本发明专利技术涉及复方免疫增强剂及其在制备兽用疫苗中的应用。复方免疫增强剂含有0.5～100μg/mL的含CpG基序的核酸序列、0.5～1000μg/mL的α-半乳糖基神经酰胺、5～2000μg/mL的β-葡聚糖和5～2000μg/mL的左旋咪唑，所述含CpG基序的核酸序列如SEQIDNO.1所示。本发明专利技术复方免疫增强剂与H9亚型禽流感灭活疫苗混合，可缩短免疫窗口期2周，抗体持续期延长8周，对H9亚型同型毒株攻击产生消除性免疫保护，降低配制疫苗用的抗原含量。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及。
技术介绍
畜禽各类传染病的灭活疫苗，对防控这些疫病发挥了重要作用。使用灭活疫苗希望能够达到消除性免疫，即在接受某种疫苗免疫后，完全保护机体免受此类疫病的感染发发病，或者在感染后不排毒，不将病毒传播给其它动物。但现有疫苗在应用中仍存在一定的缺陷,疫苗质量有待于进一步改善。这些缺陷包括以下方面。现有灭活疫苗免疫机体后抗体产生较慢，抗体持续期较短，抗体水平整齐度差。常 规灭活疫苗免疫后3周，才能对同型病毒的攻击提供保护。由于动物个体间的抗体水相差较大，导致群体抗体离散度大。在规模化养殖条件下，群体中少部分动物因抗体水平较低而发病，可能会波及整群发病，带来灾难性的后果。临床生产中常规疫苗抗体持续期约为3-4个月。为了使抗体水平整齐度较好，同时使维持较高的抗体水平，一般需多次免疫。这将加大人力投入，同时增加对动物的应激反应，影响生产性能和饲料报酬。通常，兽用灭活疫苗配制中抗原用量较多。一方面，疫苗抗原纯化工艺不成熟，表现在疫苗抗原中杂蛋白较多，导致副反应较大。另外一方面，现有禽用灭活多联疫苗在配制时需进行抗原浓缩，以保证疫苗中的抗原含量和疫苗的免疫效果，但增加疫苗的生产成本。临床生产亟需通过合适的技术方法，在保证较好的抗体水平情况下，有效降低抗原用量，降低副反应。禽用细菌灭活苗存在免疫原性较弱，激发机体产生抗体效价低等缺陷。由副鸡嗜血杆菌为抗原制备的鸡传染性鼻炎疫苗也存在此类缺陷。但单纯从提高由副鸡嗜血杆菌抗原量来提高抗体效价，不但使得生产成本提高，也导致疫苗副反应增大，难以吸收。临床应用中需要一种技术克服以上缺点。专利技术内容本专利技术的目的之一是提供一种复方免疫增强剂，该复方免疫增强剂能够缩短现有疫苗免疫窗口期，显著提高抗体效价，提高抗体整齐度，延长抗体持续期，有效降低抗原用量和产生消除性免疫。本专利技术的目的之二是提供复方免疫增强剂的制备方法，该方法简单易操作。本专利技术的目的之三是提供禽用疫苗，该禽用疫苗含有上述复方免疫增强剂，疫苗的免疫窗口期缩短，抗体效价高，抗体整齐度高，抗体持续期长，抗原用量降低，并且能够产生消除性免疫。本专利技术的目的之四是提供所述禽用疫苗的制备方法，该方法简单易操作。采用如下技术方案实现实现上述目的一种复方免疫增强剂，含有0. 5 100 u g/mL的含CpG基序的核酸序列、0. 5 1000V- g/mL的a -半乳糖基神经酰胺、5 2000 u g /mL的P -葡聚糖和5 2000 u g /mL的左旋咪唑，所述含CpG基序的核酸序列如SEQ ID NO. I所示。该复方免疫增强剂含有0. 5 5 i! g/mL的含CpG基序的核酸序列、0. 5 100 y g/mL的a -半乳糖基神经酰胺、5 200 u g/mL的P -葡聚糖和5 10 y g/mL的左旋咪唑。该复方免疫增强剂含有5 IOOii g/mL的含CpG基序的核酸序列、100 1000 ii g/mL的a -半乳糖基神经酰胺、200 2000 u g /mL的P -葡聚糖和10 2000 u g /mL的左旋咪唑。一种制备所述复方免疫增强剂的方法，包括下述步骤 (1)配制水相溶液在磷酸盐缓冲液中加入含CpG基序的核酸序列、a-半乳糖基神经酰胺、P -葡聚糖和左旋咪唑，然后加入吐温-80，配制成水相溶液； (2)配制油相溶液在白油中加入司盘-80配制成油相溶液；将所述水相溶液与油相溶·液充分混合，即得所述复方免疫增强剂。所述禽用疫苗含有0. 5 100 u g/mL的含CpG基序的核酸序列、0. 5 1000 u g/mL的a -半乳糖基神经酰胺、5 2000 u g/mL的P -葡聚糖、5 2000 u g /mL的左旋咪唑和灭活疫苗抗原；所述含CpG基序的核酸序列如SEQ ID NO. I所示。所述禽用疫苗优选含有0. 