加工食品中的猪肉的检测法及其检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种作为检测抗体使用的多克隆抗体的制备方法，该多克隆抗体适用于特异性地、高性能且高灵敏度地通过免疫测定法对加热加工食品中猪肉的进行检测，不会引发非特异性反应。本发明专利技术还提供了一种使用该多克隆抗体进行简便的、高精度的检测法以及用于该检测方法的检测试剂盒。利用免疫层析法来检测试样中的检测对象物时，在一处或两处地方使用可特异性识别加热处理的猪肉中所含的23kD（分子量23,000）附近的蛋白质的多克隆抗体作为检测抗体，检测加热加工食品中来自猪肉的蛋白质。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及针对加工食品、特别是加热处理的加工食品中的猪肉的检测方法及其检测试剂盒。更具体地说，本专利技术涉及加工食品、特别是加热处理的加工食品中的来自动物种类的检测用抗原的制备方法，以及用该检测用抗原得到的抗体。
技术介绍
欧盟科学运营委员会在其意见中报告了牛脑海绵状病(BSE)等牛传染病对人传染的危险性，自此，BSE感染牛的肉骨粉在家畜饲料中使用的问题受到重视。另外，假冒品牌肉或伪装成品牌牛肉的问题以及用其它肉类伪装成牛肉的问题也是一般消费者所关心的问题。另一方面，食物变态反应患者会因食品中所含的食物变态反应原而引发哮喘、 皮炎、胃肠功能障碍、过敏性休克等各种变态反应症状，有时还有造成了非常严重的后果的病例。食物变态反应患者还有增加的倾向，消费者对于食品的安全性的关注也非常高。通常已知的含有食物变态反应原的代表性食品有谷类(荞麦、小麦等)、蛋类、肉类(牛、猪、鸡等)、鱼类(鲭鱼、沙丁鱼等)、牛乳类、甲壳类(蟹等)、软体动物类、豆类(花生、大豆等)、果实类(芒果等)、蔬菜类(蒜等)等，这些食物变态反应诱发食品中含有谷蛋白、明胶、酪蛋白、卵清蛋白、卵类粘蛋白、溶菌酶、α-乳清蛋白、β_乳球蛋白等食物变态反应诱发成分。加工食品中的很多食品或食物也含有变态反应原，目前的现状是无法简便地检测出它们。另外，对于进行了加工处理(加热、加压、酶解处理、冷冻、干燥、盐藏等)的食品，由于处理而使食品中的蛋白质成分发生分子结构性的改性或分子修饰。因此，为了简便地检测出加工食品中的这些成分，针对加工处理过的成分和未经加工处理的生鲜成分分别使用与其对应的适当的抗原或表位是非常重要的，这方面的探索和研究也得到了进展。例如，人们发现作为用于检测在高温、例如超过100°C的温度条件下加热处理过的存在于罐装食品或家畜用饲料等试样中的来自以牛、猪、鸡为代表的动物性组织的原料的检测试剂，人们已开发了一种具有标记抗体和载体的检测试剂，所述标记抗体是在120°C以上的温度下加热处理的上述来自动物性组织的原料中的血清白蛋白的抗体或其抗原结合性片段，并用标记物标记得到；所述载体具备固定有上述来自动物性组织的原料中的血清白蛋白的抗体或其抗原结合性片段的检测区域。也就是说，人们发现用加热改性的血清白蛋白作为免疫原对动物进行免疫所生产的抗体可特异性地识别该加热改性的血清白蛋白，而对非加热的血清白蛋白不显示交叉反应性，从而提供了一种用于检测试样中是否存在加热处理过的来自动物性组织的原料的方法(包含免疫层析法)。(参照专利文献I、专利文献2)将含有未改性和/或改性物质的食物变态反应原的混合物(蛋白质)对动物免疫所得到的IgE (免疫球蛋白E)抗体，以及使用该抗体检测食物变态反应原和食物变态反应诱发性食品的方法(包含免疫层析法)是公知的。(参照专利文献3)不仅如此，将已经保藏的特定细胞(加热的猪肉中的特定蛋白质对动物免疫所得的细胞)生产的单克隆抗体用于ELISA (免疫学测定的一种)方法中以检测加热处理的食品中的猪肉也是公知的。(参照专利文献4)由于该检测方法使用了由特定细胞(加热过的猪肉中的特定蛋白质对动物免疫所得的细胞)生产的单克隆抗体，因此可以准确地进行检测。然而，单克隆抗体的制备需要高额费用，因此该方法不适合在医疗领域中针对多数患者的普及。本专利技术人使用多克隆抗体代替上述单克隆抗体，利用免疫层析法进行了同样的试验。结果发现，其与加热食品中的猪肉以外的原料、如牛肉等有交叉反应性，在精度方面未能得到令人满意的结果。如上所述，在使用多克隆抗体通过免疫层析法检测试样中的检测对象物一加热食品中的猪肉时，可观察到会发生非特异性反应、无法充分抑制非特异性反应的问题依然存在。 另外，在通过免疫学测定法来检测食品中的变态反应原物质(蛋白质)时，所使用的检体稀释液含有TWeen20等表面活性剂或氯化钠等无机盐也是公知的(参照专利文献5)。现有技术文献专利文献专利文献I :日本特开2006-317226专利文献2 :日本特开2005-164583专利文献3 日本特开2003-155297专利文献4 :美国专利6288215专利文献5 :日本特开2009-08591
