非对称多色荧光发夹探针链反应在病原菌检测中的应用制造技术

本发明专利技术涉及“非对称多色荧光发夹探针链反应在病原菌DNA检测中的应用”，属于生物技术检测领域。本发明专利技术联合非对称发夹探针链反应技术和FRET技术，建立了一种基于非对称多色荧光发夹探针链反应技术的病原菌检测技术。当体系中无靶序列存在时，发夹探针处于亚稳定状态，两基团构成FRET对，无荧光信号产生；而当靶序列加入反应体系触发链式聚合反应时，发夹结构打开，产生荧光信号，并且由于是线性放大，荧光信号强度与靶序列拷贝数成正比。在发明专利技术方法将高灵敏的多色荧光共振能量转移技术引入到链式反应中，从而建立一种简单、快速、灵敏的病原菌DNA直接检测方法，克服了原非对称发夹探针进行链式反应时琼脂糖凝胶电泳观察检测结果灵敏度较低的缺陷。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种生物反应技术，特别是涉及基于非对称多色荧光发夹探针链反应在病原菌检测中应用。
技术介绍
分子诊断学方法依据细菌核酸特征进行检测，为临床病原微生物快速检测带来了新契机。核酸分子固相杂交法、DNA测序法、毛细管电泳分析、基因芯片技术等检测方法的先后建立，将细菌分子检测方法提高到一个崭新的阶段，但是这些分子诊断学方法大多需要特殊的大型仪器，技术难度大，难以在临床中普及应用。因此，针对上述问题，如能开发出一种基于新型探针技术，对多种病原菌基因组进行并行检测的快速、特异、简便的分子诊断学方法，对推进分子诊断学技术的实用化显然具有十分重要的意义。Applied Gene Technologies公司的专利名称为“发夹形核酸探针技术”(NucleicAcid Hairpin Probes),专利号为6380377涉及到一种莖环形DNA探针技术,与标准的单链核酸探针相比结构更稳定，酶反应更高效，对错配更加敏感，产生了更少的非特异性靶位结合。这些优点都提高了基因分析的特异性。与传统的PCR、固相核酸杂交等技术相比，该技术具有更为突出的优点检测效率高，检测速度快，该技术同时进行分子识本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.非对称多色荧光发夹探针链反应在病原菌DNA检测中的应用，包括液相杂交链反应体系，所述反应体系中同时加入有非对称发夹探针I和非对称发夹探针2以及待测靶序列，其中非对称发夹探针1，包括回文序列、两条茎臂和连接于一条茎臂上的粘性末端，所述两条茎臂连接于回文序列的两端且具有互补的核酸序列，所述回文序列为与待测靶序列无关的序列，所述茎臂与其连接的粘性末端具有靶序列的互补核酸序列；其中非对称发夹探针2，包括回文序列、两条茎臂和连接于一条茎臂上的粘性末端，所述两条茎臂连接于回文序列的两端且具有互补的核酸序列，所述回文序列与其相连的一条茎臂具有靶序列，所述另一茎臂上相连的粘性末端具有和非对称发夹探针I中回文序列的互补核酸序列，所述非对称发夹探针I的5’端和3’端分别标记荧光受体分子和荧光供体分子或非对称发夹探针2的5’端和3’端分别标记荧光供体分子和荧光受体分子。2.根据权利要求I所述的应用，所述荧光供体分子和荧光受体分子分别标注于非对称发夹探针2的两端。3.根据权利要求2所述的应用，所述荧光供体分子为有机荧光染料FAM和HEX，荧光受体分子为BHQl。4.根据权利要求I所述的应用，所述非对...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏涵，梁盼盼，黄庆，府伟灵，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：