一株芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术属于微生物技术领域，特别涉及一株芽孢杆菌及其应用。本发明专利技术提供一株芽孢杆菌（Bacillus）SSAL-1，保藏号为CGMCC?No.6194。本发明专利技术的芽孢杆菌SSAL-1能够有效地降解水华鱼腥藻，在一定条件下，芽孢杆菌SSAL-1对水华鱼腥藻的降解效果随菌株浓度的增大而增加，当芽孢杆菌SSAL-1的浓度为35%时，对水华鱼腥藻叶绿素a的抑制率可高达96%。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物
，特别涉及一株芽孢杆菌及其应用。
技术介绍
水体富营养化已成为困扰世界各国的普遍性环境问题。浮游藻类的大量繁殖导致水华的频繁爆发，严重影响了人类的生活、生产和身体健康，造成了世界范围内的生态灾害，因此，探索控制水华发生的有效途径已迫在眉睫。目前，治理水体富营养化主要是采用物理和化学方法，但这两种方法不仅会消耗大量的财力和物力，而且会在一定程度上破坏生态环境。溶藻菌作为水华和赤潮的防治生物，日益受到国内外环境工作者的广泛关注。国外对溶藻菌的研究已有数十年的历史，自Geitler报道一种寄生在刚毛藻上的粘细菌以来，陆续有溶藻菌的相关报道，研究重点也逐渐从单一溶藻菌的筛选及溶藻特性研究过渡到菌一藻种群生态学及分子调控机理等方面。目前，国内对溶藻细菌的研究还处于初始·阶段，因此，寻找高效溶藻菌对溶藻菌的深入研究及应用具有重要意义。水华鱼腥藻是导致水体富营养化的主要藻种之一，其分布广，能够产生藻毒素，直接和间接危害人类，然截止目前，利用微生物方式控制水华鱼腥藻的研究甚是罕见。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一株芽孢杆菌，它可以影响水华鱼腥藻的生长效应和光合色素，从而起到溶藻作用。本专利技术所提供的是芽孢杆菌(Bacillus) SSAL-1，保藏号为CGMCC No. 6194。本专利技术从农业部都市农业(南方)重点实验室黄化的水华鱼腥藻液中分离筛选并获得一株对水华鱼腥藻具有良好溶藻效应的细菌，经鉴定为芽孢杆菌，命名为SSAL-I，分类命名为芽孢杆菌(Bacillus)。本专利技术芽孢杆菌SSAL-I具有以下微生物学特性该菌株为革兰氏阳性芽孢杆菌，杆状，芽孢为椭圆形，大多中央生菌落呈近白色。本专利技术的芽孢杆菌SSAL-I能够有效地降解水华鱼腥藻，对水体富营养化的控制提供了科学依据，为微生物治理水华的研究提供了重要基础。在一定条件下，芽孢杆菌SSAL-I对水华鱼腥藻的降解效果随菌株浓度的增大而增加，当芽孢杆菌SSAL-I的浓度为35%时，对水华鱼腥藻叶绿素a的抑制率可高达96%。保藏信息本专利技术的芽孢杆菌(Bacillus) SSAL-I保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCOJia :北京市朝阳区北辰西路I号院3号，保藏日期2012年6月6日，保藏编号CGMCC No. 6194。附图说明图I为芽孢杆菌SSAL-I在1000X下的染色显微图2为芽孢杆菌SSAL-I对水华鱼腥藻细胞数的影响示意图；图3为芽孢杆菌SSAL-I对水华鱼腥藻干重的影响示意图；图4为芽孢杆菌SSAL-I对水华鱼腥藻色素吸收光谱的影响示意图；图5为芽孢杆菌SSAL-I对水华鱼腥藻叶绿素a的影响示意图。具体实施例方式以下举例说明本专利技术，但是并不用于限定本专利技术的保护范围。实施例I芽孢杆菌SSAL-I的分离、纯化及其鉴定I)、芽孢杆菌SSAL-I的分离及纯化 以农业部都市农业(南方)重点实验室黄化的水华鱼腥藻液作为溶藻细菌的分离源，采用涂布平板法及分区划线法多次纯化分离，将分离获得的25株细菌分别置于IOOmLLB液体培养基中，于180r · mirT1，37°C下培养24h，然后分别取800 μ L滴加到水华鱼腥藻固体平板上，通过溶藻斑的大小考察、比较各菌的溶藻效果，最终筛选出具高溶藻效应的菌株SSAL-1，其在显微镜下的结构如图I所示。经鉴定为芽孢杆菌，命名为SSAL-I，分类命名为芽孢杆菌(Bacillus)。