技术实现思路
本专利技术所要解决的问题本专利技术的目的在于提供一种来自检体的成分的制备方法，该成分可通过免疫测定法高性能且高灵敏度地检测加热加工食品中的猪肉，不会引发非特异性反应；还提供一种使用由该成分得到的多克隆抗体来进行的简便且高精度的检测方法，以及该检测方法使用的检查试剂盒。解决该问题的手段本专利技术涉及对加热加工食品中的来自猪肉的蛋白质进行免疫层析检测。本专利技术使用的展开液组成和试验试剂盒中使用的化学物质(生物物质以外)的组成是以往在免疫层析法中常用的试剂。例如，展开液是在纯净水或缓冲液中加入非离子性表面活性剂(例如Tween20> Triton-100等)和氯化钠,根据情况还加入酪蛋白(脱脂粉乳)等。本专利技术人意外地发现由生猪肉中提出的提取物、即生猪肉中所含的约50kD (分子量50，000)的蛋白质最为适合作为免疫用抗原用于制备在加热食品检测系统中使用的抗体。因此，本专利技术的用于检测来自加热加工食品中来自猪肉的蛋白质的免疫层析检测所使用的检测抗体(生物物质)特别适合于加热食品的检测系统。该检测抗体不仅与针对非加热食品中的来自猪肉的蛋白质的免疫层析检测系统中所用的检测抗体不同，也与以往公知的针对加热加工食品中的来自猪肉的蛋白质的免疫层析检测中所用的检测抗体(生物物质)不同。在确定了该检测抗体的基础上，本专利技术人首次完成了通过免疫层析法检查(探测)加热加工食品中有无猪肉的方法及其检查(检测)试剂盒。在本专利技术的加热食品的检测系统中，优选使用可特异性识别经过加热处理、例如在100°c以上的温度下加热处理的猪肉中所含的约23kD (分子量23，000)的蛋白质的多克隆抗体作为检测抗体。本专利技术提供下述(a)-(e)的免疫层析检测法、该方法中使用的抗体、检测装置，以及检测试剂盒。(a)本专利技术的第一方面涉及一种利用多克隆抗体作为检测抗体对来自加热加工食品中的猪肉的蛋白质进行免疫层析检测的方法，其中所述多克隆抗体可特异性识别经加热处理的猪肉中所含的分子量处于20kD (分子量20，000)到261^ (分子量26，000)范围内的 23kD (分子量23，000)附近的蛋白质，所述多克隆抗体是利用免疫用抗原对动物进行免疫得到的，所述免疫用抗原是由从生猪肉中提取的提取物的离子交换纯化组分中所含的处于40kD (分子量40，000)到601^ (分子量60，000)范围内的蛋白质，其具有在经过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)的考马斯染色分析时在50kD (分子量50，000)附近显示出强显色的分子量。(b)本专利技术的第二方面涉及一种多克隆抗体，该多克隆抗体可特异性识别经加热处理的猪肉中所含的分子量处于20kD (分子量20，000)到26kD (分子量26，000)范围内的23kD (分子量23，000)附近的蛋白质，所述多克隆抗体是利用免疫用抗原对动物进行免疫得到的，所述免疫用抗原是由从生猪肉中提取的提取物的离子交换纯化组分中所含的处于40kD (分子量40，000)到601^ (分子量60，000)范围本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.02.18 JP 2010-0341201.ー种利用多克隆抗体作为检测抗体对来自加热加工食品中的猪肉的蛋白质进行免疫层析检测的方法，其中所述多克隆抗体能特异性识别经加热处理的猪肉中所含的分子量处于20kD (分子量20，000)到26kD (分子量26，000)范围内的23kD (分子量23，000)附近的蛋白质，所述多克隆抗体是利用免疫用抗原对动物进行免疫得到的，所述免疫用抗原是由从生猪肉中提取的提取物的离子交換纯化组分中所含的处于40kD (分子量40，000)到.60kD (分子量60，000)范围内的蛋白质，所述蛋白质具有在经过十_■烧基硫酸纳_聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)的考马斯染色分析时在50kD (分子量50，000)附近显示出强显色的分子量。2.ー种多克隆抗体，利用免疫用抗原对动物进行免疫得到，所述免疫用抗原是由从生猪肉中提取的提取物的离子交换纯化组分中所含的处于40kD (分子量40，000)到60kD (分子量60，000)范围内的蛋白质，所述蛋白质具有在...

【专利技术属性】
技术研发人员：榊原雄広，首藤达也，岩本久彦，
申请(专利权)人：田中贵金属工业株式会社，
类型：发明
国别省市：