本发明专利技术涉及靶向因子Xa的抗凝血剂的解毒剂。所述解毒剂是因子Xa蛋白质衍生物，所述因子Xa蛋白质衍生物结合至因子Xa抑制剂，由此实质上中和所述因子Xa抑制剂而不会组装成凝血酶原酶复合物。本文所述衍生物缺少固有凝血活性或具有降低的固有凝血活性。本文揭示了停止或阻止目前正利用因子Xa抑制剂进行抗凝血疗法的患者出血的方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及因子叙^乂幻衍生物的用途，所述因子fe(fXa)衍生物具有降低的固有促凝血活性或没有固有促凝血活性，但能够结合和/或中和fXa抑制剂，由此作为靶向 fXa的抗凝血剂的解毒剂。
技术介绍
市场上在治疗或预防在不活动时或正接受医疗手术时易于形成血凝块的患者 (例如，那些患有凝血病症的患者)的不期望血栓形成时需要抗凝血剂。然而，抗凝血疗法的一个重要限制是与治疗有关的出血风险，且在服用过量或如果需要紧急手术的情况下限制了迅速逆转抗凝血活性的能力。因此，业内极为期望针对所有形式的抗凝血疗法的特定且有效解毒剂。出于安全考虑，同样有利的是在研发新的抗凝血剂药物中获得抗凝血剂-解毒剂对。目前对于过度抗凝血可用的抗凝血剂-解毒剂对是肝素-鱼精蛋白和华法林 (warfarin)-维生素K。新鲜的冷冻血浆和重组因子VIIa(rfVIIa)也已用作在低分子量肝素治疗中正经受严重创伤或严重失血的患者的非特异性解毒剂。(劳里岑(LaUritzen，B.) 等人，血液(Blood), 2005，607A-608A。)还报导了鱼精蛋白片段(美国专利第6，624，141 号)和小的合成肽(美国专利第6，200，955号)作为肝素或低分子量肝素解毒剂；和凝血酶突变蛋白质(美国专利第6，060, 300号)作为凝血酶抑制剂的解毒剂。已报导将凝血酶原中间产物和衍生物作为水蛭素和合成凝血酶抑制剂的解毒剂(美国专利第5，817，309号和第 6，086，871 号)。抗凝血疗法的一种有希望的形式靶向因子fe(fXa)，且实际上，目前在临床研发的不同阶段中有多种直接《a抑制剂用于抗凝血疗法中。这些中的大多数是小分子。尽管这些新的《a抑制剂展示有希望用于治疗，但仍需要特定且有效的解毒剂。在过度抗凝血或利用这些《a抑制剂治疗的患者需要手术的情况下，可能需要一种试剂来实质上中和所投与的一种或多种fXa抑制剂并恢复正常止血。目前可用试剂(例如重组因子Vila(rfVIIa))是以机械方式进行限制且并非特定用于ffe抑制剂的逆转且因此临床医生极为期望经改良的方案。在人类研究中，已经使用 rfVIIa来逆转间接抗凝血酶III依赖性《Ca抑制剂(例如磺达肝素(fondaparinux)和伊达肝素(idraparinux))的作用(比斯特沃特(Bijsterveld，NR)等人，循环(Circulation)， 2002,106 :2550-2554 ；比斯特沃特(Bijsterveld, NR)等人，英国血液病学杂志(British J. of Haematology), 2004 (124) :653-658)。因子 Vlla(fVIIa)的作用机制是与组织因子一起作用将血液循环中存在的因子X(fX)转化成《a来恢复患者的正常止血。必须说明的是， 这种作用模式可能达到以中和活性位点定向《a抑制剂的fXa的最高可能浓度受fX的循环血浆浓度限制。因此，使用rfVIIa来逆转直接《Ca抑制剂的作用的潜力机械上受限。由于fX的循环血浆浓度为150毫微摩尔(“nM”)，所以通过这种模式所产生的fXa的最大量将为150nM。因此，使用rfVIIa来逆转直接ffe抑制剂的作用的潜力机械上受限。小分子 fi(a抑制剂(例如利伐沙班(rivaroxaban))的报告治疗浓度(大约600nM，库比察(Kubitza D)等人，欧洲临床药理学杂志(Eur. J. Clin. Pharmacol)，2005，61 :873-880)高于由 rfVIIa 所生成的fXa的可能量。