核分裂有抑制作用。阻止细胞进入分裂期。10-羟基喜树碱与其它常用的抗癌药无交叉耐药，因此对耐药肿瘤也有较好的治疗作用。10-羟基喜树碱易溶于二甲亚砜(DMS0)，微溶于甲醇、氯仿、吡啶等有机溶剂，不溶于水，其结构E环上的α-羟基内酯环是必需的活性基团，但该部位在碱性条件下会迅速开环，使得疗效降低，而且毒性增强。而目前我国临床上所使用的10-羟基喜树碱的多为注射剂，将其与氢氧化钠反应成盐使之溶解，其结构中E环上的内酯环被打开，使得临床应用面临如下诸多问题(I)注射剂型为HCPT钠盐或开环形式，其代谢较快，半衰期短；(2)HCPT钠盐注射液不稳定，当pH大于7.4时易水解失活，见光也易分解；(3) 95%以上的10-羟基喜树碱在体内与血清蛋白结合失效，且结合后毒副作用更强。为了提高10-羟基喜树碱的临床疗效，增强水溶性，增加生物利用度，目前对10-羟基喜树碱的研究多集中在改变溶剂体系，剂型以及载药系统的改造等方面。其中，纳米微球载药系统充分显示出其独特的优势(I)可以增强药效的同时减少不良反应；(2)使药物溶解度增加，粘附性提高，表面积增大，从而改善吸收，提高生物利用度；(3)可以将药物被动靶向输送到肝、脾、肺、骨髓、淋巴等部位，或经修饰后达到主动靶向输送的目的，从而改变药物的体内分布，提高靶部位的药物浓度；(4)调节药物的体内循环时间和控制药物分子的释放速度，达到缓释控释效果，使药物作用时间延长。现有技术中，已经有关于羟基喜树碱纳米微球的研究。如中国专利(CN1362060A)和(CN1363394A)分别公开了羟基喜树碱葡聚糖纳米粒和聚乳酸纳米粒的制备方法，其中都是通过加碱调节水溶液PH值至7. 5-12，然后溶解羟基喜树碱，再通过超声波处理形成载药纳米粒。其为了使羟基喜树碱能够溶解于表面活性剂的水溶液中将PH调为碱性，使羟基喜树碱E环的内酯环水解成为羧酸盐结构，从而致使所包封的药物失活，必然会降低其治疗效果，且增加毒副作用。中国专利(CN101219144A)公开了一种羟基喜树碱长循环纳米粒的制备方法，其通过加入载体材料、表面活性剂和膜修饰材料，采用剪切的方式制备纳米粒。由于羟基喜树碱的溶解性极差，仅溶于个别有机溶剂，因此制备过程中必须使用大量单一类型的有机溶剂才能溶解少量羟基喜树碱(如IOmg羟基喜树碱溶于8(Tl00ml有机溶剂中)，因此增加了溶剂残留的可能性且易造成污染和浪费。此外，剪切乳化的方式机械应力作用过强，易破坏某些性质不稳定的药物。微球的制备方法有很多，依据形成机理的不同可分为两种，即聚合反应法和聚合材料分散法。其中，聚合材料分散法又分为纳米沉淀法、盐析法、乳化-溶剂扩散法和溶剂挥发法等。前三种方法的有机相所用溶剂为与水完全互溶或部分互溶的有机溶剂(如丙酮、乙腈和乙醇等)；在制备过程中，有机相-水相界面发生剧烈的相变，有机溶剂以高于一定临界值的速度迅速向水相扩散，并在界面形成局部湍流，载体材料则在界面因有机溶剂的脱除而迅速沉积成纳米粒。这些方法所得微球的载药量和包封率通常较低。溶剂挥发法指采用与水完全不混溶的有机溶剂(如二氯甲烷、氯仿等)，通过使用均质或是超声等机械分散力的方式制备纳米级液体，然后挥发除去溶剂形成固体纳米粒。溶剂挥发法制备纳米粒需要大量的有机溶剂不利于环保，且粒径分布较宽。并且，常规的溶剂挥发法的包封率仅在2(Γ40%或更低的水平，载药量也较低，对给药量造成限制。 因此，寻找一种更好的方法制备10-羟基喜树碱纳米微球具有实际意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种10-羟基喜树碱纳米微球的制备方法。该方法针对10-羟基喜树碱脂难溶、水不溶、碱性易开环失活的缺陷，通过使用混合溶剂将10-羟基喜树碱包裹于可降解聚合物(聚乳酸一羟基乙酸共聚物)制成微球，从而改善10-羟基喜树碱的疏水性质，避免开环，延长10-羟基喜树碱在体内的停留和作用时间，提高生物利用度，增强靶向作用，进而为10-羟基喜树碱的各类研究和临床应用奠定基础。该方法可以极大提高羟基喜树碱和聚合物浓度的适用范围，且仅使用少量有机溶齐 ，产率高，可实现自动化和规模化生产。本专利技术的另一目的在于提供所述制备方法制得的10-羟基喜树碱纳米微球。本专利技术的上述目的通过如下技术方案予以实现 一种10-羟基喜树碱纳米微球的制备方法，采用如下按重量份数计算的原料 10-羟基喜树碱f 20份； 聚乙烯醇3 10份； 聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA 1(Γ100份； 具体包括如下步骤 (1)选取10-羟基喜树碱和聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA，按每I毫克的10-羟基喜树碱，添加O. 25^2晕升的有机溶液使其充分溶解； 所述有机溶剂为由乙醇或甲醇与二氯甲烷组成的二元溶剂；所述二元溶剂中，乙醇或甲醇与二氯甲烷的体积比为1:3飞； (2)将步骤(I)所得有机混合液滴加至聚乙烯醇浓度为O.5飞质量％的水溶液中，得到乳液；有机混合液与水溶液的体积比为1:2、； (3)将步骤(2)所得乳液在超声条件下进行乳化； (4)将超声乳化后的乳液分散至聚乙烯醇浓度为O.f O. 5质量％的水溶液中，进行搅拌或减压蒸馏，使有机溶剂挥发完全；(5)待有机溶剂挥发完全后，通过低温离心收集PLGA载10-羟基喜树碱纳米微球； (6)将步骤(5)收集的PLGA载10-羟基喜树碱纳米微球加入冻干保护剂，冷冻干燥，得到所述10-羟基喜树碱纳米微球。