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一种高效表达枯草芽孢杆菌L-天冬酰胺酶的方法技术

技术编号:8188125 阅读:289 留言:0更新日期:2013-01-09 23:49
一种高效表达枯草芽孢杆菌L-天冬酰胺酶的方法,属于酶基因工程和酶工程领域。本发明专利技术通过PCR技术以B.subtilis?6-7总DNA为模板,扩增获得L-天冬酰胺酶编码基因ansZ,将其连接到表达载体pMA5上,以B.subtilis168为表达宿主,构建L-天冬酰胺酶基因工程菌pMA5-ansZ/B.subtilis168,实现L-天冬酰胺酶的高效表达,该工程菌的酶活为22.4U/mL,较出发菌株提高574倍。

【技术实现步骤摘要】

一种高效表达枯草芽孢杆菌L-天冬酰胺酶的方法,本专利技术属于酶基因工程和酶工程领域。具体地说涉及ー种L-天冬酰胺酶基因工程菌及其构建方法。
技术介绍
L-天冬酰胺酶(EC 3. 5. I. I)是ー种有抗癌活性的蛋白酶,能专ー催化L-天冬酰胺水解成天冬氨酸和NH315L-天冬酰胺酶的生理作用主要表现为对某些肿瘤的抑制作用,尤其对急性白血病和恶性淋巴肿瘤有效。L-天冬酰胺酶已成为治疗白血病非常有效的药物,对骨髓没有抑制作用。L-天冬酰胺酶可以减少食物中丙烯酰胺的生成。丙烯酰胺主要是由食品原料中的还原糖和天冬酰胺在高温加热过程中通过美拉德反应生成,在食物中加入天冬酰胺酶可以 水解天冬酰胺,从源头上減少丙烯酰胺的生成。从1953年Kidd观察到豚鼠血清有破坏Gardner癌细胞的作用,1961年Broom证实豚鼠血清中的抗肿瘤因子为し-天冬酰胺酶,1964年Mashburn等从Escherichia coli中部分提纯了 L-天冬酰胺酶,并证实这种酶也有抗肿瘤因子的作用,2004年Amrein等提出用L-天冬酰胺酶代替其他方法减少食物中丙烯酰胺含量,2009年Hendriksen等研究证本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组表达载体pMA5?ansZ,其特征是:通过PCR技术获得来源于B.subtilis?6?7的ansZ基因,与克隆载体pMD18?T相连,获得该基因的大量克隆,经双酶切,片段纯化后与表达载体pMA5连接,获得重组质粒pMA5?ansZ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:饶志明贾明媚徐美娟
申请(专利权)人:江南大学
类型:发明
国别省市:

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