本发明专利技术公开了一种番鸭细小病毒LAMP检测试剂盒。本发明专利技术提供了检测番鸭细小病毒的环介导等温扩增引物组，包括引物1、引物2、引物3和引物4；所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列1、序列2、序列3和序列4。本发明专利技术的实验证明，本发明专利技术MDPV的保守序列设计了针对8个特异区域的6条引物，用其进行LAMP检测，具有比常规检测方法更特异、更敏感的特点，仅需使用一台能控温的水浴锅，并且结果可以无需仪器而仅通过肉眼判定，适合在基层兽医站和养殖场中进行快速检测，具有较好的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种番鸭细小病毒LAMP检测试剂盒。
技术介绍
番鸭细小病毒(Muscovy duckling parvovirus,MDPV),是危害番鸭养殖的重要病原，可引起I周龄-3周龄雏番鸭发病，致死率可达到50%-80%。该病毒是雏鸭最易感并且致死率也非常高的病毒。传统的检测方法，需要使用昂贵的仪器和试剂等。而环介导等温扩增技术 (loop-mediated isothermal amplification, LAMP)是由 Notomi 等于 2000 年建立的一种 新型核酸扩增技术，该技术具有操作简便、反应快速、成本低廉和结果可视化等优点，目前在一些病原微生物的检测中被广泛运用。目前，国内外均未见有建立MDPV LAMP可视化检测试剂盒和方法的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种检测番鸭细小病毒的环介导等温扩增引物组。本专利技术提供的引物组，包括引物I、引物2、引物3和引物4 ;所述引物I、所述引物2、所述引物3和所述引物4的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列I、序列2、序列3和序列4。上述引物组中，所述引物I、所述引物2、所述引物3和所述引物4的摩尔比为8 8 1 :1。上述引物组还包括引物5和引物6 ;所述引物5和所述引物6的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列5和序列6 ；上述引物组具体由所述引物I、所述引物2、所述引物3、所述引物4、所述引物5和所述引物6组成。上述引物组中，所述引物I、所述引物2、所述引物3、所述引物4、所述引物5和所述引物6的摩尔比为8 8 1 1 4 :4。含有上述的引物组的检测番鸭细小病毒的环介导等温扩增试剂也是本专利技术保护的范围。上述环介导等温扩增试剂由上述的引物组、环介导等温扩增缓冲液、DNA聚合酶、dNTPs、硫酸镁、钙黄绿素、甜菜碱、MnCl2和水组成。上述环介导等温扩增试剂中，所述引物组中的引物I和所述引物2在所述环介导等温扩增试剂中的终浓度均为I. 6umol/L ；所述引物组中的引物3和所述引物4在所述环介导等温扩增试剂中的终浓度均为0.2umol/L ；所述引物组中的引物5和所述引物6在所述环介导等温扩增试剂中的终浓度均为0.8umol/L。本专利技术的第二个目的是提供一种检测番鸭细小病毒的环介导等温扩增试剂盒。本专利技术提供的试剂盒，包括上述的引物组或上述的环介导等温扩增试剂。上述的引物组、上述的环介导等温扩增试剂或上述环介导等温扩增试剂盒在制备检测和/或辅助检测待测样品中是否含有番鸭细小病毒的产品中的应用。上述应用采用环介导等温扩增，所述环介导等温扩增的条件为63°C反应50h，80°C作用5min灭活。上述应用具体为分别利用上述的引物组、上述的试剂或上述试剂盒对所述待测样品进行环介导等温扩增反应。 本专利技术的实验证明，本专利技术MDPV的保守序列设计了针对8个特异区域的6条引物，使扩增反应具有很高的特异性，在内引物之间增加两条环引物提高了扩增效率，缩短了LAMP的反应时间。通过优化反应条件后，建立了 MDPV的LAMP检测方法。所建立的MDPVLAMP检测方法只需要在62-64°C的水浴锅中反应50分钟即可完成，能特异的检测MDPV，并且检测的灵敏度非常高，能检测到IOfg的MDPV DNA样品，灵敏度是常规PCR的10倍。总之，本专利技术的引物和方法，具有比常规检测方法更特异、更敏感的特点，仅需使用一台能控温的水浴锅，并且结果可以无需仪器而仅通过肉眼判定，适合在基层兽医站和养殖场中进行快速检测，具有较好的应用前景。