将其接入斜面培养基，于冰箱4°C保存；将扩大培养制成的菌悬液加入到灭菌的甘油中，甘油的最终浓度为25%，放入_80°C的冰箱保藏。其中，上述的LB液体培养基组分及配比为酵母提取物，5g ;胰蛋白胨，IOg ；NaCl,IOg ;蒸馏水IOOOmL ；LB液体培养基的pH值为7. 0-7. 2。上述的水华鱼腥藻固体培养基组分及配比为磷酸氢二钾(K2HPO4)，O. 075g ;硫酸镁(MgSO4 · H2O), O. 125g ;碳酸钙(CaCO3)，O.IOOg ;柠檬酸铁(1%水溶液)，0· 5mL ;柠檬酸(1%水溶液)，0· 5mL ;钥酸(1%水溶液)，5滴；氢氧化钠(1%水溶液)，I. 5mL ;琼脂粉，15g ;蒸馏水，1000mL。2)、芽孢杆菌SSAL-I的生理生化鉴定经鉴定可知该菌株为革兰氏阳性芽孢杆菌，杆状，芽孢为椭圆形，大多中央生菌落呈近白色。使用弓 I 物 7f(5，-CAGAGTTTGATCCTGGCT-3，)和1540r (5’ -AGGAGGTGATCCAGCCGCA-3’)构筑得到SSAL-I菌株的DNA序列，该序列具有序列表中序列I的核苷酸序列。经序列比对表明，经鉴定为芽孢杆菌，命名为SSAL-I，分类命名为芽孢杆菌(Bacillus)。该芽孢杆菌SSAL-I已于2012年6月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称06110，地址为北京市朝阳区北辰西路I号院3号)，保存号为 CGMCCNo. 6194。实施例2芽孢杆菌SSAL-I对水华鱼腥藻生长效应和光合色素的影响I)、芽孢杆菌SSAL-I对水华鱼腥藻生长效应的影响水华鱼腥藻培养参照藻类生长抑制实验的标准方法(国家环保部)，采用水生111号无氮培养液培养，pH为7. 5。培养温度30±2°C，连续24h光照，光照强度3000±2001x，静置培养，每天定期摇动3次。在水华鱼腥藻浓度为5X10^1 X IO5个/mL时，分别向IOOmL藻液中加入芽孢杆菌SSAL-I (菌体浓度约为IO9个/mL)，处理浓度(v/v)梯度为5%、10%、15%、20%、25%、30%和35%，每组样设3个重复。制备与实验组相同的一系列不同配比的培养液(LB培养液水生111号无氮培养液)，分别用于培养溶藻菌和水华鱼腥藻形成对照组。以细胞计数法测定藻体细胞数量、并测定水华鱼腥藻干重。细胞计数方法从接种计时起，每隔24h取样，用计数框进行细胞计数。用移液器取经过超声波破碎仪打碎过的藻液0. ImL于计数框中，在低倍镜下观察，放大倍数40X10，随机取五个视野，数出所看到的细胞数，取其平均值。N=IOXaXSif/Sft ；a —每个视野内细胞平均值；Sif —计数框面积；Sft —视野面积；N —每mL中细胞个数。水华鱼腥藻干重测定方法取定量的藻液，离心得藻，加入称量皿，在80°C烘至恒重。不同浓度的芽孢杆菌SSAL-I对水华鱼腥藻的细胞数的影响的测定结果如图2所示，结果表明水华鱼腥藻细胞的去除效果与芽孢杆菌SSAL-I的浓度呈现出一定的浓度一相关性，即随着芽孢杆菌SSAL-I浓度的增长，对水华鱼腥藻细胞的去除作用越强。当芽孢杆菌SSAL-I菌体浓度为5%、10%、15%、20%、2 5%、30%和35%时，培养24h对水华鱼腥藻细胞的去除率分别为57%、65%、81%、86%、87%、89%和90%，培养168h后分别变为86%、86%、89%、91%、91%、92%和92%，与对照相比，呈现显著差异(P〈0. 05)。不同浓度的芽孢杆菌SSAL-I对水华鱼腥藻的干重的影响的测定结果如图3所示，结果表明纯LB液体培养基的投入对水华鱼腥藻干重亦会产生影响，当LB液体培养基浓度依次为5%、10%、15%、20%、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株芽孢杆菌（Bacillus）SSAL？1，保藏号为CGMCC？No.6194。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：沈健英，孙秀敏，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：