专利技术人经过大量的实验发现，要解决10-羟基喜树碱纳米微球制备工艺的问题，首先必须考虑其活性结构的溶解性问题。因此专利技术人经过各种单一溶剂的筛选以及多种溶剂的组合试验比较，并通过涡旋、超声分散等方式提高药物溶解度，最终找出最佳组合与最佳比例的二元混合溶剂，通过结合乳化-溶剂扩散和溶剂挥发法将10-羟基喜树碱包裹在可降解的生物材料中制成纳米微球药物缓释体系，该混合溶剂能在提高药物溶解度的同时很好的保证制得的纳米粒各项指标参数满足要求。作为一种更优选方案，所述二元混合溶剂更优选为甲醇与二氯甲烷体积比为1:4飞或乙醇与二氯甲烷体积比为1:3飞的混合溶剂。作为一种更优选方案，步骤(I)中，所述有机溶剂更优选为乙醇与二氯甲烷体积比为1:3飞的二元溶剂。经过专利技术人的反复尝试，发现乙醇混合的二元溶剂比以甲醇混合的二元溶剂在载药量和包封率在同等条件下均好一些。作为一种最优选方案，步骤(I)中，所述有机溶剂最优选为乙醇与二氯甲烷体积比为1:4的二元溶剂。专利技术人发现，在这实验条件的范围内的这一比例下，所得到的纳米微球的载药量和包封率达到最高。作为一种优选方案，步骤(3)中，所述超声的条件为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种10？羟基喜树碱纳米微球的制备方法，其特征在于，采用如下按重量份数计算的原料：10？羟基喜树碱？？？？？？？？？？？？？？？？？？1~20份；聚乙烯醇？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？3~10份；聚乳酸？羟基乙酸共聚物PLGA？？？？？10~100份；？？？？？？？？？？？？？？？？具体包括如下步骤：（1）选取10？羟基喜树碱和聚乳酸？羟基乙酸共聚物PLGA，按每1毫克的10？羟基喜树碱，添加0.25~2毫升的有机溶液使其充分溶解；所述有机溶剂为由乙醇或甲醇与二氯甲烷组成的二元溶剂；所述二元溶剂中，乙醇或甲醇与二氯甲烷的体积比为1:3~5；（2）将步骤（1）所得有机混合液滴加至聚乙烯醇浓度为0.5~5质量%的水溶液中，得到乳液；有机混合液与水溶液的体积比为1:2~5；（3）将步骤（2）所得乳液在超声条件下进行乳化；（4）将超声乳化后的乳液分散至聚乙烯醇浓度为0.1~0.5质量%的水溶液中，进行搅拌或减压蒸馏，使有机溶剂挥发完全；（5）待有机溶剂挥发完全后，通过低温离心收集PLGA载10？羟基喜树碱纳米微球；（6）将步骤（5）收集的PLGA载10？羟基喜树碱纳米微球加入冻干保护剂，冷冻干燥，得到所述10？羟基喜树碱纳米微球。...

【技术特征摘要】
1.一种10-羟基喜树碱纳米微球的制备方法，其特征在于，采用如下按重量份数计算的原料 10-羟基喜树碱f 20份； 聚乙烯醇3 10份； 聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA 1(Γ100份； 具体包括如下步骤 (1)选取10-羟基喜树碱和聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA，按每I毫克的10-羟基喜树碱，添加O. 25^2晕升的有机溶液使其充分溶解； 所述有机溶剂为由乙醇或甲醇与二氯甲烷组成的二元溶剂；所述二元溶剂中，乙醇或甲醇与二氯甲烷的体积比为1:3 5 ； (2)将步骤(I)所得有机混合液滴加至聚乙烯醇浓度为O.5飞质量％的水溶液中，得到乳液；有机混合液与水溶液的体积比为1:2、； (3)将步骤(2)所得乳液在超声条件下进行乳化； (4)将超声乳化后的乳液分散至聚乙烯醇浓度为O.f O. 5质量％的水溶液中，进行搅拌或减压蒸馏，使有机溶剂挥发完全； (5)待有机溶剂挥发完全后，通过低温离心收集PLGA载10-羟基喜树碱纳米微球； (6)将步骤(5)收集的PLGA载10-羟基喜树碱纳米微球加入冻干保护剂，冷冻干燥，得到所述10-羟基喜树碱纳米微球。2.如权利要求I所述10-羟基喜树碱...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘杰，蒋庆，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：