本发明专利技术提供了一种菲牛蛭药材指纹图谱的测定方法。菲牛蛭(Poecilobdellamanillensis)，俗称金边蚂蝗，隶属于无吻蛭目、医蛭科、牛蛭属，具有显著的抗凝血、抗血栓、溶栓、抗血小板聚集活性，具有显著的药用价值，迄今为止药典和地方标准均无收载，也无任何关于指纹图谱的报道，本发明专利技术采用高效毛细管电泳法对菲牛蛭药材进行测定，建立了菲牛蛭药材的指纹图谱，为该药材的整体质量评价提供了方法，用于菲牛蛭药材原料质量控制。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种菲牛蛭药材指纹图谱的測定方法，属于药物分析
技术介绍
菲牛蛭(Poecilobdella manillensis),俗称金边蚂幢,隶属于无吻蛭目、医蛭科、牛蛭属，主要分布于广西、广东、海南和福建等省区，并且可以进行人エ养殖，其具有显著的抗凝血、抗血栓、溶栓、抗血小板聚集活性，主要化学成分为脂肪酸、氨基酸和蛋白质，其中已报道的活性成分为水蛭素P6、水蛭素P18、菲牛蛭素A和菲牛蛭素B，急性毒性试验表明菲牛蛭没有明显的毒副作用，因此其具有显著的药用价值，迄今为止药典和地方标准均无收载，也无任何关于菲牛蛭指纹图谱的报道
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种菲牛蛭指纹图谱的測定方法。本专利技术所述指纹图谱的測定方法是采用高效毛细管电泳法测定菲牛蛭的指纹图-i'Tfeレ曰。本专利技术所述指纹图谱的測定方法供试液配制方法及电泳条件优选为 供试液配制方法菲牛蛭药材干品粉碎过4号药典筛，称取样品I. Og，精密称定，精密加入去离子水6ml，混匀后超声30min，离心，取上清液过O. 22 μ m滤膜，滤液作为高效毛细管电泳供试品溶液备用； 电泳条件内径为75 μ m,有效柱长度为50cm的石英毛细管柱作为分离通道,缓冲液为25mmol/LNa2HP04-120mmol/L三轻甲基氨基甲烧_16mmol/L十二烧基硫酸钠,用I mol/LNaOH调PH值至12. 0，运行电压17KV，柱温25°C，检测波长254nm，进样參数O. 5psi X 6sec，运行时间27min。为证实该方法准确可靠，重复性好，能够用于控制菲牛蛭药材的内在质量进行如下方法学验证 I仪器与试药 Beckman Coulter P/ACETM MDQ 毛细管电泳仪(美国 BECKMAN COULTER 公司)，配有 PDA检测器与控温系统，仪器控制与数据采集通过Beckman 32 Karat 5. O工作站进行；未涂层石英毛细管(内径75 μ m,有效长度50cm，河北永年锐沣色谱器件有限公司);PH计(PHS-3C，上海精密科学仪器有限公司)；KQ5200B超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；分析天平(AG135，METTLER TO- LED0) ；LXJ- II B低速大容量多管离心机(上海安亭科学仪器厂)；定时可调速漩涡混合器(XW-01，上海医大仪器厂)；恒温水浴锅(DK-S26，上海精宏实验设备有限公司)。磷酸氢ニ钠(分析纯，批号1200645，天津市科密欧化学试剂有限公司)；磷酸ニ氢钠(分析纯，批号1712351，天津市科密欧化学试剂有限公司)；三羟甲基氨基甲烷(Tris，纯度彡99. 9%，批号1004053，河北博海生物工程开发公司)；十二烷基硫酸钠(SDS，分析纯，批号1003032，河北博海生物工程开发公司)；氢氧化钠(分析纯，批号20100621，北京化工厂)；盐酸(分析纯，批号20100128，北京化工厂)；甲醇(色谱级，Fisher);实验用水为超纯水。菲牛蛭药材由南宁市科康生物科技有限责任公司提供，共十批(批号100501，100502，100511，100602，100611，100615，100709，100710，100724，100805)，经黑龙江中医药大学王喜军教授鉴定为Poecilobdella manillensis。2 方法与结果 2. I供试品溶液制备 菲牛蛭药材干品粉碎过4号药典筛，每批药材称取样品1.0 g，精密称定，精密加入去离子水6 mL，混匀后超声30 min，离心，取上清液过O. 