本发明专利技术公开了一种肝癌特异性基因-病毒及其应用。该病毒为溶瘤腺病毒，其早期基因E1分为E1A、E1B，所述E1A的启动子被肝癌特异性启动子取代，优选为被肝癌特异甲胎蛋白启动子取代，且该病毒携带抗癌基因。所抗癌基因为SOCS3、HCCS-1、TSLC-1、IL-24、MnSOD、或TRAIL。优选为所抗癌基因为IL-24。本发明专利技术的肝癌特异性基因-病毒，用于肝癌的特异性治疗药物，具有很高的靶向抗肝癌作用，对正常细胞基本无影响，对多数其它癌症细胞作用也很小。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及癌症的祀向基因-病毒治疗(Cancer Targeting Gene-Viro-Therapy,CTGVT)，特别涉及肝癌靶向基因-病毒治疗(CTGVT-LC)，具体涉及肝癌特异性基因-病毒及其应用。
技术介绍
1999-2001年，刘新垣创建了一种癌症治疗策略，叫癌症的靶向基因-病毒治疗(Cancer Targeting Gene-Viro-Thearpy, CTGVT),它是将抗癌基因插入到溶瘤病毒(oncolytic virus, 0V)而成，故 CTGVT 策略即 OV-(gene)策略或 Gene Armed OncolyticVirus Therapy(GAOVT)策略，它也是OV-(gene)，它把基因治疗和溶瘤病毒治疗各自的优势结合起来了，因为溶瘤病毒本身就有抗癌作用，又可能特异性地在癌细胞中复制数百倍，插入其中的抗癌基因也可随之复制数百倍，故其抗癌效果大大地增加，既比相应单独基因治疗好很多，也比相应单独溶瘤病毒治疗好很多，故现在成为国际热点课题。基因治疗，虽然2009年被Science评为全球十大科学成果之一，但那都是对单基因缺乏的遗传病所获得的成果，对癌症这样复杂的基因突变疾病，基因治疗的抗癌效果，远不如CTGVT (GAOVT)的抗癌效果，基因治疗为Ad-(gene)，其中所用的载体Ad无靶向性，无复制能力(即非复制型Ad)。在CTGVT，即OV-(gene))的构建和应用中，OV(Oncolytic Virus)主要决定其靶向性，可用各式各样的方法加以修饰，使它只特异性靶向肝癌或其它癌症。Gene主要决定杀伤性，光OV的杀伤作用不强，故需加杀伤基因增强其杀伤性，故需构成OV-(gene)，即CTGVT (GAOVT)才能构成很强的抗癌药物，对CTGVT还可作更多改进，如将两个CTGVT合用，其抗癌作用更强，如专门靶向癌症干细胞，则有根除癌症，有彻底消灭癌症的可能性。溶瘤病毒(Oncolytic Virus，0V)，是指在肿瘤中特异表达和感染复制的病毒，有癌细胞靶向性，还能复制，但非肝癌特异性。任何病毒(Adenovirus (腺病毒)，SimplexHerpes Virus (HSV-1)(疱疹病毒)，Pox Virus (痘苗病毒))经改造后均可构成为OV。溶瘤病毒携带gene则变成0V-gene,但Ad-gene即基因治疗(其中Ad无祀向性,无复制倍增能力)。图I为腺病毒(Adenovirus, Ad)基因组图，简称Ad基因组图。腺病毒有早期基因E1、E2、E3、E4及晚期基因LI、L2、L3、L4、L5。控制了早期基因的表达，就控制了整个Ad的复制和感染。其中早期基因El又分为E1A、E1B，最重要的是E1A，其次是E1B，E1A的天然启动子被肝癌特异性的启动子替换，则此腺病毒只能在肝癌细胞中感染复制。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种肝癌特异性基因-病毒及其应用。本专利技术采用如下技术方案将Ad ElA中，用肝癌特异甲胎蛋白启动子(a -Feto pertein, AFP)等取代其天然启动子，即Ad .enAFP *E1A，控制腺病毒(Adenovirus，Ad)的表达，则此Ad AFP ElA只能在肝癌中感染复制，最后将肝癌消灭。本方法是用AFP启动子替换ElA本身的天然启动子，则此腺病毒变成了肝癌特异性溶瘤腺病毒，可简写为(LC) -OncoAd,构建Ad* AFP* ElA是本专利的根本要求，此外，ElA中的24bp也可删除，在ElB有两个基因，S卩19KD及55KD，或者缺失55KD，或者19KD及55KD双缺失均可，则构成A ElB, A为删除之意，即ElB全部被删了。