一株邻甲酚降解菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株邻甲酚降解菌及其应用。本发明专利技术所提供的一株邻甲酚降解菌TJKYLJF‑01属于假单胞菌属(Pseudomonas sp.)，保藏编号为CGMCC NO.10177。该菌为革兰氏阳性菌，菌落为白色，边缘整齐，呈圆形，光滑湿润，中心凸起，可以利用邻甲酚作为唯一碳源、氮源和能源进行生长繁殖，在48h内将1000mg/L的邻甲酚降解完全，并且能耐受浓度高达1500mg/L的邻甲酚，对较高浓度邻甲酚工业废水具有优良的降解效果，该菌可应用于焦化废水、或煤化工废水、或石油化工废水的生物强化处理，应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】
一株邻甲酚降解菌及其应用
本专利技术涉及微生物及生物降解
，具体地，涉及一株邻甲酚降解菌及其应用，尤其是在焦化、煤化工、石油化工废水处理中的应用。
技术介绍
邻甲酚又称邻甲苯酚、邻甲基苯酚、2-甲基苯酚、2-羟基-1-甲苯、2-甲酚、邻羟基甲苯；邻甲酚是甲酚的第二种异构体。邻甲酚主要用作合成树脂，还可用于制作农药二甲四氯除草剂、医药上的消毒剂、香料和化学试剂及抗氧剂等，其下游产品主要有合成树脂邻甲酚酚醛树脂、邻甲基水杨酸、对氯邻甲苯酚、邻羟基苯甲醛、2-甲基-5-异丙基酚和抗氧剂等。此外还可用于癸二酸生产的稀释剂、消毒剂以及增塑剂等邻甲酚是典型的含酚苯系化合物，广泛存在于煤焦油、煤气、和石油中。邻甲酚有苯酚气味，有毒，有腐蚀性，经呼吸道吸入后能引起全身中毒。邻甲酚难于生物降解，易通过焦化、煤化工、石油化工废水的外排污染生态环境，对人类健康具有巨大的潜在危害。在废水处理过程中，生物处理法比物化法具有诸多优势，如处理成本较低，条件温和，不产生二次污染等。然而，传统的生物处理技术在一些难处理的工业废水中很难达到环保要求，常规的活性污泥对废水中的难降解物质如吡啶、喹啉、萘、酚类等无计可施。近年来，生物强化技术通过在活性污泥中加入特定功能微生物，提高原有活性污泥对目标污染物的去除效能，大大提高了污水处理能力，因而越来越引起人们的重视。目前，国内外已有部分学者筛选出对邻甲酚具有高效降解性能的菌株，如假单胞菌(Pseudomonassp.)、产硫酸杆菌(Thiobacillus)、副球菌属(Paracoccussp.)等，这些研究大多仅停留在实验室阶段。到目前为止，国内外有部分学者研究表明假单胞菌(Pseudomonassp.)可以降解苯甲酸钠、吡啶和多氯联苯等多种芳香化合物，但未见其降解邻甲酚的报道。焦化废水、煤化工废水和石油化工废水中含有一定浓度的邻甲酚，而邻甲酚属于难生化降解有机物，因此仅靠生物处理环节中的普通活性污泥很难实现对邻甲酚的有效降解。
技术实现思路
本专利技术的目的在于弥补现有技术中的缺陷，提供一株邻甲酚降解菌，实现其对焦化废水、煤化工废水和石油化工废水的生物强化处理。本专利技术所提供的邻甲酚降解菌TJKYLJF-01源于焦化废水处理站周边的土壤。以邻甲酚作为唯一碳源、氮源和能源进行生长繁殖，在邻甲酚无机盐培养基中对土壤中的菌群进行驯化培养，并通过平板划线分离纯化得到。本专利技术所提供的邻甲酚降解菌为革兰氏阳性菌，菌落为白色，边缘整齐，呈圆形，光滑湿润，中心凸起。经16SrRNA鉴定为假单胞菌(Pseudomonassp.)，命名TJKYLJF-01。该菌株于2014年12月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏编号为CGMCCNo.10177，分类名为假单胞菌(Pseudomonassp.)本专利技术所提供的邻甲酚降解菌TJKYLJF-01的培养条件为，将其接种于培养基中，温度为25-35℃，初始pH为7-9，接种量为1-3％，摇床转速为100-150rpm。所述培养基的配方为，K2HPO4·12H2O2.24g，KH2PO42.74g，(NH4)2SO41g，MgCl2·6H2O0.2g，NaCl0.1g，FeCl3·6H2O0.02g，CaCl20.01g，2mL微量元素储备液，补足蒸馏水至1000mL；所述微量元素储备液组分为MnSO4·H2O0.1g，ZnSO4·7H2O0.12g，H3BO30.07g，Na2MoO4·H2O0.04g，CuSO4·5H2O0.02g，CoCl20.04g，补足蒸馏水至1000mL。本专利技术的邻甲酚降解菌TJKYLJF-01能够耐受浓度≤1500mg/L的邻甲酚。含有本专利技术所述邻甲酚降解菌TJKYLJF-01的菌剂属于本专利技术的保护范围。本专利技术提供了邻甲酚降解菌TJKYLJF-01或其发酵液或含有其的菌剂在降解邻甲酚中的应用。