The invention belongs to the field of biological medicine, and discloses a double stranded asymmetric small nucleic acid interference molecule asiRNA which specifically inhibits tumor apoptosis suppressor gene Bcl2 and uses thereof. The asiRNA is designed by using the following method, and obtained by chemical synthesis of Bcl2 gene: starting from the symmetry of small molecule siRNA by RNA interference, will siRNA sense or antisense strand of 5 'or 3' end of the reduction of the 1-5nt base, and in the 3 'end of each chain with two prominent DNA dTdT the formation of two nucleotides, chain base length is not the same, each chain 3' end two DNA single strand dTdT was suspended, can induce RNA interference double stranded small nucleic acid molecules asiRNA asymmetric interference. Compared with the conventional siRNA, the asiRNA of the invention is more stable and more active in inhibiting the expression of Bcl2, and can be used in the preparation of antitumor drugs.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域,涉及特异性抑制肿瘤凋亡抑制基因Bcl2的双链不对称小核酸干扰分子asiRNA及其应用。
技术介绍
癌症是人类健康的第二大杀手,目前临床上使用化疗药物过程中经常出现抗药性,癌细胞往往杀不死,肿瘤经常复发转移而导致死亡。其中很重要的原因之一是这部分癌细胞中的凋亡抑制基因(Bcl2基因)高表达,使肿瘤细胞抗凋亡而不死亡,从而常出现肿瘤复发转移。因此抑制肿瘤Bcl2基因表达的作用是提高化疗药物疗效、彻底杀死癌细胞和防止肿瘤复发转移的重要途径之一。国外已经有采用反义寡核苷酸技术抑制肿瘤Bcl2基因 的创新药物(G3139)进入三期临床研究,但是对慢性淋巴细胞白血病和黑色素瘤的三期临床研究结果不理想而没有得到美国FDA的批准,对食道癌、多发性骨髓瘤、前列腺癌、小细胞肺癌、乳腺癌、肠癌的三期临床研究还在进行中,这可以证明对Bcl2基因的作用靶点没有问题,只是反义寡核苷酸技术敏感性可能低于小核酸干扰技术药物,疗效仍需要提高。而一般文献报道认为小核酸干扰技术药物比反义寡核苷酸技术敏感性要高10-1000倍,毒副作用却明显减小,因此国际上已经出现用小核酸干扰技术药物取代反义寡核苷酸技术药物的趋势。目前小核酸干扰技术(RNAi)是生物科技和创新药物研究中最热门的领域之一,它已经吸引了许多大型制药公司的投资。2006年赢得诺贝尔医学奖的科学成果就是以小核酸干扰技术为基础的。科学界普遍认为,通过利用小核酸干扰技术,有可能产生出前景不错的治疗药物,用于治疗癌症这类采用通常技术难以提高疗效的疾病。目前国际上已有12个对称性小核酸干扰siRNA药物进入一到三 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.特异性抑制肿瘤凋亡抑制基因Bcl2的双链不对称小核酸干扰分子asiRNA,其特征在于所述的asiRNA是通过如下方法设计,并经化学合成得到的从Bcl2基因对称性小核酸干扰分子siRNA出发,通过将siRNA正义链或反义链5’或3’端裁减l_5nt碱基,形成两条链碱基长度不一致,每条链3’端有两个脱氧核糖核酸dTdT呈单链悬挂,具有14-21nt的能诱发RNA干扰的双链不对称小核酸干扰分子asiRNA。2.