22 μ m滤膜，滤液作为高效毛细管电泳供试品溶液备用。 2. 2毛细管电泳条件 内径为75 μ m,有效柱长度为50cm的石英毛细管柱作为分离通道，开机运行前,毛细管依次用甲醇(20 psiX2 min)、水(20 psiX2 min),O. I mol/LHCL (20 psiX2 min)、水(20 psiX2 min)、0. I mol/LNaOH (20 psiX2 min)、水(20 psiX3 min)冲洗，缓冲液(20psiXlO min)平衡,两次进样间用 0· I mol/LNaOH (20 psi X 2 min)、水(20 psi X 3 min)冲洗，缓冲液(20 psiXlO min)平衡，每进样两次更换一次缓冲液；缓冲液为25 mmol/LNa2HPO4-120 mmol/L三羟甲基氨基甲烷-16 mmol/L十二烷基硫酸钠(I mol/LNaOH调PH值12.0)，运行电压17 KV，柱温25で，检测波长254 nm，进样參数0.5 psi X6 sec，运行时间27 min，所有溶液使用前均用0. 22 μ m微孔滤膜过滤。2.3方法学考察 2.3. I精密度试验 按2. I要求取100611批药材样品制备供试品溶液，在上述毛细管电泳条件下重复进样5次，直观观察各指纹图谱的全貌无明显变化，重叠良好，用相似度计算(中位数相关系数法)，在同一台仪器测得的指纹图谱与其共有模式图谱的相似度均大于0. 99，表明仪器精密度良好。2.3.2稳定性试验 按2. I要求取100611批药材样品制备供试品溶液，在上述毛细管电泳条件下，分别在O, 2，4，8，12，16，20，24 h进样分析，直观观察各指纹图谱的全貌无明显变化，重叠良好，用相似度计算(中位数相关系数法)，在同一台仪器测得的指纹图谱与其共有模式图谱的相似度均大于0. 98,表明样品在24 h内稳定。2.3.3重复性试验 取100611批药材样品5份，按2. I要求分别制备供试品溶液，在上述毛细管电泳条件下进样分析，直观观察各指纹图谱的全貌无明显变化，重叠良好，用相似度计算(中位数相关系数法)，在同一台仪器测得的指纹图谱与其共有模式图谱的相似度均大于0. 98，表明方法重现性良好。指纹图谱的建立及相似度分析 2.4.1指纹图谱的建立 取10批菲牛蛭药材样品，按2. I要求制备供试品溶液，在上述毛细管电泳条件下进样分析，得到10批药材的指纹图谱，见图1，并采用国家药典委员会开发的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”软件对10批药材的指纹图谱进行分析，以S3为參照指纹图谱，见图2，采用中位数相关系数法对各指纹图谱色谱峰进行了多点校正和自动匹配，生成广西菲牛蛭药材共有模式的对照指纹图谱，见图2，其中共有色谱峰13个，以出峰稳定，峰面积较大的5号色谱峰为參照峰。指纹图谱相似度分析 采用国家药典委员会开发的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”软件对10批药材的指纹图谱进行分析，以S3为參照指纹图谱，见图2，采用中位数相关系数法对各指纹图谱色谱峰进行了多点校正和自动匹配，生成广西菲牛蛭药材共有模式的对照指纹图谱，见图2，然后进行了匹配数据见表I和相似度计算，10批菲牛蛭药材指纹图谱与对照指纹图谱的相似度见表2。表I 10批菲牛蛭药材指纹图谱与对照指纹图谱匹配数据 I f: : mm I si I s I S3 I ss s* s m st Si· its***J iV4;l M >-!!,·, I y W-I ' Λ-| IIiLSM Hl 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种菲牛蛭药材的指纹图谱测定方法，该方法采用高效毛细管电泳法测定其指纹图谱。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：姜新刚，王宗权，贾继明，赵韶华，何慧民，马静，杨超，
申请(专利权)人：河北以岭医药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：
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