本发明专利技术涉及生物技术领域，具体的说是一种嗜盐曲霉菌F1及其应用。嗜盐曲霉菌F1(Aspergillus?sp.F1)，保藏于中国典型培养物保藏中心(中国武汉大学内)，保藏号为：CCTCC?NO：M?2011277，保藏日期为：2011年8月4日。并且将该菌株发酵后其40升发酵产物可分别获得Rosellichalasin和Cytochalasin?E纯品约1.5克和2.0克，纯度达99％以上。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，具体的说是一种嗜盐曲霉菌Fl及其应用。
技术介绍
细胞松弛素类化合物是一类由真菌代谢产生的毒素，它们中有一些具有显著的生物学活性，如抑制哺乳动物细胞分裂、抑制HIV-I蛋白酶、抗菌和抗肿瘤等活性。细胞松弛素因为具有改变细胞微结构的作用，因此成为细胞生物学中细胞微结构和功能研究的常用工具，用于探讨细胞分裂、细胞运动和吞噬、细胞核和质的关系和细胞生物合成等生命活动。细胞松弛素类化合物Rosellichalasin，Cytochalasin E分别对大肠杆菌，假单胞菌，白色念珠菌都有一定的抑制作用。Cytochalasin E是目前国内外应用较为广泛的细胞松弛素类化合物，它作为动植物细胞结构和功能研究的常用工具，表现出独特的选择多样性，尤其是，它作为一种血管生成抑制剂，并不抑制葡萄糖的转运，这一点是其它细胞松弛素类化合物所不具备的。据文献报道，Cytochalasin E在浓度为10_9-10_6mol/L时，通过抑制肌动蛋白的聚合来抑制肿瘤细胞的增殖，在浓度为10-14-10_9mOl/L时，通过其它途径来抑制肿瘤细胞的增殖。Cytochalasin E有望被用来治疗与血管生成相关的癌症和老年性黄斑退化病。由于Cytochalasin E结构复杂，难以人工合成，并且目前细胞松弛素类工具化合物多为进口产品，商品价格偏高，因此，开发具有我国自主知识产权的高产Cytochalasin E微生物菌株显得尤为必要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供嗜盐曲霉菌Fl及其应用。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为一种嗜盐曲霉菌Fl (Aspergillus sp. Fl)，保藏于中国典型培养物保藏中心(中国武汉大学内)，保藏号为CCTCC NO =M 2011277，保藏日期为2011年8月4日。嗜盐曲霉菌Fl的应用，将所述嗜盐曲霉菌Fl发酵培养于Fl的液体发酵培养基中发酵培养，所得发酵物经纯化分离即得到细胞松弛素类化合物Rosellichalasin和Cytochalasin E0将所述嗜盐曲霉菌Fl发酵培养于Fl的液体发酵培养基中于观_301静止发酵培养25-30天所得发酵物经纯化分离即得到细胞松弛素类化合物Rosellichalasin和Cytochalasin E0所述发酵物经纯化分离为将发酵培养后的发酵物的菌丝体和发酵液过滤分离，将菌丝体用其2倍体积乙醇浸提4-5次，再用过量的乙酸乙酯萃取10-15次，将乙酸乙酯萃取液减压浓缩，得粗浸膏，然后采用硅胶柱层析、重结LH-20凝胶柱层分离纯化，即分别得到 Rosellichalasin 和 Cytochalasin E。将所述浸膏用乙酸乙酯溶剂溶解后，加200-300目硅胶搅拌，减压除去溶剂后，用硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯为溶剂进行梯度洗脱，洗脱速率20ml/min，收集石油醚-乙酸乙酯比例为2 1 (ν/ν)洗脱液，经TLC检测收集Rf = 0.575组分，洗脱组分减压浓缩至干，再在正己烷-乙酸乙酯比例为1 1 (ν/ν)中重结晶，收集无色针状晶体Rosellichalasin ；或收集石油醚-乙酸乙酯比例为1 2 (ν/ν)洗脱液，经TLC检测收集Rf = 0.35组分，洗脱组分减压浓缩至干，再在己烷-丙酮比例为1 1中重结晶，收集无色针状晶体Cytochalasin E ；将上述所得无色针状晶体分别经kphadex LH_20柱层析，用甲醇洗脱，洗脱速率为，5ml/min，洗脱液减压浓缩至干，分别得白色无定形物。