本发明专利技术涉及一种酪蛋白抗凝血肽口服液的制备方法，包括酪蛋白溶液的制备、4酶混合物调配、4酶混合水解、灭酶、离心除杂、调整酶解液活力、调味及制成产品几个步骤，具体是：将酪蛋白与无菌水按质量比3:16混合调成糊状，用氢氧化钠溶液调至pH值为8~10，加热使酪蛋白充分溶解，用食用盐酸降低pH值为6~8；加入木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶组成的4酶混合物酶解酪蛋白；酶解完成之后灭活蛋白酶，冷却至室温；酶解液离心除杂后，用无菌水调节酶解液活力并加适量甜蜜素、柠檬酸制成产品；本方法工艺简单易行，生产周期较短；制得的抗凝血肽口服产品抗血栓及溶解血栓效果好、使用方便快捷、价格低、安全可靠。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种酪蛋白抗凝血肽口服液，具体涉及一种利用4酶混合酶解酪蛋白制备抗凝血肽口服液的方法，属于医药、保健食品生产
技术介绍
世界上心脑血管疾病的死亡率一直居于前二位，全世界每年死于该类疾病的人数超过1500万，其中血栓栓塞性心脑血管疾病发病率和死亡率最高。据卫生部统计,我国每年死于心脑血管疾病约200万人，超过全部死亡病人的50%。心脑血管疾病中有很大比例是血栓病,并以血栓病的发病率、致残率和死亡率最高,其病因是血栓的形成。血栓性疾病治疗的最有效办法是溶栓治疗，人类每年需要为该类疾病支出巨额药费。 导致血管内血栓形成虽有多种因素，但凝血酶诱发的血液凝固是血栓形成的主要触发机理。水蛭素是水蛭唾液腺内一类相对分子质量约7 000的多肽，是凝血酶的特效抑制剂，它主要通过靠近肽链C-端的由3 4个酸性氨基酸组成的活性部位与凝血酶富含碱性氨基酸的活性部位特异性结合。试验结果表明，水蛭素既能防止新的血栓形成，还能使已形成的血栓溶解，对多种血栓疾病都具有极好的预防和治疗作用。目前，有人尝试使用水蛭素治疗血栓栓塞性心脑血管疾病，发现口服给药虽然方便，但因水蛭素被患者胃肠道水解，几乎完全丧失了抗栓、溶栓的效果；虽然注射给药疗效很好，但反复注射会给患者带来很大的痛苦和不便，难以适应大多数慢性高凝态患者长期抗凝治疗的需要。而且水蛭饲养成本较高，高纯度水蛭素提取工艺复杂、设备投入大，注射剂价格较高，患者承受的经济压力大。酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质，由a、P、Y和K酪蛋白组成，营养价值较高，经酸化或凝乳酶处理后沉淀分离、干燥而得。研究发现，酪蛋白分子内含有若干具有抗凝血酶活性的肽段，按生物化学理论，在蛋白酶的作用下，蛋白质被水解为肽段，在合适的工艺条件下水解酪蛋白，可使这些肽段释放出来，从而获得功能与水蛭素类似的抗凝血肽，但到目前为止尚无成功的报道，而且近年研究发现，2 3肽能被人体完全迅速吸收，4肽、5肽甚至6肽都能被动物直接吸收。本专利技术以酪蛋白为原料，以木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶构成的4酶混合水解系统进行水解，使酪蛋白中的抗凝血肽释放出来，从而获得富含抗凝血肽的酶解液。以此为主要原料，加上一些辅料制成抗凝血肽口服液。本专利技术开发出一种抗血栓及溶解血栓效果好、使用方便快捷、价格低、安全可靠的抗凝血肽口服产品，以消除血栓栓塞性心脑血管疾病患者痛苦。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，制得的抗凝血肽口服产品抗血栓及溶解血栓效果好、使用方便快捷、价格低、安全可靠。为实现上述专利技术的目的，本专利技术采取的技术方案如下 ，包括以下几个步骤(1)酪蛋白溶液的制备将酪蛋白与无菌水按3:16的比例调成糊状，以300r mirT1搅拌，边加热边加入2 mo I L—1食用氢氧化钠溶液调至pH值为8 10，至50°C停止加热，保温；当糊状液体变得均匀、透明时，用2 mol .171食用盐酸调至pH值为6 8，停止搅拌并在容器壁作好液面记号； (2)4酶混合物调配按每千克酪蛋白分别添加木瓜蛋白酶(80万U/g) 8 12g、菠萝蛋白酶(80万U/g)l(T20g、中性蛋白酶(40万U/g)10 15 g、碱性蛋白酶(40万U/g) l(T20g的比例，4种酶按需要量取出后，倒在同一个不锈钢容器内，用不锈钢勺混合均匀，备用； (3)4酶混合水解在4酶混合物内加入相当于其3倍质量的50 °C无菌水，用不锈钢勺混合均勻，倒入上述已预热至50 "€的酪蛋白溶液中，以300 r mirT1边搅拌边加热并开始计时，维持酪蛋白溶液(50 ± I) V’酶解3 5h后，停止搅拌及加热，往酪蛋白溶液中补加50°C无菌水至液面记号； (4)灭酶将酶解完毕的酪蛋白溶液迅速升温至100°C保持1(T15 min后，停止加热放 冷至室温，加无菌水至液面记号搅拌均匀； (5)离心除杂将酪蛋白4酶混合水解液以10000 r ^irT1离心15 25 min，去除沉淀收集液相，得酪蛋白混合酶解液原液； (6)调整酶解液活力将上述原液用无菌水调节至35(T360抗凝血酶活力单位(ATU) mL'得酪蛋白混合酶解液； (7)调味及制成产品将酪蛋白混合酶解液、甜蜜素、柠檬酸按质量以I000:0. ro. 3r3的比例混合，溶解、混合均匀，得酪蛋白抗凝血肽口服液原液。