附图说明图I为LAMP方法检测MDPV的特异性图2为LAMP方法检测MDPV的敏感性图3为PCR方法检测MDPV的敏感性图4为临床样品检测的部分结果具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中部分材料如下Bst DNA聚合酶(大片段)购自New England Biolabs公司；PCR试剂盒购自大连宝生物工程有限公司；EasyPure viral DNA/RNA kit购自北京全式金生物技术有限公司。鸭I型肝炎病毒AV2111株(DHV AV2111)和番鸭细小病毒MDPV (AV238)购自中国兽医药品监察所；番鸭细小病毒(A17F4)记载在“广西番鸭细小病毒的分离和鉴定”，广西畜牧兽医，2002，18(6) : 5-7，公众可从广西壮族自治区兽医研究所获得；鸭圆环病毒(DuCV)记载在“广西部分地区鸭圆环病毒感染情况调查”，中国畜牧兽医，2010,37 (11) :156-158,公众可从广西壮族自治区兽医研究所获得；小鹅瘟病毒(GPV)记载在“小鹅瘟病毒荧光定量PCR检测方法的建立”，上海畜牧兽医通讯，2008，160(06) : 30-31，公众可从广西壮族自治区兽医研究所获得；新城疫病毒记载在“新城疫植物油乳剂苗的研究”，中国预防兽医学报，2000, (04) :23-27,公众可从广西壮族自治区兽医研究所获得；鸭瘟病毒AV1221株购自中国兽医药品监察所；H9亚型禽流感病毒(AIV H9)记载在“多重反转录聚合酶链反应快速检测鉴别H9亚型禽流感病毒方法的建立”，中国人兽共患病学报，2006, (09) : 858-860，公众可从广西壮族自治区兽医研究所获得。实施例I、引物的设计根据GenBank中番鸭细小病毒MDPV的基因保守序列，使用在线软件PrimerExplorer V4 (http://primerexplorer. jp/e/v4-manual/index, html)设计 LAMP 弓丨物。弓I物由广州Invitrogen公司合成。6条引物序列见表I。表I为LAMP引物序列权利要求1.检测番鸭细小病毒的环介导等温扩增引物组，包括引物1、引物2、引物3和引物4； 所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列1、序列2、序列3和序列4。2.根据权利要求I所述的引物组，其特征在于所述引物I、所述引物2、所述引物3和所述引物4的摩尔比为8 8 1 :1。3.根据权利要求I或2所述的引物组，其特征在于所述引物组还包括引物5和引物6 ;所述引物5和所述引物6的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列5和序列6 ； 所述引物组具体由所述引物I、所述引物2、所述引物3、所述引物4、所述引物5和所述引物6组成。4.根据权利要求3所述的引物组，其特征在于 所述引物I、所述引物2、所述引物3、所述引物4、所述引物5和所述引物6的摩尔比为8 8 1 1 4 :4。5.含有权利要求1-4中任一所述的引物组的检测番鸭细小病毒的环介导等温扩增试剂。6.根据权利要求5所述的环介导等温扩增试剂，其特征在于所述环介导等温扩增试剂由权利要求1-4中任一所述的引物组、环介导等温扩增缓冲液、DNA聚合酶、dNTPs、硫酸镁、钙黄绿素、甜菜碱、MnCl2和水组成。7.根据权利要求6所述的环介导等温扩增试剂，其特征在于所述引物组中的引物I和所述引物2在所述环介导等温扩增试剂中的终浓度均为I. 6umol/L ； 所述引物组中的引物3和所述引物4在所述环介导等温扩增试剂中的终浓度均为本文档来自技高网...
【技术保护点】
检测番鸭细小病毒的环介导等温扩增引物组，包括引物1、引物2、引物3和引物4；所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列1、序列2、序列3和序列4。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：谢芝勋，谢丽基，刘加波，庞耀珊，邓显文，谢志勤，范晴，
申请(专利权)人：广西壮族自治区兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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