用于JC病毒抗体的测定制造技术

本公开涉及分析样品中JC病毒抗体的存在的方法和试剂。公开了一种方法，所述方法包括从受试者获得生物样品(例如，血浆、血清、血液、尿或脑脊髓液)，在适于所述样品中的JCV抗体与HPVLP结合的条件下使所述样品接触高度纯化的病毒样颗粒(HPVLP)，和检测所述样品中与HPVLP结合的JCV抗体的水平。在一个实施方案中，确定所述受试者样品中的JCV抗体的水平提供了鉴定受试者的PML风险的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及分析样品中JC病毒抗体的存在的方法和试剂。
技术介绍
进行性多灶性白质脑病(PML)是一种与JC病毒(JCV)接触相关的中枢神经系统 (CNS)的机会性感染，据信JC病毒是一种仅在持续性免疫抑制或免疫调节条件下在人体内致病的多瘤病毒。虽然PML的发展需要存在JCV，但认为PML风险以并未彻底了解的方式与引起病毒致病的多种病毒和宿主有关因子的会聚相关(Major, " Progressive MultifocalLeukoencephalopathy in Patients on Immunomodulatory Therapies " Annu. Rev.Med. 61 :35-47(2010) )。所公布的报道人群中JCV感染流行的研究各种各样。该信息基于各种类型的研究，包括对病毒DNA的PCR分析和JCV抗体的检测。尽管人群中JCV流行，但即使是在有免疫抑制记录的个体中JCV感染也很少导致PML。所公布的有关JCV DNA检测的报告表明所述方法不灵敏并且在评估与JCV接触方面的用途有限，因为在JCV感染的PML患者的血浆、血清或外周血单核细胞中检测到JCVDNA的情况很少并且不一致。抗JCV抗体的检测似乎是更灵敏的JCV感染标志，然而报道的结果是变化的。在1973年，Padgett和Walker公布了使用血细胞凝集抑制(HI)测定报道 JCV 血清阳性率为 65-84% 的研究(Padgett 和 Walker, " Prevalence of antibodiesin human sera agains JC virus,an isolate from a case of progressive multifocalleukoenc印halopathy" J. Infect. Pis. 127 :467-70,1973)。后来使用 HI 测定或 ELISA 的JCV血清阳性率的报道值在33-91%之间变化。这些研究中的可变血清阳性率很可能是由于研究规模和人口统计数据的显著差异，并且可能最重要的是测定方法的差异。因此，期望实现可靠灵敏的确定JCV抗体存在的测定，其可例如用于评估个体是否已接触JCV。专利技术概述本专利技术涉及对经分析证实的灵敏的检测生物流体(例如血清或血浆)中JCV抗体存在的测的开发。因此，本专利技术涉及一种方法，所述方法包括从受试者获得生物样品(例如，血浆、血清、血液、尿或脑脊髓液(CSF));在适于样品中的JCV抗体与HPVLP结合的条件下使所述样品接触高度纯化的病毒样颗粒(HPVLP);检测样品中与HPVLP结合的JCV抗体的水平；和使检测水平与参考相关联，使得所述参考被选择为指示不大于3%的假阴性率并且与样品的其它组分，例如抗其它多瘤病毒(例如，BK病毒(BKV))的抗体的交叉反应性最低。在一些实施方案中，用来自受试者的样品处理源自对照样品或样品集的参考。在一些实施方案中，选择所述参考以使测定的假阴性率不大于1%。在一个实施方案中，纯化HPVLP制剂中至少约10%的HPVLP中的每个HPVLP含有5个以上VPl多肽。在一个实施方案中，纯化HPVLP制剂中至少约15%、约20%、约25%、约30%、约40%、约50%、约60%、约65%、约70%、约80%或约90%的HPVLP中的每个HPVLP含有5个以上VPl多肽。可进行测定，使得HPVLP固定在固体基底上，例如微量滴定板或载玻片上。