本发明专利技术公开了一种用于检测鸽腺病毒的引物对，如SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2所示的核苷酸序列。本发明专利技术还公开了包含上述引物对的试剂盒。由于本发明专利技术采用的引物来自鸽腺病毒基因中高度保守的区域，采用该引物对能准确、快速、方便的判别病料中是否含有鸽圆环病毒，灵敏度达0.04μL的模板DNA；本研究针对鸽腺病毒基因中高度保守的区域设计引物，建立一种PCR检测鸽腺病毒的方法。通过实验证明该方法具有敏感性高、特异性好的特点，是一种快速准确检测鸽腺病毒的方法，填补了国内空白。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于病毒检测
，具体涉及一种鸽腺病毒的检测试剂盒。
技术介绍
鸽腺病毒感染是由腺病毒(Pigeon adenovirus，FADV)感染引起的急性传染病，在健康和发病的鸽子中均能分离到腺病毒。1953年，Rowe等首次从扁桃体组织块培养物中分离出该病毒。此后众多生物科技工作者相继发现不同生物体的腺病毒。1984年，Cousement首次叙述了比利时的纟鸟腺病毒感染。鸽腺病毒对外界恶劣环境有较强的抵抗力，对脂溶剂也有抵抗力，抗热耐酸能力强，但不耐甲醛。在4°C可以保存70天，50°C则可以保存10-20分钟，在56°C 2. 5-5分钟内会很快死亡。鸽腺病毒必须在其致病因子诱导下才会致病，没有致病因子的影响，受 腺病毒感染的鸽子不会发病。鸽腺病毒在单独发病时一般不致死，但大多数感染的病鸽同时也会并发有其他的一些疾病。目前鸽腺病毒没有十分有效的疫苗，不同生物的腺病毒有各自的特异性，不会交叉感染，所以不同动物的腺病毒疫苗也不可交叉使用。该病毒主要在鸽消化道和呼吸道中进行自我复制，在细胞内复制也会形成包涵体。肉眼可见病变以卡他性肠炎为主要病征。病鸽表现精神萎顿、沉郁、腹泻、排浅黄色黏液状粪便，贫血，黄疸，大腿肌肉出血严重的甚至会突然死亡。在早期有轻度呼吸道症状。对于成年鸽群，会造成鸽群产蛋量下降。主要的病理症状是肾脏肿胀、出血、心包积水、法氏囊及胸腺萎缩变小。鸽腺病毒的传播方式主要是垂直传播，由亲代传给子代。水平传播主要通过粪便，饲料，鸽笼等途径进行传播。一旦传入鸽群，则会迅速在鸽群中传播开来，通常在首次见到本病例后2d内全群发病。临床症状通常会在I周内消失，因为随着腺病毒很快地被清除，肠道上皮几天后可再生。但是如继发大肠埃希菌感染则导致更加严重和持久的疾病。常规的诊断依靠电镜、免疫染色或病毒分离，但是这些技术费时、费力，而且敏感性也差。参考文献De Herdt P，Ducatelle Rj Lepoudre C，et al. An epidemic of fatalhepatic necrosis of viral origin in racing pigeons(Columba livia). AvianPathol, 1995，24(3) :475-483张俊峰，王之磊，周晓玲·禽的腺病毒病. 2003. 6. 20:20-21胡青海，黄建芳.鸽腺病毒感染· 1999,21 (3) :67-68Freick M，Muller H, RaueR. Rapid detection of pigeon herpesvirus, fowladenovirus and pigeon circovirus in young racing pigeons by multiplex PCR. JVirol Methods, 2008，148(1-2):226-231Vereecken M，de Herdt P，Ducatelle R. Adenovirus infections inpigeons:A review. Avian Pathol，1998，27 (4):333-338王兆平，沈建华，张海晓·鸽腺病毒病· 2008，9 :41-43Goryo M，Ueda Y，Umemura T，et al. Inclusion body hepatitis due toadenovirus in pigeons. Avian Pathol, 1988，17(2):391-401Hess M, Prusas C, Monreal G. Growth analysis of adenoviruses isolatedfrom pigeons in chicken cells and serological characterization of theisolates. Avian Pathol, 1998, 27(2):196-199Hess M, Prusas C, Vereecken M, et al. Isolation of fowl adenovirusesserotype 4 from pigeons with hepatic necrosis.Berl Munch Tierarztlffochenschr, 1998，111(4):140-142智海东，王云峰，解生亮，等.禽腺病毒感染及其诊断. 2010:33-35, J Vet Med Sci,1995, 57(3):531-533Wang CH, Chang CM. Pathogenicity and gene analysis of adenovirus frompigeons with inclusion body hepatitis. J Vet Med Sci, 2000，62 (9):989-99
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种鸽腺病毒的检测引物。本专利技术还要解决的技术问题是提供上述鸽腺病毒的检测试剂盒，以快速、准确的检测出鸽腺病毒，及时隔离受病鸽，避免传染。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案如下一种用于检测鸽腺病毒的引物对，如SEQ ID NO 1和SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列。一种鸽腺病毒检测试剂盒，包含上述的引物对。一种鸽腺病毒检测试剂盒，包括(I)鸽腺病毒阳性和阴性对照；(2)鸽腺病毒特异性引物对上游引物Pl :如SEQ ID NO 1所示；下游引物P2 :如SEQ ID NO 2所示；(3) DNA提取试剂采用Geneaid公司生产的病毒核酸提取试剂盒(Viral NucleicAcid Extraction Kit II)；(4)PCR 反应试剂:由上游引物 Pl 15 μ L(IOmM)，下游引物 P215 μ L(IOmM)，2XPCRMaster Mix 200 μ L, ddH20 (超纯水)100 μ L 组成；(5)电泳检测试剂由50 X TAE电泳缓冲液20mL，GoldView 100 μ L组成。采用上述试剂盒的检测方法，包括如下步骤(I )DNA的提取采用Geneaid公司生产的的病毒核酸提取试剂盒(Viral NucleicAcid Extraction Kit II)，根据说明书提取病毒的DNA ;(2) PCR 扩增25“1^体系2\卩0 Master Mix 12. 5μ L ；ddH20 6.5 yL;上游引物 Pl I μ L ;下游引物P21yL和模板2yL ;；PCR反应条件94°C 5min，90°C lmin，61°C lmin，72°C lmin，36个循环；72°C IOmin ；4°C保存。( 3 )琼脂糖凝胶电泳将PCR扩增产物加样到1%的琼脂糖中，将琼脂糖放在电泳仪中进行电泳40分钟左右，使用成像系统记录结果；(4)判断结果如果扩增出一条600bp特异性片段，则表明待检组织鸽腺病毒阳性；如果没有扩增出片段，则表明待检组织鸽腺病毒阴性。有益效果由于本专利技术采用的引物来自鸽腺病毒基因中高度保守的区域，采用该 引物对能准确、快速、方便的判别病料中是否含有鸽圆环病毒，灵敏度达O. 04 μ L的模板DNA ;本研究针对鸽腺病毒基因中高度本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于检测鸽腺病毒的引物对，其特征在于如SEQ？ID？NO：1和SEQ？ID？NO：2所示的核苷酸序列。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张志成，戴鼎震，孙海林，
申请(专利权)人：金陵科技学院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。