得自涅斯捷连科氏菌(Nesterenkonia)的淀粉酶及其使用方法技术

本发明专利技术描述了涉及得自涅斯捷连科氏菌(Nesterenkonia)和相关属菌种的α-淀粉酶的组合物和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术所公开的是涉及得自涅斯捷连科氏菌属(Nesterenkonia spp.)的淀粉酶的组合物和方法。
技术介绍
淀粉由直链淀粉(15-30%w/w)和支链淀粉(70-85%w/w)的混合物组成。直链淀粉由a -I, 4-连接的葡萄糖单元的直链组成，分子量(MW)为约60，000至约800，000。支链淀粉是每24-30个葡萄糖单元含有a -I, 6分支点的支链聚合物；其MW可高达一亿。浓缩右旋糖浆形式的得自淀粉的糖目前通过酶催化法制备，该方法涉及(1)用a -淀粉酶将固体淀粉液化(或降低粘度)成平均聚合度为约7-10的糊精，以及(2)用淀粉葡萄糖苷酶(也称为葡萄糖淀粉酶或GA)将所得的液化淀粉(即淀粉水解物)糖化。所得的糖浆具有高葡萄糖含量。大部分商业生产的葡萄糖浆随后通过酶法异构化为称为异糖浆(isosyrup)的右旋糖/果糖混合物。a -淀粉酶(EC 3. 2. I. I)通过随机裂解内部a -I, 4_糖苷键而水解淀粉、糖原和相关的多糖。多年以来，a-淀粉酶已用于多种不同的目的，包括淀粉液化、纺织脱浆、造纸和纸浆行业的淀粉改性以及用于酿造。这些酶也可用于在盘碟洗涤和衣物洗涤中除去淀粉污溃。衣物和盘碟污垢在组成上有很大差异，并因此在被有效和高效除去的能力方面大不相同。涅斯捷连科氏菌属是归类为放线菌纲放线菌目微球菌亚目微球菌科的革兰氏阳性菌。在2004年首次描述的新疆涅斯捷连科氏菌(Nesterenkonia xinjianensis)从中国新疆省高盐土壤样品中分离得到(Wen-Jun Li et al. (2004) Int. J. Syst. Evol.Microbiol. 54:837-41)(李文军等人，2004年，《国际系统与进化微生物学杂志》，第54卷第837-841页)。新疆涅斯捷连科氏菌不被认为是产淀粉酶杆菌。事实上，模式菌株的菌种描述指示该生物体的淀粉水解反应呈阴性，从而表明未产生或未分泌淀粉酶。
技术实现思路
本专利技术的组合物和方法涉及得自涅斯捷连科氏菌的阿尔法(a )-淀粉酶和相关的a -淀粉酶，它们在本文中统称为AmyNEST。在一个方面，提供了分离的AmyNEST多肽。在一些实施例中，AmyNEST多肽在异源生物体中表达。在特定的实施例中，AmyNEST多肽作为分泌的多肽在异源生物体中表达。在一些实施方案中，AmyNEST多肽与序列标识号11具有至少57%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或甚至至少99%的氨基酸序列同一性。在一些实施例中，AmyNEST多肽与序列标识号11具有至少57%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或甚至至少99%的总体氨基酸序列同一性，同时包含碳水化合物结合模块(CBM) 25 (I)和/或CBM 25(2)的氨基酸序列。在一些实施例中，AmyNEST多肽与序列标识号11具有至少57%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或甚至至少99%的总体氨基酸序列同一性，同时包含与CBM 25 (I)和/或CBM 25(2)具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或甚至至少99%序列同一性的氨基酸序列。在特定的实施例中，AmyNEST多肽包含与CBM 25(1)具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或甚至至少99%序列同一性的氨基酸序列以及与CBM 25 (2)具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或甚至至少99%序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，在AmyNEST多肽中与CBM 25(1)和CBM 25 (2)相关的氨基酸序列通过连接基分隔开。