一种新型荧光探针及其制备方法和在检测6‑硫代鸟嘌呤中的应用技术

本发明专利技术公开了一种新型荧光探针及其制备方法和在检测6‑硫代鸟嘌呤中的应用。取dtpa，乙酸酐，吡啶，在65℃下缓慢搅拌加热24h。冷却至室温，过滤，无水乙醚洗涤，抽滤，真空干燥，得dtpaa。取dtpaa，三乙胺，DMF，胞嘧啶，恒温100℃加热搅拌24h。冷却到室温，过滤，真空干燥，得dtpa‑bis(cytosine)。取dtpa‑bis(cytosine)溶解于pH＝7.4的Tris‑HCl缓冲溶液中，并用此溶液洗涤Eu(NO

A new type of fluorescent probe and preparation method and detection in the 6 thioguanine application

The invention discloses a novel fluorescent probe and preparation method and detection in the 6 thioguanine application. DTPA, acetic anhydride and pyridine were slowly stirred and heated at 65 24h. Cooling to room temperature, filtered, anhydrous ether washing, filtering, vacuum drying, dtpaa. Take dtpaa, three ethylamine, DMF, cytosine, and heat 100 24h at a constant temperature. Cool to room temperature, filtering, vacuum drying, DTPA bis (cytosine). DTPA bis (cytosine) dissolved in pH = 7.4 Tris HCl buffer solution, and the solution washing Eu (NO