5 5 ii g/mL的含CpG基序的核酸序列、0. 5 100 y g/mL的a -半乳糖基神经酰胺、5 200 u g /mL的P -葡聚糖和5 10 y g/mL的左旋咪唑和灭活疫苗抗原。所述禽用疫苗优选含有5 IOOii g/mL的含CpG基序的核酸序列、100 1000 Ii g/mL的a -半乳糖基神经酰胺、200 2000 u g /mL的P -葡聚糖和10 2000 u g/mL的左旋咪唑和灭活疫苗抗原。所述禽用疫苗为H9亚型禽流感疫苗或新城疫、传染性支气管炎、H9亚型禽流感、产蛋下降综合症四联灭活疫苗或新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊三联灭活疫苗或鸡传染性鼻炎灭活疫苗。一种制备所述禽用疫苗的方法，包括下述步骤 (1)在磷酸盐缓冲液中加入含CpG基序的核酸序列、a-半乳糖基神经酰胺、P -葡聚糖和左旋咪唑，然后加入吐温-80，配制成水相溶液； (2)在所述水相溶液中加入灭活疫苗抗原，混匀后得到灭活抗原溶液； (3)在白油中加司盘-80配制成油相溶液； (4)将所述灭活抗原溶液与油相溶液充分混合，即得所述复方免疫增强剂。有益效果本专利技术复方免疫增强剂，由于其各成分的协同作用，使疫苗的免疫窗口期缩短，显著提高抗体效价，延长抗体持续期，产生针对同型毒株攻毒提供消除性免疫保护，降低抗原用量。本专利技术复方免疫增强剂与H9亚型禽流感灭活疫苗混合使用免疫鸡，与常规疫苗比较，抗体产生提前2周，即免疫窗口期缩短2周，将抗体持续期延长8周。本专利技术复方免疫增强剂与1/10的H9亚型禽流感灭活疫苗抗原配伍使用即可达到与H9亚型禽流感常规疫苗的免疫效果。本专利技术含有该复方免疫增强剂的H9亚型禽流感灭活疫苗能够提供消除性免疫。本专利技术提供的复方免疫增强剂亦对新城疫、传染性支气管炎、H9亚型禽流感、产蛋下降综合症四联灭活疫苗和新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊三联灭活疫苗中的各抗原均有显著免疫增强作用。本专利技术提供的复方免疫增强剂亦对细菌性灭活疫苗鸡传染性鼻炎灭活疫苗具有显著免疫增强作用。本专利技术所述禽用疫苗的制备方法，简单易操作。附图说明图I显示各组免疫后血清针对H9检测抗原的HI抗体效价。图2显示各组免疫后针对H9检测抗原的HI抗体持续期。图3显示各组免疫后针对H9检测抗原的HI抗体效价 图4显示免疫后4周各免疫组对ND、IB、H9和EDS检测抗原的抗体效价。 图5显示免疫后4周各免疫组针对三联苗中的ND和IB检测抗原的抗体。图6显示免疫后4周各免疫组针对三联苗中的IBD检测抗原的抗体。图7免疫后4周各免疫组对鸡传染性鼻炎的抗体效价。具体实施例方式实施例I复方免疫增强剂、禽用疫苗的配制 (I) 试验材料 含CpG基序的核酸序列如SEQ ID NO. I所示，具体为5’ - GTTCCTGACGTTGGTGCATCGATGCAGGGGGGTCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTTGGGGGGTCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTTGGGGGGTCGTCGTITTGTCGITITGTCGITGGGGGGGCTAGACGTTAGCGT-3’，由。葡聚糖，a -半乳糖基神经酰胺(a -galactosylceramide,简称 a-GC)购自 Invivogen。左旋咪唑购自 SIGMA 公司。白油购自法国埃索公司，吐温-80和司盘-80购自本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种复方免疫增强剂，其特征在于该复方免疫增强剂含有0.5～100？μg/mL的含CpG基序的核酸序列、0.5～1000？μg/mL的α？半乳糖基神经酰胺、5～2000μg？/mL的β？葡聚糖和5～2000μg？/mL的左旋咪唑，所述含CpG基序的核酸序列如SEQ？ID？NO.1所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：唐应华，陆吉虎，吴培培，刘振兴，田震，何家惠，侯继波，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。