本发明专利技术提供一种纳米佐剂及含有该纳米佐剂的流感病毒疫苗及制备方法，含有纳米佐剂的流感病毒疫苗由下列质量比的组分组成：血凝素含量为15～180μg/株.ml的流感病毒疫苗10～30%，油相10～50%，乳化剂20～50%，助乳化剂20～50%。其中的纳米佐剂具有毒性小，性质温和，增溶药物效果明显，流动性良好，对机体刺激性极小等优点，极大增强了流感病毒疫苗的免疫效果，本发明专利技术提供的含纳米佐剂的流感病毒疫苗，与无佐剂的流感病毒疫苗相比，具有给药量小、生物利用度高的优点；与含其他佐剂的流感疫苗相比，具有极大的增强疫苗生物利用度、减小刺激性、降低不良反应、延长疫苗释放时间，以及增强疫苗靶向性，降低损耗率等优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种纳米佐剂及流感病毒疫苗，具体涉及，属于生物
技术介绍
流行性感冒感传染性极强(主要通过飞沫或人与人密切接触传播)，而且流行、变异极快，同时极易引起多种并发症，而导致死亡。流感分为季节性流感和大流行流感，季节性流感多发于冬季，由于季节性流感病毒大多存在于人群中，对人体免疫系统而言，其危害 性相对较小。但当流感病毒突变或者跨越物种而从其他动物感染给人类，则容易造成大流行流感。目前防止流感最有效的手段就是接种流感疫苗。但面对大流行的暴发，要在短时间内提供足够多的疫苗免疫易感人群，目前尚无法做到。佐剂属于抗原辅助剂，能够与疫苗共同使用而明显提高疫苗的免疫效果。由于流感疫苗的生产在时间上属于后延性，一旦大流行流感暴发，难于在短时间内大量生产出急需的疫苗量。但当辅以较好的佐剂时，则可在增强流感疫苗免疫效果的同时，有效减少流感疫苗的用量，让更多的易感人群能够接种疫苗，以应对大流行流感的暴发。就常规的疫苗佐剂而言，目前已经应用于流感疫苗的佐剂有铝佐剂、MF59、LTK63等。铝佐剂可以增强初次免疫，减少每次免疫抗原的用量以及免疫次数，但是对于嗣后加强免疫效果较小，且可能发生多种不良反应。其余的MF59、LTK63，虽不良反应较少，但对疫苗免疫原性的增强作用不明显。目前将粒径小于IOOnm的乳剂称为纳米乳剂，它由油相-水相-乳化剂-助乳化剂组成，连续相为水相、分散相为油相的纳米乳剂为0/W型，连续相为油相、分散相为水相的纳米乳剂为W/0型。纳米乳剂具有粒径小且均匀，易于制备，稳定性、流动性均较好，易于注射等特点，可作为药物载体应用于多种吸收方式的药物制剂中。
技术实现思路
为克服现有疫苗佐剂，尤其是流感疫苗铝佐剂存在的不良反应，MF59、LTK63等佐剂对疫苗免疫原性的增强作用不明显等不足，本专利技术提供一种纳米佐剂，还提供含有该纳米佐剂的流感病毒疫苗及制备方法，可以极大增强疫苗免疫效果，降低不良反应，减少每剂流感疫苗的使用量，满足大流行流感暴发期的用量。本专利技术提供的是这样一种纳米佐剂，由下列质量比的组分组成 油相10 50% 乳化剂20 50% 助乳化剂20 50%。所述油相为市购的棉子油或注射用无水羊毛脂。所述乳化剂为市购的豆磷脂或卵磷脂。所述助乳化剂为市购的海藻酸钠或单硬脂酸甘油酯。本专利技术提供的纳米佐剂经过下列方法制备A、按下列质量比备料 油相10 50% 乳化剂20 50% 助乳化剂20 50% ； B、将步骤A的乳化剂、助乳化剂和油相混合后，在20 60°C温度下，按50-500转/分钟的转速，搅拌均匀，得纳米佐剂。 本专利技术提供的是这样一种含有纳米佐剂的流感病毒疫苗，由下列质量比的组分组成:血凝素含量为15 180 μ g/株.ml的流感病毒疫苗10 30% 油相10 50%· 乳化剂20 50% 助乳化剂20 50%。所述稀释流感病毒疫苗为将流感病毒疫苗原液或半成品或成品的用注射用水稀释到血凝素含量为15 180 μ g/株.ml的流感病毒疫苗。所述流感病毒疫苗原液是用世界卫生组织(WHO)提供的毒种所制备的公知公用产品。本专利技术提供的含有纳米佐剂的流感病毒疫苗，经过下列步骤制备A、按下列质量比备料 血凝素含量为15 180 μ g/株.ml的流感病毒疫苗10 30% 油相10 50% 乳化剂20 50% 助乳化剂20 50% ； B、将步骤A的乳化剂、助乳化剂和油相混合后，在20 60°C温度下，按50-500转/分钟的转速，搅拌均匀，得纳米佐剂； C、用注射用水稀释步骤A的流感病毒疫苗至血凝素达15 180μ g/株.ml，得稀释流感病毒疫苗； D、将步骤C所得的稀释流感病毒疫苗缓慢滴入步骤B所得纳米佐剂中，同时按50-500转/分钟的速度搅拌混合，直至得到均匀分散的透明的含有纳米佐剂的流感病毒疫苗。