猪乙型脑炎病毒与猪细小病毒二联灭活疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术提供了猪乙型脑炎病毒与猪细小病毒二联灭活疫苗的制备方法：(1)在潮汐式生物反应器中，接种动物细胞至生物反应器内的微载体上，进行细胞的吸附培养与扩增培养过程；(2)将猪乙型脑炎病毒与猪细小病毒接种到扩增培养的细胞上，进行病毒的吸附培养与增殖培养过程；(3)在接种的动物细胞CPE达到75％以上时，收获病毒液；(4)将收获的病毒培养液于-20℃冻融两次，浓缩后灭活，加入乳化剂，乳化后获得猪乙型脑炎病毒与猪细小病毒二联灭活疫苗。本发明专利技术的优点是保藏的种毒的免疫原性好、生长稳定、效价高；采用了潮汐式生物反应器，分别培养和收获高滴度的二种病毒，浓缩灭活后直接乳化配制，可以大规模连续生产二联灭活疫苗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种猪二联灭活疫苗，特别是指一种治疗和预防猪乙型脑炎和猪细小病毒感染的二联灭活疫苗，属于兽用疫苗领域。
技术介绍
猪乙型脑炎病毒(SwineJapanese Encephalitis Virus, JEV)和猪细小病毒(Porcine Parvovirus Virus7PPV)是引起猪繁殖障碍的重要病原体之一,主要表现为母猪流产、不孕、产死胎、木乃伊胎及弱仔，公猪睾丸急性炎症反应或不育，使养猪业损失巨大。JEV和PPV除单独感染外，常常混合感染，对四川、重庆、湖北、河南等规模化猪场的混合感染调查，发现混合感染阳性率> 60 %。《猪细小病毒感染症-乙型脑炎二联油乳剂灭活疫苗研究》中，公开了将猪细小病 毒灭活油乳剂单苗和猪乙型脑炎灭活油乳剂单苗等量混合获得的一种二联灭活疫苗，但实际上，该文献所提供是在猪细小病毒和猪乙型脑炎病毒的增殖过程中，分别使用了胎猪内脏和小鼠鼠脑，不仅增殖方法繁琐，且依赖于动物器官组织，不利于扩大生产；而且在病毒液中存在着大量的杂蛋白影响疫苗的安全性和稳定性，特别是容易引起动物的过敏反应。中国专利的“猪细小病毒L株及在制备猪细小病毒病灭活疫苗本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪乙型脑炎病毒与猪细小病毒二联灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)在潮汐式生物反应器中，接种动物细胞至生物反应器内的微载体上，进行细胞的吸附培养；2)在细胞的吸附培养结束后进行细胞的扩增培养，将猪乙型脑炎病毒与猪细小病毒接种到扩增培养的细胞上，进行病毒的吸附培养；3)在病毒的吸附培养结束后进行病毒的增殖培养；4)在接种的动物细胞病变CPE达到75％以上时，收获病毒液；5)将收获的病毒培养液于？20℃冻融两次，浓缩后灭活，获得灭活的猪乙型脑炎病毒与猪细小病毒混合液；6)进行水相与油相的配置：将猪乙型脑炎病毒与猪细小病毒混合液作为水相，加入乳化剂，乳化后获得猪乙型脑炎病毒与猪细小...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张许科，孙进忠，白朝勇，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：