在一些实施方案中，HPVLP基本上由VPl病毒蛋白组成。HPVLP可进一步包含其它病毒蛋白，例如VP2或VP3的至少一种。HPVLP中的病毒蛋白可经重组得到(例如MADl株VPl)或可为天然存在的病毒蛋白(例如，源自天然存在的来源)。可使用(例如)从目前正用免疫调节药物进行治疗的受试者、考虑采用免疫调节药物进行治疗的受试者或怀疑患有进行性多灶性白质脑病(PML)的受试者获得的生物样品进行所述方法。 在一些方面，测定方法为进一步包括二次确认测定过程的两步法测定，二次确认测定过程包括使来自受试者的一部分生物样品与溶液中的HPVLP接触(用附着在固体基底的HPVLP培育样品之前)，从而提供二次样品；在与初步测定所用条件相同的条件下使二次样品与HPVLP接触；检测二次样品中与HPVLP结合的JCV抗体水平；和比较二次样品中JCV抗体的检测水平和未用可溶性HPVLP预先培育的样品中JCV抗体的水平，使得与未预先培育的样品相比，二次测定样品中的检测水平降低表明样品JCV抗体呈阳性，并且检测水平的变化低于指定百分比表明样品中不存在JCV特异性抗体。本文所述测定可用于测定从未接受用免疫调节剂进行治疗的受试者或先前已接受免疫调节剂，但不再接受用免疫调节剂进行治疗的受试者或目前正在经受用免疫调节剂进行治疗的受试者的JCV抗体的存在。本专利技术描述的测定中对与HPVLP结合的JCV抗体的检测可表明受试者罹患PML的风险增加。对JCV抗体的检测还可表明施用某些治疗剂，例如某些免疫调节剂时，受试者发生不良症状(例如PML发展)的风险增加，从而使受试者不为用这些试剂治疗的候选者。例如，对来自受试者的样品中的JCV抗体的检测可表明受试者不是用抗VLA-4治疗剂(例如那他珠单抗)进行治疗的候选者。在某些实施方案中，对生物样品中的JCV抗体的检测可表明受试者为用免疫调节剂(例如那他珠单抗)进行治疗的候选者，不同的是与不具有可检测JCV抗体的受试者相比，受试者在治疗期间将经受加强的监测。例如，加强的监测可包括观察不良症状，例如可能表明PML发展的症状。本专利技术描述的测定中检测与HPVLP结合的JCV抗体失败可表明受试者为接受用免疫调节剂(例如那他珠单抗)进行治疗的候选者，并且在一个实施方案中，对受试者进一步施用免疫调节剂。可对确定不具有JCV抗体的受试者至少每年再测试一次(例如，至少每3个月、每6个月、每9个月或每12个月一次)，以确定受试者是否已产生了 JCV抗体，这可能表明受试者已感染了 JCV。先前生物样品中没有可检测JCV抗体而随后在生物样品中产生JCV抗体的受试者可停止接受用免疫调节剂进行治疗。在一些实施方案中，先如鉴定为具有JCV抗体的受试者随后可在日后测试并确定不具有JCV抗体。可将这些受试者确定为接受用免疫调节剂(例如那他珠单抗)进行治疗的候选者。在一个实施方案中，可向先前经测试对JCV抗体的存在呈阳性而后来经测试对JCV抗体呈阴性的受试者施用免疫调节剂，并且与从未测试为对JCV抗体呈阳性的受试者相比经受加强的监测，例如监测可能表明PML发展的症状。本专利技术描述的测定可用于治疗患有免疫性疾病或病症(例如多发性硬化(MS)或克罗恩氏病(⑶))的受试者。在一个实施方案中，本文所述的测定经证实可用于MS和⑶患者，如通过显示该测定在受控试验环境(例如临床试验)中可有效检测MS和CD患者的JCV抗体所证实。另一方面，本专利技术涉及一种试剂盒，其包含HPVLP和至少一种用于鉴定样品(例如生物样品)中JCV抗体水平的测定的试剂。在其它方面，本专利技术涉及包含基本上由含有VPl的颗粒组成的HPVLP颗粒的溶液，所述含有VPl的颗粒的尺寸大于VPl五聚体的尺寸，例如含有约5、10、20、30、40、50、60、70 或72个五聚本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：L戈雷利克，KJ西蒙，M萨布拉曼亚姆，MM卢舍，
申请(专利权)人：比奥根艾迪克MA公司，
类型：
国别省市：