在一些实施例中，提供了包含与序列标识号11的氨基酸序列具有至少60%氨基酸序列同一性的氨基酸序列的AmyNEST多肽。在特定的实施例中，该多肽与序列标识号11的氨基酸序列具有至少70%的氨基酸序列同一性。在特定的实施例中，该多肽与序列标识号11的氨基酸序列具有至少80%的氨基酸序列同一性。在特定的实施例中，该多肽与序列标识号11的氨基酸序列具有至少90%的氨基酸序列同一性。在特定的实施例中，该多肽与序列标识号11的氨基酸序列具有至少95%的氨基酸序列同一丨丨生。在一些实施例中，该多肽包含碳水化合物结合模块(CBM) 25 (I)的氨基酸序列(序列标识号12)和/或CBM 25(2)的氨基酸序列(序列标识号13)。在特定的实施例中，该多肽包含CBM 25(1)的氨基酸序列和CBM25(2)的氨基酸序列，这两者通过具有序列标识号19的氨基酸序列的连接基分隔开。在一些实施例中，该多肽具有a -淀粉酶活性，其可例如通过本文所述的检测分析法测定。在另一方面，提供了包含AmyNEST多肽的组合物。在一些实施例中，该组合物为清 洁组合物。在一些实施例中，该组合物有效除去衣物、盘碟或织物的淀粉污溃。在另一方面，提供了一种用于从表面除去淀粉污溃的方法，所述方法包括在存在包含有效量的AmyNEST多肽的水性组合物的情况下温育该表面，让多肽水解存在于淀粉污溃中的淀粉组分，以形成溶于水性组合物的较小的淀粉源分子，从而从该表面上除去淀粉污溃。在一些实施例中，该表面为纺织物表面。在一些实施例中，该表面在盘碟上。在一些实施例中，该表面为弄脏的硬质表面。在另一方面，提供了具有淀粉酶活性的多肽的表达方法，包括构建表达载体，该表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸编码连接到编码AmyNEST多肽的多核苷酸的信号序列；将该表达载体引入宿主细胞，表达该多肽；回收表达的多肽。在一些实施例中，将AmyNEST多肽引入异源宿主细胞。在一些实施例中，将AmyNEST多肽作为分泌多肽而表达。在另一方面，提供了包含编码AmyNEST多肽的多核苷酸序列的载体。编码AmyNEST多肽的序列可以可操作地连接到启动子或连接到其他控制元件。在另一方面，提供了包含编码AmyNEST多肽的多核苷酸的宿主细胞或包含这种多核苷酸的载体。分离的宿主细胞可为原核细胞或真核细胞。分离的宿主细胞可以为杆菌(如枯草芽孢杆菌(B. subtilis)、地衣芽孢杆菌(B. Iicheniformis)、迟缓芽孢杆菌(B. Ientus)、短芽胞杆菌(B. brevis)、嗜热脂肪地芽抱杆菌(Geobacillus stearothermophiIus)(之前称为 Bacillus stearothermophilus)、嗜喊芽抱杆菌(B. alkalophilus)、解淀粉芽抱杆菌本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.02.18 US 61/305,6741.一种分离的多肽，所述多肽包含的氨基酸序列与序列标识号11的所述氨基酸序列具有至少60%的氨基酸序列同一'丨生。2.根据权利要求I所述的分离的多肽，与序列标识号11的所述氨基酸序列具有至少70%的氨基酸序列同一'丨生。3.根据权利要求2所述的分离的多肽，与序列标识号11的所述氨基酸序列具有至少80%的氨基酸序列同一性。4.根据权利要求3所述的分离的多肽，与序列标识号11的所述氨基酸序列具有至少90%的氨基酸序列同一性。5.根据权利要求4所述的分离的多肽，与序列标识号11的所述氨基酸序列具有至少95%的氨基酸序列同一'丨生。6.根据权利要求1-5中任一项所述的分离的多肽，包含碳水化合物结合模块(CBM) 25 (I)的所述氨基酸序列(序列标识号12)和/或CBM25 (2)的所述氨基酸序列(序列标识号13)。7.根据权利要求6所述的分离的多肽，包含的CBM25(1)的所述氨基酸序列和CBM25(2)的所述氨基酸序列被具有序列标识号19的所述氨基酸序列的连接基分隔开。8.根据权利要求1-7中任一项所述的分离的多肽，具有α-淀粉酶活性。9.一种包含根据权利要求1-8中任一项所述的多肽的组合物。10.根据权利要求9所述的组合物，其中所述组合物对于从衣物、盘碟或纺织物除去...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·E·琼斯，M·科尔克曼，
申请(专利权)人：丹尼斯科美国公司，
类型：发明
国别省市：