欧、美型猪繁殖与综合症病毒抗体鉴别诊断试剂盒的制备方法技术

本发明专利技术提供一种欧、美型猪繁殖与综合症病毒抗体鉴别诊断试剂盒的制备方法，该方法是针对ＰＲＲＳＶ　　ＶＲ－２３３２株的ＯＲＦ７基因中欧、美型毒株的保守表位２５ａａ～３０ａａ，３７ａａ～５２ａａ及５０ａａ～６６ａａ的基因缺失，构建针对美洲型ＰＲＲＳＶＮ蛋白的原核表达载体ｐＧＥＸ－６Ｐ－１－Ｎ；针对欧洲型ＰＲＲＳＶ　　Ｎ蛋白表位２ａａ～１２ａａ、４０ａａ～４６ａａ及６７ａａ～１２８ａａ的氨基酸序列，建立针对欧洲型ＰＲＲＳＶ　　Ｎ蛋白的原核重组表达载体ＰＱＥ３０－Ｎ，重组质粒在大肠杆菌中成功表达，利用表达纯化的北美洲型Ｎ蛋白，制备用于ＰＲＲＳ抗体检测的间接ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒，该抗体试剂盒与ＩＤＥＸＸ试剂盒的符合率均可达到９０％，以纯化的欧洲型蛋白作为包被抗原，优化了欧洲型ＰＲＲＳＶ抗体检测间接ＥＬＩＳＡ方法，为ＰＲＲＳ抗体分型检测打下基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
内的兽病诊断技术，具体是一种欧、美型猪繁殖 与综合症病毒抗体鉴别诊断试剂盒的制备方法。2、
技术介绍
PRRS的发生和流行，已给我国的养猪业造成了相当大的经济损失。但是目 前，对该病的预防与控制仍是世界各国所面临的难题。为了更好地预防和控制 本病的发生和流行，当务之急是要建立一种可靠的、适于大规模诊断与检测PRRS 的方法。PRRS感染常用的诊断方法有细胞培养、RT-PCR。但是，这些诊断方法 在应用中耗时长、工作量大、需要特殊的仪器和设备，远远不能满足当前诊断 PRRS感染的需要，尤其不适合大规模的临床样本检测与开展流行病学调査。PRRSV分为美洲型与欧洲型两种基因型，欧洲地区主要流行欧洲型，而美洲 及亚太地区则以美洲型为主。目前，我国所分离获得的毒株大多数属于美洲型， 赵耘等通过分子生物学及血清学方法鉴定了一株欧洲型PRRSV，预示现在我国猪 群中可能同时存在欧、美型PRRSV。 二者的0RF7编码的病毒结构蛋白都具有良 好的抗原性，且N蛋白核苷酸序列型内保守，型间差异较大。因此，本研究在N 蛋白的基础上剔除了欧、美型PRRSV型间保守的抗原表位，利本文档来自技高网...

【技术保护点】
欧、美型猪繁殖与综合症病毒抗体鉴别诊断试剂盒的制备方法，其特征在于，制备步骤如下：　　　　１）目的蛋白的表达及纯化：　　　　针对ＰＲＲＳＶ　　ＶＲ－２３３２的ＯＲＦ７基因中欧、美型毒株的保守表位２５ａａ～３０ａａ，３７ａａ～５２ａａ及５０ａａ～６６ａａ的基因缺失，构建针对美洲型ＰＲＲＳＶ　　Ｎ蛋白的原核表达载体ｐＧＥＸ－６Ｐ－１－Ｎ；针对欧洲型ＰＲＲＳＶ　　Ｎ蛋白表位２ａａ～１２ａａ、４０ａａ～４６ａａ及６７ａａ～１２８ａａ的核酸序列，建立针对欧洲型ＰＲＲＳＶ　　Ｎ蛋白的原核重组表达载体ＰＱＥ３０－Ｎ，利用表达纯化的蛋白为抗原，建立欧洲型ＰＲＲＳ抗体试剂盒和美洲型ＰＲＲＳ抗体试剂盒；　　　　２...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王金宝，张祯涛，李俊，任慧英，吴家强，张秀美，丛晓燕，温建新，周顺，
申请(专利权)人：山东省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：88[中国|济南]