只要根本要求Ad AFP ElA存在就行，我们所用AFP都为enAFP (即AFP用SV40的增强子强化(enhance)其启动子能力，写成enAFP)(当然AFP也可换成其它肝癌特异性启动子)。要构成CTGVT-LC，当然首先还要在(LC)OncoAd然后在其中加上肝癌特异性的抗癌基因(包括抑癌基因)。至于基因方面，对肝癌来说，或者加入肝癌特异性抗癌基因，包括肝癌特异性抑癌基因，如 S0CS3、HCCS-I、TSLC-I，构成 Ad enAFP ElA …E1B_(S0CS_3)。如上述Ad enAFP ElA…E1B_(S0CS_3)的抗癌能力还不够强，则可在上述同样(LC)OncoAd中加上抗癌作用很强的但非肝癌特异性抗癌基因，如IL-24、MnS0D、TRAIL等等与之合用，即 Ad enAFP ElA ⑴ E1B_(S0CS_3)与 Ad enAFP ElA ⑴ E1B-(IL_24)共同使用于肝癌治疗。此夕卜，还发现Ad enAFP ElA AElB-(IL-24)，也算 CTGVT-LC，这是因为 AElB与IL-24合用可能特异地全部消灭小鼠移植性肝癌，还可对未经瘤内注射的远端移植性肝癌也起到治疗作用，抗肝癌率达80%以上。本专利技术的肝癌特异性基因-病毒，将抗癌基因插入到溶瘤病毒而制成，所述溶瘤病毒为溶瘤腺病毒，在一优选例中，ElA的天然启动子被肝癌特异性启动子所取代(如肝癌特异甲胎蛋白启动子)。根据本专利技术，所抗癌基因选自S0CS3、HCCS-U TSLC-I等肝癌特异性抗癌能力很强的基因，如其抗癌能力还不够强，可用抗癌能力特别强的基因加入相同的(LC)OncoAd载体中与之共同使用，如 IL-24、MnSOD、CD、Smac、GM-CSF、IFN、IL-12、p53、RNAi、microRNA、Caspase 3、Bax或TRAIL,如上述任何两个基因共同使用时,也可采用联接子(linker)将两个基因联接起来，成为一个基因使用，如TRAIL-linker-IL-24。本专利技术除ElA需 被AFP等肝癌特异性启动子所调控表达外，ElA及ElB均可进行各种改造，构成OV的双调控或三调控载体，虽然不改变其肝癌特异性靶向，但可增强其癌症靶向性和安全性(不过表达率可能有所降低)，如将ElB中55KD缺失则成为ElB ( A 55)，A表示缺失之意，如将ElB中的两个基因19KD及55KD全部缺失，则构成AE1B，ElA的24bp也可缺失构成ElB (A 24)，它靶向Rb缺失的肿瘤，可加强靶向Rb缺失的癌症，ElB也可被HIF(低氧诱导因子)，特异性决定于ElA被AFP控制其在肝癌中表达。附图说明图I为腺病毒基因组图。图2为实施例I涉及的基因组图。图3为实施例2涉及的基因组图。图4为实施例3涉及的基因组图。图5A为pAd-ElA(ANat.p)_AElB构建过程示意图，图5B为Ad. enAFP-ElA-A ElB-(IL-24)构建过程示意图。图6为实施例4的体外抗癌效果图。图7为实施例5体内抗癌效果图。图8为实施例6体外抗癌效果图，其中QSG-7701为肝正常细胞，H印G2、H印3B、Huh-7为肝癌细胞。图9为实施例7体内抗癌效果图。具体实施方案·癌症的革巴向基因-病毒治疗(CancerTargeting Gene-Viro-Therapy, CTGVT)是将抗癌基因加到溶瘤腺病毒中，即OV-g本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种肝癌特异性基因？病毒，其特征在于，所述基因？病毒是由肝癌特异性启动子替换腺病毒最关键的E1A基因的天然启动子，调控E1A表达，构成一种肝癌特异性溶瘤腺病毒，然后在其中插入肝癌特异性的抗癌基因而构成。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘新垣，韦睿成，章康健，曹欣，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：
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