制得的含有纳米佐剂的流感病毒疫苗经检测，结果如下1.经马尔文粒径检测仪检测，粒径为10 IOOnm,合格；2.经1500_8000rpm，15min离心，不分层，合格；3.经4°C 60°C放置7 60天，无变化，合格。本专利技术具有下列优点和效果采用上述方案，即可获得含有纳米佐剂的流感病毒疫苗，其中的纳米佐剂具有毒性小，性质温和，增溶药物效果明显，流动性良好，对机体刺激性极小等优点，极大增强了流感病毒疫苗的免疫效果，本专利技术提供的含纳米佐剂的流感病毒疫苗，与无佐剂的流感病毒疫苗相比，具有给药量小、生物利用度高的优点；与含其他佐剂的流感疫苗相比，具有极大的增强疫苗生物利用度、减小刺激性、降低不良反应、延长疫苗释放时间，以及增强疫苗靶向性，降低损耗率等优点。经系统查阅文献和专利，目前未发现关于纳米乳剂为佐剂的流感病毒疫苗的报道。附图说明图I为不同接种组在8周内血凝抑制效价的变化。具体实施例方式以下结合实施例对本专利技术做进一步说明，本专利技术包括但不仅限于以下实施例。本专利技术实施例所用的流感病毒疫苗原液为公知公用产品，并且是按照《中国药典》三部2010版中所述流感病毒裂解疫苗制造方法制备的，依据《中国药典》三部2010版所述各项检定标准检验合格的流感病毒疫苗原液。实施例IA、用注射用水稀释流感病毒疫苗原液至血凝素浓度为30μ g/(株.ml)， 得稀释流感病毒疫苗；B、按下列质量比备料稀释流感病毒疫苗10g，棉子油50g，海藻酸钠20g，豆磷脂20g； C、向混合搅拌瓶内加入20g豆磷脂，20g海藻酸钠，60°C温度下持续搅拌，转速维持在50转/分钟,之后加入50g棉子油,得混合溶液； D、在上述混合溶液中缓慢滴入步骤A的稀释流感病毒疫苗10g，同时维持转速在50转/分钟，搅拌至液体为透明，得到含有纳米佐剂的流感病毒疫苗。制得的流感病毒疫苗进行如下检测1.经马尔文粒径检测仪检测,粒径范围为28.596 42. 218nm,合格；2.经1500rpm, 15min离心分离，纳米乳剂体系不分层，合格；3.经4°C放置60天，纳米乳剂体系无变化，合格。实施例2A、用注射用水稀释流感病毒疫苗原液至血凝素浓度为15μ g/(株.ml)，得稀释流感病毒疫苗； B、按下列质量比备料30g稀释流感病毒疫苗，30g注射用无水羊毛脂，20g单硬脂酸甘油酯，20g豆磷脂； C、向混合搅拌瓶内加入20g豆磷脂和20g单硬脂酸甘油酯，20°C温度下持续搅拌，转速维持在500转/分钟，之后加入30g注射用无水羊毛脂，得混合物； D、在上述混合物中缓慢滴入稀释的流感病毒疫苗30g，同时维持转速在500转/分钟，搅拌至液体为透明，得到含有纳米佐剂的流感病毒疫苗。制得的流感病毒疫苗进行如下检测1.经马尔文粒径检测仪检测,粒径范围为29.972 36. 633nm,合格；2.经3000rpm, 15min离心分离，纳米乳剂体系不分层，合格；3.经20°C放置30天，纳米乳剂体系无变化，合格。实施例3 A、用注射用水稀释流感病毒疫苗原液至血凝素浓度为50μ g/ (株.ml); B、按下列质量比备料20g稀释流感病毒疫苗，20g注射用无水羊毛脂，40g单硬脂酸甘油酯，20g豆磷脂； C、向混合搅拌瓶内加入20g豆磷脂，40g单硬脂酸甘油酯，40°C温度下持续搅拌，转速维持在200转/分钟，之后本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种纳米佐剂，由下列质量比的组分组成：油相？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？10～50%乳化剂？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？20～50%助乳化剂？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？20～50%；其中，所述油相为市购的棉子油或注射用无水羊毛脂；所述乳化剂为市购的豆磷脂或卵磷脂；所述助乳化剂为市购的海藻酸钠或单硬脂酸甘油酯。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李映波，孙笠雯，
申请(专利权)人：李映波，
类型：发明
国别省市：
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