上述应用中，控制邻甲酚在体系中的浓度≤1500mg/L；最佳浓度为1000mg/L；降解过程的工作条件为：温度15-40℃，优选25-35℃，最优选30℃；pH值5-9，优选pH值7-8。降解过程中，若振荡降解体系，例如振荡转速为100-150r/min时，能满足邻甲酚降解菌TJKYLJF-01对溶氧的需求，提高TJKYLJF-01菌对邻甲酚降解效率。本专利技术提供了邻甲酚降解菌TJKYLJF-01或其发酵液或含有其的菌剂在净化工业废水中的应用。所述的工业废水为焦化废水、煤化工废水和石油化工废水中的一种。本专利技术的邻甲酚降解菌TJKYLJF-01能利用邻甲酚作为唯一碳源、氮源和能源进行生长繁殖，在48h内将1000mg/L的邻甲酚降解完全。本专利技术提供了邻甲酚降解菌TJKYLJF-01或其发酵液或含有其的菌剂在环境清洁中的应用。本专利技术的邻甲酚降解菌TJKYLJF-01能利用邻甲酚作为唯一碳源、氮源和能源进行生长繁殖，在48h内将1000mg/L的邻甲酚降解完全。邻甲酚降解菌TJKYLJF-01能耐受浓度高达1500mg/L的邻甲酚，对较高浓度邻甲酚工业废水具有优良的降解效果，该菌可应用于焦化废水、煤化工废水和石油化工废水的生物强化处理，应用前景广阔。附图说明图1为邻甲酚降解菌TJKYLJF-01的生长与邻甲酚降解效果关系图。图2为邻甲酚初始浓度对邻甲酚降解菌TJKYLJF-01降解邻甲酚的影响图。图3为培养温度对邻甲酚降解菌TJKYLJF-01降解邻甲酚的影响。图4为初始pH值对邻甲酚降解菌TJKYLJF-01降解邻甲酚的影响图。图5为接种量对邻甲酚降解菌TJKYLJF-01降解邻甲酚的影响图。图6为摇床转速对邻甲酚降解菌TJKYLJF-01降解邻甲酚的影响图。图7为邻甲酚降解菌TJKYLJF-01对添加较高浓度邻甲酚的焦化废水的强化处理效果图。图8为邻甲酚降解菌TJKYLJF-01对添加较高浓度邻甲酚的煤化工废水的强化处理效果图。图9为邻甲酚降解菌TJKYLJF-01对添加较高浓度邻甲酚的石油化工废水的强化处理效果图。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。在不背离本专利技术精神和实质的情况下，对本专利技术方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的化学试剂均为常规市售试剂，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。实施例1邻甲酚降解菌TJKYLJF-01的分离、鉴定及其对邻甲酚的降解性能1、菌株的分离、纯化(1)菌种来源菌源采自焦化废水处理站周边的土壤，呈黑褐色，采集距表层4-8cm的土壤样品6份。(2)菌株的分离纯化将采集的土样加入无菌蒸馏水空曝48h，静置后取10mL上清液接种于90mL含300mg/L邻甲酚的LB培养基(蛋白胨1％，氯化钠1％，酵母抽提物0.5％)中，在30℃和150r/min活化培养24h。取5mL培养液转接至含邻甲酚300mg/L的无机盐培养基中，同样条件驯化培养2-3d，然后取5mL培养液移接至新鲜邻甲酚无机盐培养基，如此反复3次，其中邻甲酚浓度分别为300、500、1000mg/L；将含邻甲酚1000mg/L的驯化液按不同比例稀释本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株邻甲酚降解菌(Pseudomonas sp.)TJKYLJF‑01，其保藏编号为CGMCC NO.10177。

【技术特征摘要】
1.一株邻甲酚降解菌(Pseudomonassp.)TJKYLJF-01，其保藏编号为CGMCCNO.10177。2.如权利要求1所述的邻甲酚降解菌TJKYLJF-01，其特征在于，其培养条件为，将其接种于培养基中，温度为25-35℃，初始pH为7-9，接种量为1-3％，摇床转速为100-150rpm。3.如权利要求2所述的邻甲酚降解菌TJKYLJF-01，其特征在于，所述培养基的配方为，K2HPO4·12H2O2.24g，KH2PO42.74g，(NH4)2SO41g，MgCl2·6H2O0.2g，NaCl0.1g，FeCl3·6H2O0.02g，CaCl20.01g，2mL微量元素储备液，补足蒸馏水至1000mL；所述微量元素储备液组分为MnSO4·H2O0.1g，ZnSO4·7H2O0.12g，H3BO30.07g，Na2MoO4·H2O0.04g，CuSO4·5H2O0.02g，CoCl20.04g，...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛二军，王万超，李剑南，何骜，
申请(专利权)人：天津凯英科技发展股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12