环境水体中人类肠道病毒与非人类肠道病毒含量检测方法技术

本发明专利技术公开了一种环境水体中人类肠道病毒与非人类肠道病毒的含量检测方法。在已建立环境水体中肠道病毒定量检测方法的基础上，选择针对人类肠道病毒的引物和探针，制备重组质粒作为标准品，建立了定量检测人类肠道病毒的实时荧光定量PCR反应体系，定量检测环境水体中的人类肠道病毒含量和肠道病毒含量，进一步确定非人类肠道病毒的分布情况。该方法具有良好的特异性，灵敏度高，可对人类肠道病毒，肠道病毒进行准确定量并确立环境水体中人类肠道病毒与非人类肠道病毒的关系。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于环境水体质量的检测
，具体涉及一种。
技术介绍
肠道病毒是广泛存在于水源水及污染水中，不断引起水媒病毒传染病的暴发流行。病毒的检测方法主要有组织培养法、免疫学方法、分子生物学方法等。其中，组织培养法培养周期长，有些病毒缺乏敏感的细胞系来培养或无明显细胞病变效应；免疫学检测方法需要较高浓度的病毒样品，环境水样浓缩后，也不易达到所需浓度；分子生物学方法多利用核酸的检测，因其检测时间短，检测限低灵敏度高，精确度高，已得到广泛的应用。环境水体中肠道病毒属宿主迥异，种类复杂浓度低，现有的关于环境水体中肠道 病毒的PCR检测方法大多是定性或定量的检测总肠道病毒，来源于人类分泌物或排泄物的肠道病毒的检测很少有研究涉及。因环境水体水质复杂同时存在很多PCR反应抑制剂和其他杂质，导致现有检测方法存在灵敏度不够高、受杂质干扰影响较大、无法准确定量的缺点。目前还没有科学的用于对环境水体中人类肠道病毒和非人类肠道病毒含量进行检测的方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种。为此，本专利技术提供的按下述步骤进行步骤一,样品处理(I)样品米集米集待检测水样后于4 C条件下保本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种环境水体中人类肠道病毒与非人类肠道病毒含量检测方法，其特征在于，方法按下述步骤进行：步骤一，样品处理：（1）样品采集：采集待检测水样后于4℃条件下保存；（2）病毒浓缩：于V？mL的待检测水样中加入质量百分比为8%的聚乙二醇（PEG？6000）和质量百分比为2.3%的氯化钠（NaCl）；接着将待检测水样在100rpm、4℃条件下搅拌12小时；然后将待检测水样在9000g，4℃条件下离心30分钟，弃上清液，用1mL超纯水重悬沉淀得到病毒浓缩液，其中50≤V≤250；（3）RNA提取：使用RNA提取试剂盒从病毒浓缩液中提取RNA；（4）逆转录：将5μL的RNA、2μL的5×gDNA？Eraser...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周进宏，王晓昌，张崇淼，船水尚行，佐野大辅，
申请(专利权)人：西安建筑科技大学，
类型：发明
国别省市：