因此，使用rfVIIa来逆转由《a抑制剂所产生的治疗或超治疗水平的抗凝作用将提供不充分的效能水平。如图4中所示，在中和因子叙抑制剂贝特沙班 (betrixaban)的抗凝血活性中使用rfVIIa具有有限的作用(如下文所阐述)。重组fVIIa 展示50nM至IOOnM的剂量反应解毒活性，但所述作用在IOOnM至200nM之间趋于稳定，此表明其解毒作用受除其浓度以外的因素的限制。在所有所测试的rfVIIa浓度中，贝特沙班在250nM的浓度下仍展示fXa的剂量反应抑制(高达约75%抑制)。此观察结果与fVIIa 的建议作用机制一致。此结果还被展示rfVIIa不能完全逆转磺达肝素对凝血酶生成和凝血酶原活化的参数的抑制作用的研究所支持。(吉偌提法斯(Gerotiafas，GT)等人，血栓形成和止血(Thrombosis &Haemostasis) 2204 (91) :531-537)。外源活性fXa不能以类似于rfVIIa的方式直接投与个体。不像rfVIIa在缺少其辅因子组织因子的情况下具有极低促凝血活性那样，天然fXa是强效酶且具有造成血栓形成的潜在风险。因此，使用rfVIIa或活性《Ca作为《Ca抗凝血疗法的解毒剂具有许多缺点。因此，需要经改良的解毒剂，其不会造成不期望的血栓形成且在《Ca抑制剂服用过量的情况下或在需要恢复正常止血以阻止或停止出血的情况下有效地实质上中和fXa 抑制剂的抗凝血活性。本文所提及的任何及所有出版物、专利和专利申请案均以整体引用的方式并入本文中。
技术实现思路
现在已发现，投与fXa蛋白质的经修饰衍生物可用作靶向fXa的抗凝血剂的解毒剂。所述《a蛋白质的经修饰衍生物并不与fXa竞争组装成凝血酶原酶复合物，而是结合和/或实质上中和抗凝血剂(例如fXa抑制剂)。可用作解毒剂的衍生物经修饰以降低或去除固有的促凝血和抗凝血活性，同时保留结合至抑制剂的能力。预计本专利技术的衍生物可包括修饰活性位点、或改变Gla结构域或自《a去除整个Gla结构域、或其各种组合。由于已知活性位点经修饰的全长fXa是抗凝血剂，因此进一步预计修饰Gla结构域将降低或消除fXa衍生物对正常止血的抗凝血作用。进一步预计，修饰fXa的EGF结构域(通过EGF1、EGF2、或EGFl和EGF2两个结构域的缺失或取代)提供用于本专利技术方法的衍生物。EGF结构域修饰可单独实施或连同Gla 结构域修饰一起实施。在一个实施例中，衍生物保留结合靶向fXa的抗凝血剂(或《a抑制剂)所需的结构特性。通过衍生物直接或间接结合抑制剂，抑制剂实质上被中和。在一个方面中，本专利技术提供阻止或降低正利用因子叙抑制剂进行抗凝血疗法的个体出血的方法，其包含向所述个体投与有效量的因子fe蛋白质衍生物，所述衍生物结合至因子叙抑制剂但不会组装成凝血酶原酶复合物。在一个实施例中，衍生物具有一个或一个以上的以下性质降低的促凝血活性或没有促凝血活性；经修饰或去除的Gla结构域；和经修饰的活性位点。本专利技术的衍生物选择性地结合并抑制以外源方式投与的因子fe抑制剂，由此实质上中和《a抑制剂的抗凝血活性。此方法涵盖活体外和活体内方法二者。本专利技术所涵盖的对因子)(a蛋白质的各种修饰可在整个具体实施方式中找到。应了解，本专利技术所涵盖的衍生物不是血浆源性因子Vila、重组因子Vila、新鲜冷冻血浆、凝血酶原复合物浓缩物、或全血。本专利技术的一个方面是使用因子)(a衍生物和含有其的组合物来治疗已接受或正利用因子fe抑制剂接受过度抗凝血疗法的患者或之前已投与因子fe抑制剂且然后需要止血的患者(例如非急需或急诊手术可能需要)。在一个方面中，经修饰《a蛋白质不同于天然存在的f本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：卢根民，戴维·R·菲利普斯，帕特里克·安德烈，乌马·辛哈，
申请(专利权)人：普托拉制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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