本发明专利技术公开了一种O型口蹄疫分子标记疫苗，标记疫苗种毒为rV-O/3Ad病毒，rV-O/3Ad的基因组序列为SEQ?ID?NO：2，所述rV-O/3Ad病毒含3A?91～114位氨基酸的缺失，并且含有缅甸98?VP1氨基酸序列。用本发明专利技术方法得到的疫苗免疫动物5次后，动物血清中检测不到缺失3A?91～114位优势表位的抗体。因此，用本发明专利技术方法得到的疫苗免疫动物，能准确区分感染动物和免疫动物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，尤其涉及的是ー种O型ロ蹄疫分子标记疫苗及其制备方法。
技术介绍
ロ蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是危害偶蹄动物的烈性传染病，尤其对主要畜种猪、牛、羊的危害特别严重，能造成畜种生产カ下降和不良的社会影响，社会经济损失巨大。因该病传染性极强，世界动物卫生组织(FA0/0IE)将其列为头号必报烈性传染病，国际贸易予以严格限制。我国将该病列为ー类动物传染病之首。在世界上许多国家，尤其是非洲、亚洲和南美洲国家，该病发生次数频繁，流行严重。此外，不时出现全球的流行性爆发。ロ蹄疫的病原是ロ蹄疫病韋(foot-and-mouth disease virus, FMDV)。ロ蹄疫病毒有7个血清型(A，O, C，Asial，SATl，SAT2和SAT3)，各型中又有许多基因和抗原性有差异的分离株，差异主要表现在结构蛋白VPl上。VPl是ロ蹄疫病毒的主要抗原表位区，能激发产生主要的中和抗体。ロ蹄疫病毒血清型由结构蛋白决定，非结构蛋白无血清型之分。和大多数病毒一祥，ロ蹄疫病毒的基因组上既有组成病毒粒子的结构蛋白基因，也有仅參与复制过程而非病毒粒子成分的非结构蛋白基因(non-structure proteins, NSPs)(Forss b,btrebe丄 K,Beck E,et al. Nucleotide sequence and genome organization oifoot-and-mouth disease virus,Nucleic Acids Research, 1984,12 :6587-6601,AcharyaR，Fry E，Stuart D I，et al. The three-dimersional structure of foot and mouthdisease virus at 2.9人.Nature，1989，337 :709-716)。ロ蹄疫病毒感染动物后，在体内大量复制时，既能产生结构蛋白(VP4, VP2，VP3和VP1)，也能产生非结构蛋白(L，2A，2B，2C，3A，3B，3C，3D 以及ー些非结构蛋白的前体蛋白，如 3AB，3ABC) (Belsham GJ. Distinctiveieatures of foot-and-mouth disease virus, a member of the picornavirus family ；aspects of virus protein synthesis,protein processing and structure. Prog BiophyMol Biol，1993,60 :241-260.)。两者作为抗原，刺激动物体产生相应的抗体。因此，感染动物体内既有结构蛋白抗体，也有非结构蛋白抗体。据此，可以判定动物是否感染(过)ロ蹄疫病毒。ロ蹄疫病毒感染动物可变成无症状的病毒携帯者，是ロ蹄疫传播的一大隐患。因此，除患病动物外，无症状的病毒携帯者成为预防和控制ロ蹄疫的重点监控对象。预防和控制ロ蹄疫采取的措施是严格检疫，进出ロ限制，屠宰患病动物，及有计划地实施疫苗免疫易感动物。检疫的技术难题是如何区分感染动物和免疫动物。目前，区分ロ蹄疫感染动物和免疫动物的策略是检测ロ蹄疫病毒非结构蛋白抗体。其理论依据是ロ蹄疫病毒在感染动物体内复制产生的非结构蛋白，刺激动物体产生相应的抗体；而疫苗免疫动物的血清中检测不到相应的抗体，因疫苗制造エ艺的除细胞碎片环节去除了大部分非结构蛋白。研究表明，在众多非结构蛋白中，检测3AB或3ABC抗体区分感染动物和免疫动物的可信度最高(Sorensen KJ, Madsen KA, Madsen EA, et al..Differentntiation of infection irom vaccination in foot-and-mouth disease bythe detection of antibodies to the non—structural proteins 3D，3AB and 3ABC inELISA using antigens expressed in baculovirus. Arch Virol,1998,143 :1-16,)。因此，国际上多个实验室建立了不同模式的检测3AB、3A或3ABC抗体ELISA方法(AlfonsoしIavi jo，Peter WrightiPaul Kitchmg, et al. Developments in diagnostic techniquesfor differentiating infection from vaccination in foot-and-mouth disease. TheVeterinary Journal，2004，167 :9 22.)。世界动物卫生组织(FA0/0IE)的动物疫病诊断手册中推荐应用该法(Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrialanimals，http\\www. oie. int)。ロ蹄疫免疫常用疫苗是灭活疫苗。该苗的生产采用的是病毒接种细胞、组织培养物，病毒増殖后，收获培养物，加化学灭活剂(如ニこ烯亚胺，BEI)使病毒失去感染性，与佐剂混合乳化制成疫苗。病毒在细胞内増殖，结构蛋白和非结构蛋白同时表达，但部分非结构蛋白的ー个可能的特性是与细胞膜成份结合，在疫苗制造エ艺的除细胞碎片环节去除了。然而，游离的，以及与病毒粒子大小相近的非结构蛋白复合物是难以清除的，在疫苗中或多或少的残留，多次免疫动物后也能产生相应的抗体(Bergmann I E,Malirat E V,NeitzertE，Beck N，et al. Improvement oi a serodiagnostic strategy for foot-and-mouthdisease virus surveillance in cattle under systematic vaccination a combinedsystem of an indirect ELISA—3ABC with an enzyme—丄inked immunoelectrotransferblot assay. Arch Virol，2000，145 :473 489)，给区分感染动物和免疫动物带来了障碍。世界动物卫生组织(FA0/0IE)的动物疫苗手册中将ロ蹄疫疫苗免疫动物3次能否产生非结构蛋白抗体，作为疫苗评价的一项指标(Manual of diagnostic tests and vaccines forterrestrial animals, http\\www. oie. int)。ロ蹄疫灭活疫苗的制造要动用活病毒，考虑到严格的生物安全，已开始了 ロ蹄疫基因工程疫苗的研制和使用。但ー些基因工程疫苗也使用了 ロ蹄疫病毒的ー些非结构蛋白 因(Abrams C C,King A M Q,Belsham G J. Assembly of foot-and-mouth disease virusempty caps本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘在新，卢曾军，李平花，白兴文，付元芳，孙普，陈应理，李冬，包慧芳，曹轶梅，谢宝霞，殷宏，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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