【技术实现步骤摘要】
一种新型荧光探针及其制备方法和在检测6-硫代鸟嘌呤中的应用
本专利技术属于分析化学领域，尤其涉及新型荧光探针的合成及其对6-硫代鸟嘌呤的检测。
技术介绍
6-硫代鸟嘌呤(6-TG)是鸟嘌呤的类似物，在20世纪50年代初被引入临床和患者的研究。在过去的二十年里，6-硫代鸟嘌呤一直被用来作为白血病治疗的常用药物。近年来，它被应用于治疗乳腺癌。但是6-硫代鸟嘌呤对人体也有一定的危害，它可以抑制鸟嘌呤核苷的合成。6-硫代鸟嘌呤可以整合到CpG位点，并影响DNA甲基化转移酶DNMT1和HpaI介导的胞嘧啶甲基化反应。在从急性淋巴细胞白血病中分离的JurkatT细胞中，6-硫代鸟嘌呤显著降低整体胞嘧啶甲基化水平。而且，6-硫代鸟嘌呤很容易插入到线粒体DNA(mtDNA)中，并引起细胞中线粒体机能失调。除了插入DNA中，6-硫代鸟嘌呤还可以通过活性氧途径(ROS)杀死细胞。ROS作用于DNA，产生强效的强有力地破坏性的复制逮捕DNA病变包括链间交联。因此对6-硫代鸟嘌呤的检测是至关重要的。荧光技术因其具有灵敏度高，操作简便，成本低，选择性好等众多优点，已被广泛应用于生化分析，环境监测，食品分析和临床检验等方面，渗透到化学，生物，物理，环境和医药等多学科研究领域之中。因此，利用荧光技术开发具有实用价值的化学生物探针已成为当前倍受关注的研究课题。其中，荧光探针，日益成为现代生命科学和疾病诊断等领域不可或缺的分子工具。新型荧光探针的设计合成及其应用为目前跨学科的前沿交叉研究热点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于设计合成一种可用于有效检测尿液当中的6-硫代鸟嘌呤的新型荧光探针EuIII-dtpa-bis(cytosine)。本专利技术所涉及化合物属于新型荧光探针，将其应用于检测6-硫代鸟嘌呤操作简单，成本低，无污染，且选择性好。本专利技术采用的技术方案是：一种新型荧光探针，所述的新型荧光探针是EuIII-dtpa-bis(cytosine)。上述的新型荧光探针的制备方法，方法如下：1)取二乙三胺五乙酸(dtpa)、乙酸酐和吡啶，混合均匀，在60-70℃下，搅拌加热22-25h，冷却至室温，过滤，无水乙醚洗涤，抽滤，干燥，得二乙三胺五乙酸二酐(dtpaa)；2)取二乙三胺五乙酸二酐(dtpaa)、三乙胺、无水二甲基甲酰胺(DMF)和胞嘧啶(cytosine)，混合均匀，于95-105℃下，搅拌加热22-25h，静置，冷却到室温，过滤，真空干燥，得二乙三胺五乙酸-双(胞嘧啶)(dtpa-bis(cytosine))；3)将二乙三胺五乙酸-双(胞嘧啶)用pH＝7.4的Tris-HCl缓冲溶液溶解，得dtpa-bis(cytosine)溶液，用dtpa-bis(cytosine)溶液洗涤Eu(NO3)3·6H2O，收集洗涤液，洗涤液于70-80℃下加热20-30min或于室温下放置1-2天，得EuIII-dtpa-bis(cytosine)。优选的，上述的新型荧光探针的制备方法，按摩尔比，二乙三胺五乙酸:乙酸酐:吡啶＝1:4:6。优选的，上述的新型荧光探针的制备方法，按摩尔比，二乙三胺五乙酸二酐:三乙胺:胞嘧啶＝1:3:3。优选的，上述的新型荧光探针的制备方法，按质量比，二乙三胺五乙酸-双(胞嘧啶):Eu(NO3)3·6H2O＝40:1。本专利技术的新型荧光探针可在检测6-硫代鸟嘌呤中应用。方法如下：将6-硫代鸟嘌呤用pH＝7.4的Tris-HCl缓冲溶液溶解。加入由Tris-HCl缓冲溶液配置的pH＝7.4的新型荧光探针EuIII-dtpa-bis(cytosine)，在288nm的激发波长下观察荧光光谱的变化。本专利技术的有益效果是：1.本专利技术，对dtpa进行了修饰，在dtpa两端接上胞嘧啶，由于结构的相似性，通过氢键和π-π堆积以及配位键的作用抓取目标物，从而达到检测6-硫代鸟嘌呤的目的。2.本专利技术针对6-硫代鸟嘌呤的结构特点，设计了一种新型的荧光探针。通过本专利技术的方法，该探针可以对6-硫代鸟嘌呤进行特异性检测。与其它检测6-硫代鸟嘌呤的荧光探针相比，具有简单，快速，成本低等特点。附图说明图1是荧光探针EuIII-dtpa-bis(cytosine)的合成反应的流程图。图2a是dtpa-bis(cytosine)(DC-dtpa)的傅里叶变换红外光谱(FT-IR)图。图2b是胞嘧啶的傅里叶变换红外光谱(FT-IR)图。图2c是dtpa的傅里叶变换红外光谱(FT-IR)图。图3是Eu3+，dtpa-bis(cytosine)(dtpa-DC)，EuIII-dtpa-bis(cytosine)的紫外吸收光谱图。图4a是荧光探针加入不同物质荧光光谱对比图。图4b是荧光探针对不同物质荧光光谱对比图(575nm)。图4c是荧光探针对不同物质荧光光谱对比图(525nm)。图5是荧光探针与6-硫代鸟嘌呤相互作用机理图。图6a是荧光探针对6-硫代鸟嘌呤分别与不同物质混合的干扰荧光光谱对比图。图6b是荧光探针对6-硫代鸟嘌呤分别与不同物质混合的干扰荧光光谱对比图(575nm)。图6c是荧光探针对6-硫代鸟嘌呤分别与不同物质混合的干扰荧光光谱对比图(525nm)。具体实施方式实施例1新型荧光探针EuIII-dtpa-bis(cytosine)(一)制备方法1、二乙三胺五乙酸二酐(dtpaa)的制备称取dtpa7.8100g(0.02mmol)，乙酸酐16.0mL(0.08mmol)，吡啶10.0mL(0.12mmol)置于三颈圆底烧瓶中，在65℃下缓慢搅拌加热24h。冷却至室温，将反应混合物过滤，并用少量无水乙醚洗涤两次，用真空泵抽滤，所得物于真空干燥箱中80℃真空干燥，即得dtpaa。2、二乙三胺五乙酸双胞嘧啶(dtpa-bis(cytosine))的制备取1.9610g的dtpaa(55mmol)、8.0mL(165mmol)的三乙胺、50mL的无水DMF和1.83g(165mmol)的胞嘧啶(cytosine)，于三颈圆底烧瓶。恒温100℃加热，快速搅拌24h。反应完全后静置，冷却到室温后，得白色固体物质，过滤，50℃真空干燥，即得dtpa-bis(cytosine)。3、荧光探针EuIII-dtpa-bis(cytosine)的制备称取0.0724g的dtpa-bis(cytosine)于200.0mL的pH＝7.4的Tris-HCl缓冲溶液中溶解，得dtpa-bis(cytosine)溶液。称取0.0018g的Eu(NO3)3·6H2O置于烧杯中。然后用上面配制的dtpa-bis(cytosine)溶液洗涤三次，洗涤液依次移入250mL容量瓶中，定容。把容量瓶中的溶液于70-80℃下加热20-30min，形成EuIII-dtpa-bis(cytosine)，此时浓度为5.0×10-4mol/L，作为储备液，备用。合成过程如图1所示。(二)检测1.胞嘧啶，dtpa，dtpa-bis(cytosine)的FT-IR图如图2a、图2b和2c所示。通过FT-IR对比发现，在图2a中的dtpa-bis(cytosine)，不仅出现了胞嘧啶的特征衍射峰还出现了dtpa的特征衍射峰，即dtpa-bis(cytosine)中不仅存在dtpa还同时存在胞嘧啶。可本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种新型荧光探针，其特征在于，所述的荧光探针是Eu

【技术特征摘要】
1.一种新型荧光探针，其特征在于，所述的荧光探针是EuIII-dtpa-bis(cytosine)。2.权利要求1所述的新型荧光探针的制备方法，其特征在于，方法如下：1)取二乙三胺五乙酸、乙酸酐和吡啶，混合均匀，在60-70℃下，搅拌加热22-25h，冷却至室温，过滤，无水乙醚洗涤，抽滤，干燥，得二乙三胺五乙酸二酐(dtpaa)；2)取二乙三胺五乙酸二酐(dtpaa)、三乙胺、无水DMF和胞嘧啶，混合均匀，于95-105℃下，搅拌加热22-25h，静置，冷却到室温，过滤，真空干燥，得二乙三胺五乙酸-双(胞嘧啶)(dtpa-bis(cytosine))；3)将二乙三胺五乙酸-双(胞嘧啶)用pH＝7.4的Tris-HCl缓冲溶液溶解，得dtpa-bis(cytosine)溶液，用dtpa-bis(cytosine)溶液洗涤Eu(NO3)3·6H2O，收集洗涤液，洗涤液于70-80℃下加热2...

【专利技术属性】
技术研发人员：王君，杨帆，张朝红，刘逸伦，田凤云，刘冠宏，任佩佩，窦薛楷，宋有涛，
申请(专利权)人：辽宁大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21