与现有的技术相比，本专利技术的突出实质性特点和显著的进步是 (1)以4酶混合水解比单酶(ProteaseN)水解能显著提高酶解效果，本专利技术3批酶解液3肽的质量分数平均98. 53%，提高了约27. 53% ;抗凝血酶活力平均413. 29 ATU mL—1 ；3批酶解液有关数据如下表I。表I 3批酶解液原液中3肽占水解物总量的比例以及抗凝血酶活力强度 廳解液序 3 K占水解_总量的庾量分 抗_血靡活力< ATUniL-) I号' I9S 7!429； I 25S.邛413 52 ! }9S4S415 64 卜翁9S—53丨4U—3I (2)在混合酶的作用下，酪蛋白被水解为肽段并释放出来，从而获得功能与水蛭素类似的抗凝血肽，可被人体直接吸收，抑制凝血酶的作用，防止血栓的形成，与现有技术相比，成本低，效果好，无副作用。(3)开发出了一种抗血栓及溶解血栓效果好、使用方便快捷、价格低、安全可靠的抗凝血肽口服产品,可以消除血栓栓塞性心脑血管疾病患者痛苦。具体实施方式下面通过实例对本专利技术做进一步详细说明，这些实例仅用来说明本专利技术，并不限制本专利技术的范围。实施例I I、按质量比将酪蛋白与无菌水以3:16的比例调成糊状，以300 r mirT1搅拌，边加热边加入2 mo I L—1食用氢氧化钠溶液调至pH值为8，至50°C停止加热，保温。当糊状液体变成均匀、透明的溶液后，用2 mol L—1食用盐酸调至pH值为6，停止搅拌。2、根据以上酪蛋白质量，按每千克分别加木瓜蛋白酶(80万U/g)8 g、菠萝蛋白酶(80万U/g) 10g、中性蛋白酶(40万U/g) 10g、碱性蛋白酶(40万U/g) IOg的比例,4种酶按需要量取出后，倒在同一个不锈钢容器内，用不锈钢勺混合均匀成为4酶混合物。按4酶混合物的质量加入3倍的50 °C无菌水，用不锈钢勺混合均匀，倒入上述已预热至50 0C的酪蛋白溶液中，记录液面位置。以300 r ^irT1边搅拌边加热并开始记时，维持酪蛋白 溶液(50±1) °C，酶解3h后，停止搅拌及加热，补加50 1无菌水至液面的记号。3、将酶解完毕的酪蛋白混合酶解液迅速升温至100 °C保持10 min后，停止加热放冷至室温，加无菌水至液面的记号，搅拌均匀。4、将步骤3所得的酪蛋白酶混合酶解液以10 000 r mirT1离心15 min,去除沉淀收集液相，得酪蛋白混合酶解液原液。5、测定酪蛋白混合酶解液原液ATU，用无菌水稀释至350 ATU -mL'得酪蛋白混合酶解液。6、上述酪蛋白混合酶解液与甜蜜素、柠檬酸按质量以I 000:0. 1:1的比例混合，溶解、混合均匀，得酪蛋白抗凝血肽口服液。7、酪蛋白抗凝血肽口服液液分装、灭菌、检测。经实际测定，酪蛋白抗凝血肽口服液各项微生物指标符合中华人民共和国国家标准保健(功能)食品本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种酪蛋白抗凝血肽口服液的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）酪蛋白溶液的制备：将酪蛋白与无菌水按比例调成糊状，以300？r·min？1搅拌，边加热边加入2？mol·L？1食用氢氧化钠溶液调至pH值为8~10，至50℃停止加热，保温；当糊状液体变得均匀、透明时，用2？mol·L？1食用盐酸调至pH值为6~8，停止搅拌并在容器壁作好液面记号；（2）4酶混合物调配：按每千克酪蛋白分别添加木瓜蛋白酶8~12？g、菠萝蛋白酶10~20g、中性蛋白酶10~15g、碱性蛋白酶15~20g的比例，4种酶按需要量取出后，倒在同一个不锈钢容器内，用不锈钢勺混合均匀，备用；（3）4酶混合水解：在4酶混合物内加入相当于其3倍质量的50℃无菌水，用不锈钢勺混合均匀，倒入步骤（1）所述已预热至50℃的酪蛋白溶液中，以300？r·min？1边搅拌边加热并开始记时，维持酪蛋白溶液(50±1)？℃，酶解3~5？h后，停止搅拌及加热，往酪蛋白溶液中补加50℃无菌水至液面记号；（4）灭酶：将酶解完毕的酪蛋白溶液迅速升温至100？℃保持10~15？min后，停止加热放冷至室温，加无菌水至液面记号搅拌均匀；（5）离心除杂：将酪蛋白4酶混合水解液以10？000？r·min？1离心15~25？min，去除沉淀收集液相，得酪蛋白混合酶解液原液；（6）调整酶解液活力：步骤（6）所得原液用无菌水调节至350~360抗凝血酶活力单位（ATU）·mL？1，测定酪蛋白混合酶解液原液的ATU，得酪蛋白混合酶解液；（7）调味及制成产品：将酪蛋白混合酶解液、甜蜜素、柠檬酸按质量以1？000:0.1~0.3:1~3的比例混合，溶解、混合均匀，得酪蛋白抗凝血肽口服液原液。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：方富永，苗艳丽，王宏波，芦志刚，廖艳，宋文东，
申请(专利权)人：广东海洋大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。