根据权利要求I所述的特异性抑制肿瘤凋亡抑制基因Bcl2的双链不对称小核酸干扰分子asiRNA,其特征在于所述的asiRNA选自下列七种asiRNA的其中一种或几种A :5’ GG AGG CUG GGA UGC CUU U dTdT 3’3’ dTdT GCC UCC GAC CCU ACG GAA A 5’ ;B :5’ CUG GGA UGC CUU U dTdT 3’3’ dTdT GCC UCC GAC CCU ACG GAA A 5’ ;C :5’ G CUG GGA UGC CUU U dTdT 3’3’ dTdT GCC UCC GAC CCU ACG GAA A 5’ ;D :5’ GG CUG GGA UGC CUU U dTdT 3’3’ dTdT GCC UCC GAC CCU ACG GAA A 5’ ;E :5’ AGG CUG GGA UGC CUU U dTdT 3’3’ dTdT GCC UCC GAC CCU ACG GAA A 5’ ;F :5’ G AGG CUG GGA UGC CUU U dTdT 3’3’ dTdT GCC UCC GAC CCU ACG GAA A 5’ ;G :5’ CGG AGG CUG GGA UGC CUU U dTdT 3’3’ dTdT C UCC GAC CCU ACG GAA A 5’。3.根据权利要求2所述的特异性抑制肿瘤凋亡抑制基因Bcl2的双链不对称小核酸干扰分子asiRNA,其特征在于所述的asiRNA为F :5’ G AGG CUG GGA UGC CUU U dTdT 3’ 3’ dTdT GCC UCC GAC CCU ACG GAA A 5’。4.根据权利要求I所述的特异性抑制肿瘤凋亡抑制基因Bcl2的双链不对称小核酸干扰分子asiRNA,其特征在于所述的asiRNA是通过如下方法设计,并经化学合成得到的从Bcl2基因对称性小核酸干扰分子siRNA出发,通过将siRNA正义链或反义链5’或3’端裁减l_5nt碱基,并采用胆固醇、硫代、甲基化、磷酸化、氟代对正义链或/和反义链进行化学修饰,形成两条链的碱基长度不一致,每条链3’端有两个脱氧核糖核酸dTdT呈单链悬挂,具有14_21nt的能诱发RNA干扰的双链不对称小核酸干扰分子asiRNA。5.根据权利要求4所述的特异性抑制肿瘤凋亡抑制基因Bcl2的双链不对称小核酸干扰分子asiRNA,其特征在于所述的asiRNA选自下列九种asiRNA的其中一种或几种H:5’ choI-GAGGCUGGGAUGCCUUUdTdT 3’ 3’ dTdTGCCUCCGACCCUACGGAAA 5’ ;I :5’ chol-G-s-A-s-G-s-GCUGGGAUGC-s-C-s-(FU)-s-(FU)-S-(FU)dTdT 3’ 3’ dTdT GCCUCCGACCCUACGGAAA 5’ ;J :5’ chol-(mG)(mA)(mG)GCUGGGAUGCC(FU)(FU)(FU)dT-s-dT 3’ 3’ dTdT GCCUCCGACCCUACGGAAA 5’ ;K :5’ choI-GAGGC (FU)GGGA(FU)GCC(FU)(FU)(FU)dT-s-dT 3’ .3’ dTdT GCCUCCGACCCUACGGAAA 5’ ;L :5’ chol-G-s-A-s-GGCUGGGAUGCC(FU)(FU)(FU)dT-s-dT 3’ 3’ dTdT GCCUCCGACCCUACGGAAA 5’ ;M :5’ choI-G-s-A-s-GGC(FU)GGGA(FU)GCC(FU)(FU)(FU)dT-s-dT 3’ 3’ dTdT GCCUCCGACCCUACGGAAA 5’ ;N :5,chol-(mG)(mA)(mG)GCUGGGAUGCC(mU)(mU)(mU)dT-s-dT 3, .3, dT-s-dT G-s-C-s-C-s-(mU)-s-C-s-CGACCCUACGGAAA-P 5,;.0:5,chol-(mG)(mA)(mG)GCUGGGAUGCC(mU)(mU)(mU)dT-s-dT 3, 3’ dT-s-dTGCC(mU)CCGACCC(mU)ACGGA(mA)A 5’ ;P :5,chol-(mG)(mA)(mG)GCUGGGAUGCC(mU)(mU)(mU)dT-s-dT 3, . 3’ dTdT GCCUCCGACCCUACGGAAA 5’ ; 其中,chol为胆固醇修饰、s为硫代修饰、m为甲基化修饰、P为磷酸化修饰、F为氟代修饰。6.根据权利要求5所述的特异性抑制肿瘤凋亡抑制基因Bcl2的双链不对称小核酸干扰分子asiRNA,其...
【专利技术属性】
技术研发人员:徐根兴,殷妍,陈旭,王庆晓,郭佳佳,张昌栋,傅更锋,樊燕蓉,吴稚伟,侯亚义,王建军,
申请(专利权)人:南京大学,
类型:发明
国别省市:
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