所述石油醚-乙酸乙酯梯度为100 0-0 100 (ν/ν)；正己烷-乙酸乙酯比例为1 1 (ν/ν)；己烷-丙酮比例为1 1(ν/ν)。所述嗜盐曲霉菌Fl的液体发酵培养基成分为葡萄糖2.0% (W/V)，海盐6.0% (W/V)，马铃薯200克，加适量水煮沸30分钟，4层纱布过滤，滤液用蒸馏水定容至1升。本专利技术所具有的优点本专利技术所述嗜盐曲霉菌Fl (Aspergillus sp. Fl)，保藏于中国典型培养物保藏中心(中国武汉大学内)，保藏号为CCTCC NO =M 2011277，保藏日期为2011年8月4日。该菌株采用价格便宜的改良土豆培养基培养，静止发酵，无需摇床震荡培养，发酵过程中，无需调试PH值和补料，即可得到大量菌丝体，降低了发酵过程中的能耗，并且将该菌株发酵后其40升发酵产物经过简单纯化即可分别获得Rosellichalasin和Cytochalasin E纯品约1. 5克和2. 0克，纯度达99%以上，产量高，发酵和制备成本低，并且制备过程中所用试剂乙醇，乙酸乙酯和甲醇等试剂可循环回收利用，大大降低了有机溶剂对环境的污染。由于Cytochalasin E是目前细胞松弛素类化合物中应用最为广泛，活性最好的细胞松弛素类工具化合物，故本专利技术所述嗜盐曲霉菌Fl是一株颇有市场潜力的细胞松弛素类化合物Rosellichalasin 禾口 Cytochalasin E 产业化菌株。附图说明图1为本专利技术实施例提供的细胞松弛素类化合物结构式；图2为本专利技术实施例提供的细胞松弛素类化合物结构式。具体实施例方式本专利技术的化合物可通过微生物发酵培养来获取，首先获得含有该化合物的发酵物，然后采用硅胶柱层析、重结晶和kphadex LH-20凝胶柱层析等方法从发酵产物中分离纯化得到。嗜盐曲霉菌Fl (Aspergillus sp. Fl)，保藏于中国典型培养物保藏中心(中国武汉大学内)，保藏号为CCTCC NO =M 2011277，保藏日期为2011年8月4日。该菌株菌丝为白色，褐色孢子丰富，以子囊孢子和菌丝分裂两种方式繁殖，产褐色色素，可耐受18%的高盐环境，属于中等嗜盐菌，在海盐浓度为3-6% (w/v)长势旺盛。嗜盐曲霉菌Fl产生的细胞松弛素类化合物的方法1、化合物的发酵生产及分离精制(1)发酵生产生产菌的发酵培养按培养微生物的常规方法，取曲霉菌Fl适量，接种到PDA固体斜面培养基上，在30°C恒温培养箱中培养4天。取斜面培养4天的曲霉菌Fl适量，接种到装有400ml培养液的IOOOml锥形瓶中， 30°C静止培养30天。获得菌丝体和发酵液(40升)。所述培养液组成(克/升)葡萄糖2. 0% (W/V)，海盐6. 0% (W/V)，马铃薯200 克，加适量水煮沸30分钟，4层纱布过滤，滤液用蒸馏水定容至1升，pH6. 5-7. 0。(2)发酵产物的分离提纯用棉布将菌丝体和发酵液分离，将菌丝体用其2倍体积的95 %的乙醇浸提4-5次， 浸提液减压浓缩至膏状，得乙醇粗提物，加水溶解，再用等体积乙酸乙酯萃取10-15次，萃取液减压浓缩得乙酸乙酯粗浸膏(20克)。(3)化合物的分离精制及薄层色谱表征浸膏用乙酸乙酯溶剂充分溶解后，加硅胶Q00-300目)搅拌，减压除去溶剂后，干法上样，用硅胶柱层析(60x5cm)，以石油醚-乙酸乙酯(100 0,50 1,20 1,10 1， 2 1,1 2,0 100)为溶剂进行梯度洗脱，洗脱速率为20ml/min。收集经硅胶柱石油醚-乙酸乙酯比例为2 l(v/v)洗脱系统得到组分即为 Rosellichalasin，所得洗脱液经薄层色谱TLC检测收集Rf 本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：林秀坤，肖琳，吴宁，刘明，刘海洲，魏鉴腾，赵进，王惠，王凤霞，郭颖，
申请(专利权)人：中国科学院海洋研究所，
类型：发明
国别省市：
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